Facultad de Medicina
Carrera de Bioquímica Clinica
Manual de prácticas de Laboratorio de Bioquímica Clínica III Plan: B011
Cód. asignatura: Q0224-05
Nivel: Q108-07-70 Versión: 2.0 Página 48 de 157
PRÁCTICA 6 – DETERMINACIÓN DE Na, K y Cl 1. Objetivo • •
Determinar la concentración de electrolitos en muestras sanguíneas proporcionadas para establecer condiciones patológicas relacionadas con el equilibrio hidroelectrolítico. Aplicar fórmulas matemáticas para calcular varias magnitudes relacionadas con el equilibrio hidroelectrolítico tanto en suero como en orina.
2. Resultados de aprendizaje esperados •
Describir los procesos fisiológicos y fisiopatológicos de la función ósea, del equilibrio hidroelectrolítico, a sistema endócrino, aparato genital masculino, femenino y drogas de abuso en base a referentes teóricos.
•
Seleccionar el método de análisis más adecuado para la determinación de marcadores óseos, electrolitos, gases sanguíneos, hormonas, marcadores tumorales y drogas de abuso, teniendo en cuenta las características técnicas de cada uno de ellos.
•
Correlacionar los resultados de laboratorio con el estado de salud del paciente de acuerdo con lo descrito en la literatura médica.
3. Fundamento teórico El cuerpo humano de un individuo promedio de 70 Kg contiene aproximadamente 3 700 mmol de sodio, de los cuales, 75% son intercambiables. La otra parte se denomina no intercambiable lo que significa que se encuentra incorporado a tejidos como los huesos y por lo tanto es difícil de movilizar. La parte intercambiable se encuentra en el líquido extracelular (plasma y líquido intersticial) y está estrechamente regulada con un valor de 140 mmol/L. 3.1 Ingesta de Sodio La ingesta de sodio es variable y depende de temas culturales, por ejemplo, en sociedades occidentales, la ingesta oscila entre menos de 100 mmol/L a más de 300 mmol/L. Los individuos sanos no experimentan variaciones del sodio corporal total, incluso aunque la ingesta se reduzca hasta 5 mmol/día o aumente hasta más de 750 mmol/día. La excreción de sodio también es muy variable. En término generales, la excreción de sodio coincide con la ingesta. La mayor parte del sodio se elimina por la vía renal, algo en el sudor (aproximadamente 5 mmol/día) y en las heces (en torno a 5 mmol/día). Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
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Cód. asignatura: Q0224-05
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En presencia de patologías, el tubo digestivo puede convertirse en la vía principal de pérdida de sodio, sobre todo en condiciones pediátricas, ya que la diarrea infantil puede ocasionar la muerte debido a pérdidas masivas de sales y agua. 3.2 Regulación en la excreción de Sodio La excreción urinaria de sodio está regulada por dos hormonas: Aldosterona y Péptido natriurético auricular. 3.2.1
Aldosterona
Esta hormona regula la excreción de sodio por la orina, reduciendo su excreción mediante el aumento de la reabsorción de sodio en los túbulos renales, a expensas de iones potasio e hidrogeniones. La aldosterona también regula la conservación de sodio por pate de las glándulas sudoríparas y las células de la mucosa del colon, pero en circunstancias normales, estos efectos carecen de importancia. La secreción de aldosterona está dada por cambios en el volumen del líquido extracelular. El aparato yuxtaglomerular de la nefrona posee unas células especializadas capaces de detectar disminuciones en la presión arterial, ante lo que secreta renina. La renina inicia una secuencia de reacciones que conduce, finalmente a la secreción de aldosterona, por parte de la zona glomerular de la corteza suprarrenal, como se muestra en la Gráfica 7.
Gráfica 7 Regulación Sodio - Aldosterona
Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
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Coordinador Carrera 20/08/2020
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3.2.2
Cód. asignatura: Q0224-05
Nivel: Q108-07-70 Versión: 2.0 Página 50 de 157
Péptido natriurético auricular
El péptido natriurético auricular es una hormona polipeptídica secretada por los cardiocitos de la aurícula derecha del corazón. Su acción está relacionada directamente con la excreción urinaria de sodio, con la regulación del volumen extracelular y el equilibrio del sodio. 3.3 Regulación del volumen Es importante entender que para que el agua no escape del compartimiento extracelular precisa que sea retenida allí, mediante la acción osmótica de los iones. Uno de los principales iones osmóticamente activos es el sodio, aunque no el único (y sus correspondientes aniones, fundamentalmente cloruro) que como sabemos se encuentra en el espacio extracelular, por lo tanto, el contenido de sodio del LEC es el factor principal que determina el volumen de este compartimiento. Las interacciones entre la aldosterona y la ADH mantienen el volumen y la concentración del LEC dentro de la normalidad.
4. Actividades prácticas Para abordar este tema, se desarrollará la determinación de sodio sérico en muestras biológicas entregadas por el profesor. 4.1 Método de cuantificación El método estándar para la determinación de sodio es absorción atómica, sin embargo, para su análisis clínico se emplean métodos que forman complejos coloridos o buscan su precipitación. Para la determinación de la concentración de Sodio, se buscará formar un precipitado con acetato de uranilo. Los iones de uranilo que permanecen en suspensión forman un color café amarilloso con ácido tioglicólico. La diferencia entre el blanco del reactivo (sin precipitación de sodio) y la muestra es proporcional a la concentración de sodio. 4.2 Reactivos, materiales y equipos Para realizar esta práctica, necesitaremos de los siguientes insumos y reactivos:
Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
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Coordinador Carrera 20/08/2020
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Tabla 17 Insumos para realizar la determinación de Sodio
REACTIVOS Reactivo para determinación Sodio REF 573351 Agua Destilada Tipo II
MATERIALES
EQUIPOS
Puntas amarillas nuevas
Espectrofotómetro
Pipetas azules nuevas
Baño María
Tubos plásticos 12 x 75 nuevos
Sistema Recirculación
Guantes descartables
Centrífuga sobre mesa
Vasos para descartar puntas 1 ml de Suero fresco
4.3 Procedimiento La determinación de sodio sérico se llevará a cabo con forme las recomendaciones del fabricante en su inserto del kit REF 573351 INF 57335101 E. En función de la matriz a ser usada, vamos a determinar sodio en suero. 4.3.1.1 Preparación de la muestra: suero En este caso, se recomienda esperar treinta minutos para conseguir una coagulación completa en muestras obtenidas sin anticoagulante; se recomienda una fuerza de centrifugación de 1300 a 2000 g por el lapso de 10 minutos. Para nuestro caso, vamos a usar el procedimiento Semi-micro. 4.3.1.2 Esquema de pipeteo Semi-micro El esquema de pipeteo se describe en la tabla 18. Esta fase nos permitirá obtener un sobrenadante tanto para el estándar como para la muestra a ser analizada. Tabla 18 Esquema Semi-micro para sodio sérico
Reactivos y reactantes Blando de reactivo Estándar Muestra Precipitante
Blanco de reactivo ---------
Estándar ---20 μL --1000 μL
Muestra --------20 μL 1000 μL
Realizar esta mezcla en tubos cónicos de plásticos de 5 ml nuevos. La mezcla debe ser tapada con cuidado y se debe mezclar, con agitación vigorosa por lo menos 30 segundos. Una vez realizado este Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
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Coordinador Carrera 20/08/2020
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VersiĂłn: 2.0
CĂłd. asignatura: Q0224-05
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paso, se debe permitir que los tubos reposen un lapso de 5 minutos. Terminado este plazo, se debe permitir que los tubos permanezcan 30 minutos en posiciĂłn vertical. Termino este periodo de espera, se debe centrifugar los tubos por el lapso de 5 a 10 minutos a una alta velocidad. 4.3.1.3 Esquema de pipeteo para reacciĂłn de cuantificaciĂłn Una vez terminado el tiempo de centrifugaciĂłn, retirar los tubos con extremo cuidado para evitar que el sobre nadante se mezcle. Con este sobrenadante seguir el siguiente esquema de pipeteo: Tabla 19 Esquema pipeteo determinaciĂłn de sodio sĂŠrico
PRECIPITADO Reactivo Precipitante Sobrenadante claro Reactivo
EstĂĄndar ---20 ÎźL 1000 ÎźL
Blanco de reactivo 20 ÎźL --1000 ÎźL
Muestra ----20 ÎźL 1000 ÎźL
Se debe realizar una mezcla prolija en esta fase a los tres tubos. Permitir un tiempo de estabilidad entre 5 a 30 minutos, antes de realizar las lecturas en el espectrofotĂłmetro. 4.4 Procedimientos de lectura en espectrofotĂłmetro Las tres absorbancias deben ser leĂdas frente al blanco de reactivo elaborado a una longitud de 405 a 410 nm. Para encerar el sistema, se recomienda usar agua destilada.
5. CĂĄlculos y/o resultados La concentraciĂłn de sodio debe ser calculada de la siguiente manera: đ?‘ đ?‘Ž đ?‘ ĂŠđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘‘đ?‘œ = 150 Ă—
(∆đ??´đ?‘?đ?‘ đ??ľđ?‘™đ?‘Žđ?‘›đ?‘?đ?‘œ đ?‘&#x;đ?‘’đ?‘Žđ?‘?đ?‘Ąđ?‘–đ?‘Łđ?‘œ − ∆đ??´đ?‘?đ?‘ đ?‘€đ?‘˘đ?‘’đ?‘ đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Ž) (∆đ??´đ?‘?đ?‘ đ??ľđ?‘™đ?‘Žđ?‘›đ?‘?đ?‘œ đ?‘&#x;đ?‘’đ?‘Žđ?‘?đ?‘Ąđ?‘–đ?‘Łđ?‘œ − ∆đ??´đ?‘?đ?‘ đ?‘†đ?‘Ąđ?‘Žđ?‘›đ?‘‘đ?‘Žđ?‘&#x;)
Por ejemplo: đ?‘ đ?‘Ž đ?‘ ĂŠđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘‘đ?‘œ = 150 Ă—
(0.850 − 0.941) (0.850 − 0.950)
đ?‘ đ?‘Ž đ?‘ ĂŠđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘‘đ?‘œ = 137 đ?‘šđ?‘šđ?‘œđ?‘™/đ??ż
ElaborĂł:
MĂĄster Oscar Puente
RevisĂł:
Dr. Santiago Escalante
AprobĂł:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
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De forma complementaria, las determinaciones de sodio sĂŠrico o plasmĂĄtico nos permiten calcular otras magnitudes que nos ayudan a interpretar y a valorar el balance hidroelectrolĂtico de una persona. A continuaciĂłn, adjuntamos algunas fĂłrmulas relacionadas:
•
Osmolalidad plasmĂĄtica [2(đ?‘ đ?‘Ž + )] + [
•
đ??şđ??żđ?‘ˆđ??śđ?‘‚đ?‘†đ??´ đ??ľđ?‘ˆđ?‘ ]+[ ] 18 2,80
Osmolalidad urinaria [2(đ?‘ đ?‘Ž đ?‘˘đ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Žđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘œ + )] + [
đ??şđ??żđ?‘ˆđ??śđ?‘‚đ?‘†đ??´ đ?‘œđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Ž đ??ľđ?‘ˆđ?‘ đ?‘œđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Ž ]+[ ] 18 2,80
•
FracciĂłn excretada de sodio (đ?‘ đ?‘Ž đ?‘˘đ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Žđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘œâ „đ?‘ đ?‘Ž đ?‘?đ?‘™đ?‘Žđ?‘ đ?‘šĂĄđ?‘Ąđ?‘–đ?‘?đ?‘œ ) đ?‘Ľ 100 (đ??śđ?‘&#x;đ?‘’đ?‘Žđ?‘Ąđ?‘–đ?‘›đ?‘–đ?‘›đ?‘Ž đ?‘œđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Žâ „đ??śđ?‘&#x;đ?‘’đ?‘Žđ?‘Ąđ?‘–đ?‘›đ?‘–đ?‘›đ?‘Ž đ?‘?đ?‘™đ?‘Žđ?‘ đ?‘šĂĄđ?‘Ąđ?‘–đ?‘?đ?‘Ž)
•
Carga neta urinaria (đ?‘ đ?‘Ž đ?‘˘đ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Žđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘œ + + đ??ž đ?‘˘đ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Žđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘œ + ) − đ??śđ?‘™ đ?‘˘đ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Žđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘œ −
6. Conclusiones y recomendaciones Al final de la pråctica, el alumno deberå demostrar: • •
Determinar la concentraciĂłn de sodio en muestras sanguĂneas proporcionadas por el profesor e informarlas de manera formal como evidencia de su prĂĄctica de laboratorio Calcular e incluir al menos 3 parĂĄmetros adicionales al sodio determinado en el laboratorio para aplicar los conceptos de balance hidroelectrolĂtico en su informe de resultados.
7. Anexos relacionados
Equilibrio Agua.pdf
Hipo hipernatremia.pdf
ElaborĂł:
MĂĄster Oscar Puente
RevisĂł:
Dr. Santiago Escalante
AprobĂł:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
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Nivel: Q108-07-70
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Cód. asignatura: Q0224-05
Versión: 2.0 Página 54 de 157
8. Bibliografía Antoni Castells, H. C. (2017). Test de Laboratorio en Gastroenterología y Hepatología (Vol. 10). (J. C.-P. Santos Santolaria, Ed.) Barcelona, España: ELSEVIER. Baxter Healthcare Corporation. (1997). Centrifuge guide. Biotech Group. USA. Carrillo, E. R., & Cuenca, D. J. F. (Eds.). (2009). Clínica de líquidos y electrolitos. Retrieved from https://ebookcentral.proquest.com Gaw, A. (2015). Bioquímica Clínica - Texto a atlas a color (5tq ed.). Barcelona: ELSEVIER. John W. Baynes, Marek H. Dominiczak. (2015). Bioquímica médica (4a. Ed. ed.). Barcelona: Elsevier. Rodwell, V. W. (2016). Harper : bioquímica ilustrada (30a. Ed. ed.). México: McGraw-Hill. Shauna Anderson, S. C. (1995). Bioquímica Clínica. Philadelphia: Interanericana McGraw-Hill.
Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020