Facultad de Medicina
Carrera de Bioquímica Clinica
Manual de prácticas de Laboratorio de Bioquímica Clínica III Plan: B011
Cód. asignatura: Q0224-05
Nivel: Q108-07-70 Versión: 2.0 Página 36 de 157
PRÁCTICA 4 – DETERMINACIÓN DE MAGNESIO 1. Objetivo • •
Demostrar la importancia en la determinación de magnesio extracelular en mujeres embarazadas para el control de preeclampsia. Relacionar la presencia de magnesio con iones como potasio y calcio para el correcto funcionamiento y homeostasis de las células y el cuerpo humano.
2. Resultados de aprendizaje esperados •
Describir los procesos fisiológicos y fisiopatológicos de la función ósea, del equilibrio hidroelectrolítico, a sistema endócrino, aparato genital masculino, femenino y drogas de abuso en base a referentes teóricos.
•
Correlacionar los resultados de laboratorio con el estado de salud del paciente de acuerdo con lo descrito en la literatura médica.
•
Ejecutar los procesos preanalíticos, analíticos y posanalíticos para la determinación de marcadores óseos, electrolitos, gases sanguíneos, hormonas, marcadores tumorales y drogas de abuso, teniendo en cuenta las normas de bioseguridad y el control de calidad respectivo.
3. Fundamento teórico 3.1 Magnesio El magnesio (Mg++) es el segundo catión más abundante en el medio intracelular, después del potasio. Su actividad principal está centrada en ser “cofactor” para todas las reacciones enzimáticas que involucran al trifosfato de adenosina (ATP) como la glicólisis, el metabolismo oxidativo. (Gaw, 2015) Este ion también está involucrado en el transporte de potasio y calcio a través de las membranas biológicas para mantener la excitabilidad eléctrica de las células musculares y nerviosas. Más de la mitad de los depósitos corporales totales se localizan en el hueso, y menos de un 1 %, en el plasma, en su forma extracelular, por lo tanto, los niveles pueden ser normales frente a una depleción o un exceso de este ion. (Antoni Castells, 2017)
Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
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Otra función importante del Magnesio es modular tanto la secreción como los efectos de la Paratohormona. Una hipomagnesemia acusada puede conducir a hipoparatiroidismo con hipocalcemia refractaria, que suele ser corregible aportando magnesio. El origen del magnesio es vegetal, ya que forma parte de la clorofila. Lo podemos encontrar en las verduras (fuente principal), cereales y las carnes. La ingesta media diaria de magnesio es de 360 mg (15 mmol); aproximadamente un 30% es absorbido, principalmente en el íleo. A su vez, el intestino delgado segrega aproximadamente 40 mg y otros 20 mg son absorbidos en el intestino grueso. En individuos adultos, no se existe una ganancia o pérdida neta de magnesio a partir del hueso (que como a dijimos es el reservorio principal), de manera que el equilibrio se consigue mediante la excreción urinaria de los aproximadamente 100 mg que se absorben. Los cambios en la ingesta se compensan con los cambios en la reabsorción de magnesio urinario, principalmente en el asa de Henle y el túbulo distal. En el gráfico 6, podemos esquematizar la distribución corporal del magnesio, su ingesta y excreción.
Gráfico 6 Equilibrio normal del magnesio
Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
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Docente 11/08/2020
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Coordinador Carrera 20/08/2020
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4. Actividades prácticas La práctica nos permitirá realizar la determinación de magnesio plasmático en muestras biológicas asignadas a cada alumno. 4.1 Método de cuantificación La determinación de la concentración de magnesio puede ser realizar por varios métodos: absorción atómica, uso de la Calmagita, clorofosfonazo III o el azul de xilidil. Para evitar problemas con la actividad del calcio, se agregan agentes bloqueantes en exceso como el ácido glicoleterdiaminaN,N,N1,N1-tetraacético (GEDTA). En nuestra práctica, vamos a usar el método del Azul de Xilidil, el cual requiere de un ambiente alcalino para formar un complejo que generará un compuesto de color azul, el cual es directamente proporcional a la concentración de magnesio en las muestras. 4.2 Reactivos, materiales y equipos Tabla 15 Insumos requeridos para la determinación de Magnesio
REACTIVOS Reactivo para determinación Magnesio REF 10010
MATERIALES
EQUIPOS
Puntas amarillas nuevas
Espectrofotómetro
Pipetas azules nuevas
Baño María
Tubos plásticos 12 x 75 nuevos
Sistema Recirculación
Guantes descartables Vasos para descartar puntas 1 ml de Suero fresco Tirilla de orina 1 ml de orina espontánea
4.2.1
Procedimiento
La determinación de magnesio se llevará a cabo con forme las recomendaciones del fabricante en su inserto del kit REF 10010 INF 101001 E 10 -2005-13. En función de la matriz a ser usada, vamos a determinar magnesio en suero u orina, según el caso procedemos: 4.2.1.1 Preparación de la muestra: suero En este caso, se recomienda esperar treinta minutos para conseguir una coagulación completa en muestras obtenidas sin anticoagulante; se recomienda una fuerza de centrifugación de 1300 a 2000 g por el lapso de 10 minutos. Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
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Docente 11/08/2020
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Coordinador Carrera 20/08/2020
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El esquema de pipeteo se describe en la tabla 16. Es importante hacer un blanco de reactivo. Tabla 15 Esquema de pipeteo para magnesio sérico
Reactivos y reactantes Muestra Estándar Agua destilada Reactivo
Determinación 10 μL 10 μL --1000 μL
Blanco de reactivo ----10 μL 1000 μL
Al generar un compuesto de color azul, la lectura debe realizarse a 546 nm frente a un blanco de reactivo. Una vez realizar la mezcla, se debe incubar la mezcla por diez minutos a temperatura de 20 o a 25o Centígrados. Esta mezcla es estable hasta 1 hora para realizar la lectura. 4.2.1.2 Preparación de la muestra: orina En cierto tipo de pacientes (Síndrome de Gitelman o Síndrome de Barter) se requiere medir la concentración de magnesio en orina, debido a posibles fallas renales. Los niveles altos de magnesio en plasma solo se observan en pacientes con función renal disminuida después de la administración de una carga de magnesio lo suficientemente grande como para exceder la capacidad de los riñones para excretarla, o una combinación de ambos. El magnesio es un inhibidor del crecimiento de los cristales formados por calcio y contribuye a la sobresaturación de oxalato de calcio y fosfato de calcio en la orina. Sin embargo, el bajo nivel de magnesio en orina en forma aislada no se ha identificado como una causa común de cálculos renales, ni se ha demostrado que la ingesta con suplementos de magnesio sea una terapia efectiva para la prevención de cálculos. (Mayo Clinic Laboratoris, 2019) Las muestras de orina que serán sometidas a este análisis deben ser corregidas el pH. Por lo tanto, se deberá realizar primero una determinación de pH urinario con la ayuda de una tirilla de orina. Se requiere un pH entre 3 y 4 para garantizar un análisis exitoso. Esto puede conseguirse adicionando unas gotas de ácido clorhídrico concentrado. A la orina ajustada se la deberá diluir con agua destilada 1:5. La determinación de magnesio en orina se procede de igual forma como se describe en la tabla 18. 4.3 Fuentes de error No se debe usar plasma obtenido a partir de EDTA. Elaboró:
Máster Oscar Puente
Revisó:
Dr. Santiago Escalante
Aprobó:
Dr. Santiago Escalante
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Docente 11/08/2020
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Coordinador Carrera 20/08/2020
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Coordinador Carrera 20/08/2020
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VersiĂłn: 2.0 PĂĄgina 40 de 157
No realizar una adecuada homogenizaciĂłn en las muestras de orina. Usar material contaminado, reusado o de vidrio podrĂa generar contaminaciĂłn cruzada. 4.4 Valores de referencia La concentraciĂłn de magnesio, para pacientes aparentemente, se describe en la tabla 16. Tabla 16 Intervalo de referencia de Magnesio
Matriz suero, plasma Orina espontĂĄnea Orina de 24 horas
Magnesio 1,9 – 2,5 mg/dL 1 – 1 0 mg/dL 50 – 150 mg/24h
4.5 Valores de alerta Las mujeres con preeclampsia deber ser evaluadas constantemente por el laboratorio clĂnico. El tratamiento de elecciĂłn para esta condiciĂłn es la infusiĂłn de magnesio de forma intravenosa, para reducir las convulsiones y reducir la presiĂłn arterial, por lo tanto, la determinaciĂłn de magnesio es de vital importancia en este tipo de pacientes.
5. CĂĄlculos y/o resultados Para esta prĂĄctica, una vez obtenidas las absorbancias, se aplicarĂĄ la fĂłrmula de Lamber y Beer: đ??śđ?‘œđ?‘›đ?‘?đ?‘’đ?‘›đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Žđ?‘?đ?‘–Ăłđ?‘› đ?‘‘đ?‘’ đ?‘šđ?‘Žđ?‘”đ?‘›đ?‘’đ?‘ đ?‘–đ?‘œ đ?‘ ĂŠđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘?đ?‘œ = đ??śđ?‘œđ?‘›đ?‘?đ?‘’đ?‘›đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Žđ?‘?đ?‘–Ăłđ?‘› đ?‘‘đ?‘’ đ?‘šđ?‘Žđ?‘”đ?‘›đ?‘’đ?‘ đ?‘–đ?‘œ đ?‘’đ?‘› đ?‘œđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘›đ?‘Ž =
đ??´đ?‘?đ?‘ đ?‘œđ?‘&#x;đ?‘?đ?‘Žđ?‘›đ?‘?đ?‘–đ?‘Ž đ?‘šđ?‘˘đ?‘’đ?‘ đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Ž Ă— đ??šđ?‘Žđ?‘?đ?‘Ąđ?‘œđ?‘&#x; đ??´đ?‘?đ?‘ đ?‘œđ?‘&#x;đ?‘?đ?‘Žđ?‘›đ?‘?đ?‘–đ?‘Ž đ?‘’đ?‘ đ?‘ĄĂĄđ?‘›đ?‘‘đ?‘Žđ?‘&#x;
đ??´đ?‘?đ?‘ đ?‘œđ?‘&#x;đ?‘?đ?‘Žđ?‘›đ?‘?đ?‘–đ?‘Ž đ?‘šđ?‘˘đ?‘’đ?‘ đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Ž Ă— đ??šđ?‘Žđ?‘?đ?‘Ąđ?‘œđ?‘&#x; Ă— 5 đ??´đ?‘?đ?‘ đ?‘œđ?‘&#x;đ?‘?đ?‘Žđ?‘›đ?‘?đ?‘–đ?‘Ž đ?‘’đ?‘ đ?‘ĄĂĄđ?‘›đ?‘‘đ?‘Žđ?‘&#x;
Desarrollemos un ejemplo para aplicar la fĂłrmula en muestras de suero: Absorbancia de la muestra: 0,302 Absorbancia del estĂĄndar: 0,321 ConcentraciĂłn del estĂĄndar: 2,50 mg/dL đ??śđ?‘œđ?‘›đ?‘?đ?‘’đ?‘›đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Žđ?‘?đ?‘–Ăłđ?‘› đ?‘‘đ?‘’ đ?‘šđ?‘Žđ?‘”đ?‘›đ?‘’đ?‘ đ?‘–đ?‘œ đ?‘ ĂŠđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘?đ?‘œ =
0,302 Ă— 2,50 0,321
đ??śđ?‘œđ?‘›đ?‘?đ?‘’đ?‘›đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Žđ?‘?đ?‘–Ăłđ?‘› đ?‘‘đ?‘’ đ?‘šđ?‘Žđ?‘”đ?‘›đ?‘’đ?‘ đ?‘–đ?‘œ đ?‘ ĂŠđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘?đ?‘œ = 2,35 đ?‘šđ?‘”/đ?‘‘đ??ż ElaborĂł:
MĂĄster Oscar Puente
RevisĂł:
Dr. Santiago Escalante
AprobĂł:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
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Coordinador Carrera 20/08/2020
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Desarrollemos un ejemplo para aplicar la fĂłrmula en muestras de orina espontĂĄnea: Absorbancia de la muestra: 0,089 Absorbancia del estĂĄndar: 0,321 ConcentraciĂłn del estĂĄndar: 2,50 mg/dL DiluciĂłn realizada: 1:5 đ??śđ?‘œđ?‘›đ?‘?đ?‘’đ?‘›đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Žđ?‘?đ?‘–Ăłđ?‘› đ?‘‘đ?‘’ đ?‘šđ?‘Žđ?‘”đ?‘›đ?‘’đ?‘ đ?‘–đ?‘œ đ?‘ ĂŠđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘?đ?‘œ =
0,089 Ă— 2,50 Ă— 5 0,321
đ??śđ?‘œđ?‘›đ?‘?đ?‘’đ?‘›đ?‘Ąđ?‘&#x;đ?‘Žđ?‘?đ?‘–Ăłđ?‘› đ?‘‘đ?‘’ đ?‘šđ?‘Žđ?‘”đ?‘›đ?‘’đ?‘ đ?‘–đ?‘œ đ?‘ ĂŠđ?‘&#x;đ?‘–đ?‘?đ?‘œ = 3,46 đ?‘šđ?‘”/đ?‘‘đ??ż
6. Conclusiones y recomendaciones Al final de la pråctica, el alumno deberå demostrar: • • •
Preparar diluciones seriadas dobladas para la determinaciĂłn de tĂtulos en el laboratorio de inmunologĂa. Manejar con eficiencia la pipeta electrĂłnica y el nefelĂłmetro usado para la prĂĄctica con poca supervisiĂłn. Establecer las ventajas inmunolĂłgicas de determinar anticuerpos del tipo IgG en patologĂas de mamĂferos.
7. Anexos relacionados Al final de la sesión pråctica, el alumno deberå: • •
Determinar la concentraciĂłn de magnesio en muestras biolĂłgicas de mujeres embarazadas para aportar con evidencia relevante en el tratamiento de preeclampsia. Correlacionar el valor de magnesio sanguĂneo y urinario con otros metabolitos para valorar la funciĂłn renal y posibles estados de hipermagnesemia o hipomagnesemia.
8. BibliografĂa Antoni Castells, H. C. (2017). Test de Laboratorio en GastroenterologĂa y HepatologĂa (Vol. 10). (J. C.-P. Santos Santolaria, Ed.) Barcelona, EspaĂąa: ELSEVIER. Gaw, A. (2015). BioquĂmica ClĂnica - Texto a atlas a color (5tq ed.). Barcelona: ELSEVIER. Mayo Clinic Laboratoris. (2019). Mayo Clinic Laboratoris. Recuperado el 14 de 09 de 2019, de https://www.mayocliniclabs.com/test-catalog/Clinical+and+Interpretive/36901 ElaborĂł:
MĂĄster Oscar Puente
RevisĂł:
Dr. Santiago Escalante
AprobĂł:
Dr. Santiago Escalante
Cargo: Fecha
Docente 11/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
Cargo: Fecha:
Coordinador Carrera 20/08/2020
9F51653)4,)50)13.1,./+012=.)4,);0M.,-23
!"#$%&'(!)!"#$"%&!&' Prueba fotométrica para el magnesio con factor aclarante de lipidos (LCF) *+,-,./0123.)4,5),-/617, 10010 !"#$%
2 x 100 ml
Estuche completo
C = 2.5 x
"A Muestra !!!!!!! "A !+*(%
C = 1.03 x
"A Muestra !!!!!!! "A !+*(%
ó
!&'(% !8/343)1,2,3 Los iónes de magnesio en medio alcalino forman un complejo azul coloreado con el azul de xilidil. El incremento de la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de magnesio en la muestra. El ácido glicoleterdiamina-N,N,N1,N1-tetraacético (GEDTA) es usado como agente bloqueador para el calcio. 93./,.243:)13;<3-212=.)4,)53-)+,01/2>3-),.)50)<+6,?0 @)A)BCC);5)D,01/2>3)4,)1353+ !")*%) ")*% CAPS 49 mmol/l GEDTA 0,13 mmol/l Azul de xilidil 0,09 mmol/l Azida de sodio 0.095 % Activadores B)A)E);5)%-/F.40+ !+*(%) !+*(% Magnesio 2,5 mg/dl ó 1,03 mmol/l Azida de sodio 0,095 % *+,<0+012=.)4,)53-)+,01/2>3!")*% y !+*(%,están listos para su uso. %-/0?252404)4,)53-)+,01/2>3!")*% y !+*(%, son estables hasta la fecha de caducidad cuando se almacenan de 2...25°C. !6,-/+0Suero, plasma, líquido cefalorraquídeo y orina. Estabilidad de 2...8°C por 7 días. No usar EDTA. Ajustar el pH de la orina entre 3 y 4 adicionándole unas gotas de ácido clorhídrico concentrado. Diluir después 1 + 4 con agua destilada. Multiplicar el resultado por 5. $3/0Muestras lipémicas usualmente generan turbidez cuando se mezclan con el reactivo. !"#$%&'(!) !"#$"%&!&' evita estos falsos resultados elevados gracias al G01/3+)"150+0./,)4,)H2<243-)IH9GJ que tiene incorporado el reactivo. El LCF aclara la turbidez causada por muestras lipémicas, con concentraciones de triglicéridos hasta de 2.000 mg/dl. %.-0K3 Longitud de onda: Paso de luz: Temperatura: Medición:
520 nm, Hg 546 nm 1 cm 20...25°C Frente a un blanco de reactivo. Sólo se requiere un blanco de reactivo.
[mg/dl]
[mmol/l]
90+01/,+N-/210-)4,)50),O,1612=. Linearidad: La prueba es lineal hasta concentraciones de magnesio de 5 mg/dl o 2.05 mmol/l. Diluir las muestras con concentraciones superiores 1 + 1 con agua destilada. Multiplicar el resultado por 2. Los datos típicos de ejecución de la prueba pueden ser encontrados en el informe de verificación, accesible vía www.human.de/data/gb/vr/ey-mg.pdf y ../ey-mg717.pdf www.human-de.com/data/gb/vr/ey-mg.pdf y ../ey-mg717.pdf P053+,-).3+;05,-)Q Suero, plasma
1,9 - 2,5 mg/dl
Líquido cefalor. Orina Orina de 24 hrs.
2,5 - 3,5 mg/dl 1 - 10 mg/dl 50 - 150 mg/24h
0,8 - 1,0 mmol/l 1,0 - 1,5 mmol/l 0,4 - 4,1 mmol/l 2,0 – 6,2 mmol/24h
93./+35)4,)1052404 Se pueden utilizar todos los sueros control con valores determinados por este método. Nosotros recomendamos el uso de nuestro suero control de origen animal R(!"SDTH ó nuestro suero de origen humano &%DTUT& como control de calidad. "6/3;0/2V012=. Proposiciones para la aplicación de los reactivos sobre analizadores están disponibles sobre demanda. Cada laboratorio tiene que validar la aplicación en su propia responsabilidad. $3/0No use suero hemolizado debido a la alta concentración de magnesio en los eritrocitos. La prueba no es influenciada por sueros lipémicos ó concentraciones de bilirrubina hasta de 20 mg/dl. Los tubos de vidrio contaminados son una fuente de error. Se recomienda para la prueba el uso de Material de plástico desechable. Los reactivos contienen azida de sodio (0,095%) como preservativo. No ingerirlo. Evite el contacto con la piel y membranas mucosas. H2/,+0/6+0 1. Mann, C.K., and Yoe, J.H., Anal.Chem. @W, 202-205 (1956) 2. Mann, C.K., and Yoe, J.H., Anal.Chim.Acta BX, 155-160 (1957) 3. Bohuon, C., Clin. Chim. Acta Y, 811-817 (1962) 4. G. Weiss, Diagnostische Bewertung von Laborbefunden; J.F. Lehmanns Verlag München (1976)
%-L6,;0)4,)<2<,/,3 Pipetear en las cubetas Muestra / !+*(% Agua destilada !")*%
Blanco reactivo
Muestra ó !+*(%
! 10 µl 1000 µl
10 µl ! 1000 µl
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20...25°C. Medir la absorbancia de la muestra y del !+*(% rente al blanco de reactivo antes de 60 minutos ("A).
EY-MG INF 101001 E 10-2005-13
!
Human Gesellschaft für Biochemica und Diagnostica mbH Max-Planck-Ring 21 - D-65205 Wiesbaden - Germany Telefon: +49 6122 9988 0 - Telefax: +49 6122 9988 100 - eMail: human@human.de
Magnesio. Calmagita - EGTA. Colorimétrico. Determinación cuantitativa de magnesio Solo para uso in vitro en el laboratorio clínico Conserv ar a 2-8ºC
MAGNESIO
Ref.: MAG-024
R1: 1x125 mL R2: 1x125 mL CAL: 1x 5 mL
PRINCIPIO DEL METODO
El magnesio forma un complejo de color púrpura al reaccionar con la calmagita en medio alcalino(Nota 1). La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de magnesio en la muestra ensayada 1.
SIGNIFICADO CLINICO
El magnesio, es el segundo catión intracelular más abundante en el organismo humano después del potasio, siendo esencial en gran número de procesos enzimáticos y metabólicos. Es un cofactor en todas las reacciones enzimáticas que involucran al ATP y forma parte de la membrana que mantiene la excitabilidad eléctrica de las células musculares y nerviosas. Principales causas de déficit de magnesio son mala absorción intestinal, administración de diuréticos o aminoglucósidos, hiperparatiroidismo o acidosis diabética. Niveles altos de magnesio se hallan en la uremia, fallo renal, glomerulonefritis, enfermedad de Addison o terapia intensiva con antiácidos 1,4,5. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS R1
Amino-metil-propanol EGTA
1 mmol/L 0,21 mmol/L
R2
Calmagita
0,30 mmol/L
MAGNESIUM CAL
Patrón primario acuoso de Magnesio 2 mg/dL
PRECAUCIONES R1: H314-Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. Seguir los consejos de prudencia indicados en la FDS y etiqueta del producto. PREPARACION Reactivo de trabajo (RT): Mezclar volúmenes iguales de R 1 Tampón y de R 2 Cromógeno. Estabilidad del reactivo de trabajo: 4 días en nevera (2-8ºC) o 24 horas a temperatura ambiente (15-25ºC). CONSERVACION Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. MAGNESIUM CAL Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partículas y turbidez. Absorbancia (A) del Blanco a 520 1,4. MATERIAL ADICIONAL Espectrofotómetro ó analizador para lecturas a 520 nm. Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 2). MUESTRAS Suero o plasma heparinizado1: Libre de hemólisis. Separado lo antes posible de los hematies. No usar oxalato o EDTA como anticoagulante. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC. Orina1: Ajustar a pH 1 con ClH. Si la muestra es turbia, calentarla a 60ºC 10 min. para disolver los precipitados. Diluir la muestra 1/10 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado por 10 (factor de dilución). Estabilidad de la muestra: 3 días a 2-8ºC. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .520 nm (500-550) Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC / 15-25ºC 2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. 3. Pipetear en una cubeta: Blanco Patrón Muestra RT (mL) Patrón (Nota1,4,5) (µL) Muestra (µL) 4. 5.
1,0 --
1,0 10
1,0 --
--
--
10
Mezclar e incubar 5 min a temperatura ambiente o 3 minutos a 37ºC. Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
CALCULOS
( A ) Muestra x 2 (Conc. Patrón) = mg/dL ( A ) Patrón Factores de conversión: mg/dL x 0,412= mmol/L ó 0,5 mmol/L = 1.0 mEq/L = 1,22 mg/dL = 12,2 mg/L1. CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados. Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA1 Suero o plasma: 1,6 – 2,5 mg/dL Orina:
24-244 mg/24 horas
0,66 – 1,03 mmol/L
2-21 mEq/L/24 horas
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CARACTERISTICAS DEL METODO Rango de medida: Desde el límite de det ección de 0,2 mg/dL hasta el límit e de linealidad de 5 mg/dL. Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Precisión: Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20) Media (mg/dL) 2,39 4,01 2,27 4,14 SD 0,02 0,07 0,07 0,13 CV (%) 1,18 1,73 2,99 3,22 Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,055 A. Exactitud: Los reactivos de BSM (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes: Coeficiente de correlación (r)2: 0,998 Ecuación de la recta de regresión: y=0,971x + 0,145 Las características del método pueden variar según el analizador utilizado. INTERFERENCIAS Hemólisis. Los anticoagulantes a excepción de la heparina1. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación del magnesio2,3. NOTAS 1. MAGNESIUM CAL: Debido a la naturaleza del producto, es aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con facilidad. 1. La interferencia con el calcio se evita con la adición de EGTA. 2. Se recomienda utilizar material de plástico de un solo uso para evitar contaminaciones de calcio o magnesio. En caso de utilizar material de vidrio deberá lavarse con una solución de H2SO4 - K2Cr2O7, enjuagar varias veces con agua destilada y secar antes de su uso. 3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos en métodos automáticos. Se recomienda utilizar calibradores séricos. 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación. 5. BSM dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este reactivo en distintos analizadores. BIBLIOGRAFIA 1. Farrell E C. Magnesium. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1065-1069. 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
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Magnesio. Calmagita - EGTA. Colorimétrico. Determinación cuantitativa de magnesio Solo para uso in vitro en el laboratorio clínico Conserv ar a 2-8ºC
5.
Ref.: MAG-024
MAGNESIO
R1: 1x125 mL R2: 1x125 mL CAL: 1x 5 mL
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
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Magnesium. Calmagite - EGTA. Colorimetric. Quantitative determination of magnesium Only for in vitro use in clinical laboratory Store at 2-8ºC
R1: 1x125 mL R2: 1x125 mL CAL: 1x 5 mL
PRINCIPLE OF THE METHOD Magnesium form a purple coloured complex when reacts with calmagite in alkaline solution (Note 1). The intensity of the color formed is proportional to the magnesium concentration in the sample1.
CLINICAL SIGNIFICANCE Magnesium is the second more abundant intracellular cation of the human body after potassium, being essential in great number of enzymatic and metabolic processes. Is a cofactor of all the enzymatic reactions that involve the ATP and comprises of the membrane that maintains the electrical excitability of the muscular and nervous cells. A low magnesium level is found in malabsortion syndrome, diuretic or aminoglucoside therapy; hyperparathyroidism or diabetic acidosis. Elevated concentration of magnesium is found in uremia, chronic renal failure, glomerulonephritis, Addison’s disease or intensive anti acid therapy1,4,5. Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should integrate clinical and other laboratory data.
REAGENTS Amino-methyl-propanol EGTA
R1 R2 MAGNESIUM CAL
MAGNESIUM
Ref.: MAG-024
1 mmol/L 0.21 mmol/L
General laboratory equipment (Note 2). SAMPLES Serum, heparinized plasma1: Free of hemolysis and separated from cells as rapidly as possible. Do not use oxalates or EDTA as anticoagulant. Stability: 7 days at 2-8ºC. Urine1: Should be acidified to pH 1 with HCl. If urine is cloudy; warm the specimen to 60ºC for 10 min. to dissolve precipitates. Dilute the sample 1/10 with distilled water and multiply the result by 10. Stability: 3 days at 2-8ºC PROCEDURE 1. Assay conditions: Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .520 nm (500-550) Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm light path Temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC 2. Adjust the instrument to zero with distilled water. 3. Pipette into a cuvette: Blank Standard Sample WR (mL)
Calmagite 0.30 mmol/L Magnesium aqueous primary standard 2 mg/dL
PRECAUTIONS R1: H314-Causes severe skin burns and eye damage. Follow the precautionary statements given in MSDS and label of the product. PREPARATION Working reagent (WR): Mix equal volumes of R 1 Buffer and R 2 Chromogen. The working reagent is stable for 4 days at refrigerator (2-8ºC) or 24 h at room temperature (15-25ºC). STORAGE AND STABILITY All the components of the kit are stable until the expiration date on the label when stored tightly closed at 2-8ºC protected from light and contaminations prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date. MAGNESIUM CAL: Once open is stable up to 1 month when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and contaminations prevented during their use. Signs of reagent deterioration: Presence of particles and turbidity. Blank absorbance (A) at 520 1.4. ADDITIONAL EQUIPMENT Spectrophotometer or colorimeter measuring at 520 nm. Matched cuvettes 1.0 cm light path.
BSIS28-I 20/09/16
4. 5.
1.0
1.0
Standard(Note 1,4,5) (µL)
--
10
1.0 --
Sample (µL)
--
--
10
Mix and incubate for 5 min at room temperature or 3 min a 37ºC. Read the absorbance (A) of the samples and calibrator, against the Blank. The colour is stable for at least 30 minutes.
CALCULATIONS
( A ) Sample x 2 (Standard conc.) = mg/dL ( A ) S tan dard Conversion factors: mg/dL x 0.412 = mmol/L or 0,5 mmol/L = 1.0 mEq/L = 1,22 mg/dL = 12,2 mg/L1. QUALITY CONTROL Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures. If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents and calibrator for problems. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances. REFERENCE VALUES1 Serum or plasma: 1.6 – 2.5 mg/dL 0.66 – 0.03 mmol/L Urine: 24 – 244 mg/24 h 2 – 21 mEq/L/24 h These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own reference range.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS Measuring range: From detection limit of 0.2 mg/L to linearity limit of 5 mg/dL. If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with NaCl 9 g/L and multiply the result by 2. Precision: Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20) Mean (mg/dL) 2.39 4.01 2.27 4.14 SD 0.02 0.07 0.07 0.13 CV (%) 1.18 1.73 2.99 3.22 Sensitivity: 1 mg/dL = 0.055 A. Accuracy: Results obtained using BSM reagents (y) did not show systematic differences when compared with other commercial reagents (x). The results obtained using 50 samples were the following: correlation coefficient (r)2: 0,998 regression equation: y=0,971x + 0,145 The results of the performance characteristics depend on the analyzer used. INTERFERENCES Hemolysis and anticoagulants other than heparin1. A list of drugs and other interfering substances with magnesium determination has been reported by Young et. al 2. NOTES 1.
MAGNESIUM CAL: Proceed carefully with this product because due its nature it can get contamined easily.
2. Interference by calcium is prevented by the use of EGTA1. 3. It is recommended use disposable material to avoid calcium or magnesium contamination. If glassware is used the material should be scrupulously clean with H2SO4 - K2Cr2O7 and then thoroughly rinsed with distilled water and dried before use. 4. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic error in automatic procedures. It is recommended to use a serum Calibrator. 5. Use clean disposable pipette tips for its dispensation. 6. BSM has instruction sheets for several automatic analyzers. Instructions for many of them are available on request. BIBLIOGRAPHY 1. Farrell E C. Magnesium. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1065-1069. 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Bio-Science Medical S.L. C/ Velázquez,126 7º 28006 MADRID (SPAIN)
Magnesium. Calmagite - EGTA. Colorimetric. Quantitative determination of magnesium Only for in vitro use in clinical laboratory Store at 2-8ยบC
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Ref.: MAG-024
MAGNESIUM
R1: 1x125 mL R2: 1x125 mL CAL: 1x 5 mL
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