HCM UNIVERSITY OF TECHNOLOGY FACULTY OF CHEMICAL ENGINEERING
BÁO CÁO KHOA HỌC ỨNG DỤNG CỦA SẮC KÝ TRONG PHÂN TÍCH THỰC PHẨM
Đề tài: Ứng dụng của sắc ký gel (GF) trong phân tích thực phẩm
Thực hiện: Nguyễn Văn Tú
- PhD Student (51301915)
TPHCM, 2017
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NỘI DUNG 1 2
3
GIỚI THIỆU SẮC KÝ GEL n ơ h N
y u Q
m KÝ GEL NGUYÊN LÝ SẮC è K + / m
y ạ D
PHÂN LOẠI GEL .co le g o
o G
4
ỨNG DỤNG SẮC KÝ GEL Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
2
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
GIỚI THIỆU SẮC KÝ GEL Sắc kí gel dùng để tách các phân n tử dựa ơ h N
y trên sự khác nhau về kíchQuthước của các
m è Ktử không bị giữ lại y phân tử. Những phân ạ D + / mhọc nên thành phần của o bằng liên kết hóa c . le g o o dung môi G giải li (buffer) không ảnh hưởng
trực tiếp đến độ giải li (resolution). Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
3
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
GIỚI THIỆU SẮC KÝ GEL n ơ Thường được sử dụng để tinh h N y u Q m è chế proteins,yK enzymes, ạ D + / m o polysaccharides, nucleic acids và c . le g o o các đại G phân tử trong lĩnh vực
sinh học. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
4
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL
Trong sắc ký n ơ gel, pha tĩnh là h N y u mạng polymer Q m è K có lỗ rỗng và Dạy + / m các lỗ rỗng .này o c le g được phủ o đầy o G dung môi dùng làm pha động. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
5
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
6
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL - Gel được nhồi vào cột tạo thành đệm, đệm là mạng lưới lỗ xốp hình thành từ hạt hình cầu bền vật lý, bền hóa học và n ơ trơ. Lớp gel cân bằng với dung dịch đi quahvà dung dịch điền N giữa các hạt. y đầy vào mạng lưới lỗ xốp và khoảng không u Q - Chất lỏng bên trong lỗ xốp đượcèxem m là pha tĩnh, chất lỏng bên ngoài lỗ xốp là pha động. ạyK - Mẫu được đưa vào cột, Pha +D động kéo mẫu di chuyển qua / m cột. o c . levào và ra khỏi lỗ xốp, những phân tử - Phân tử khuếch tán g o lỗ xốp và bị giữ lại trong cột lâu hơn. o nhỏ đi vào sâu trong G - Pha động qua cột liên tục, các phân tử lớn không thể chui vào các lỗ xốp nên sẽ đi ra khỏi cột trước. Những phân tử nhỏ khuếch tán vào và ra khỏi lỗ xốp nên ra khỏi cột sau. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
7
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL PHỔ ĐỒ SẮC KÝ GEL
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
8
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL PHỔ ĐỒ SẮC KÝ GEL Kết quả của quá trình sắc kí gel thường được biểu diễn trên giản đồ giải li hay phổ đồ sắc ký cho thấy ơsự n khác nhau về nồng độ (liên quan đến mức độ hấp thuNh tia UV ở vùng 280 y u nm) của các thành phần trong mẫu khi chúng được giải li khỏi Q m tử. Trên giản đồ chia è cột dựa trên trật tự về kích thước phân K y ạphân tử không vào mạng lưới ra làm 3 loại phân tử. Những D +ra khỏi cột với cùng tốc độ cùa / đệm mà được giải li thẳng m o dòng lưu chất của pha.cđộng (buffer) ở thể tích Vo (xét trên 1 e l g đơn vị thể tích cột),o gọi là thể tích khoảng trống (void volume). o Những phân tử Gcó một phần đi vào mạng lưới đệm silicagel, rồi mới giải li ra khỏi cột theo trật tự kích thước nhỏ hơn sẽ ra trước. Và còn lại là những phân tử được giữ hoàn toàn trong mạng lưới lỗ xốp và đi ra khỏi cột trước giá trị tổng thể tích cột Vt (total column động điĐànqua Nơi bồi dưỡng kiến thứcvolume) Toán - Lý - Hóa của cho họcpha sinh cấp 2+3 / Diễn Toán -cột. Lý - Hóa 9 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL PHỔ ĐỒ SẮC KÝ GEL Trạng thái của mỗi cấu tử được biểu diễn liên quan n tiếp từ đến thể tích giải li của chúng được đo trực ơ h N y phổ đồ sắc ký. Có 3 cách: u Q m è Cách xác định thể tích K y ạ +D / Ve (elution volume) m o c . le trên sắc ký đồ: g o o G Khi thể tích của mẫu quá nhỏ so với thể tích rửa giải (Ve) thì Ve được xác định từ vị trí ban đầu đến vị trí cao nhất bồi dưỡng thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 10 của mũiNơisắc ký kiến1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL PHỔ ĐỒ SẮC KÝ GEL
n ơ h
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
g o o mẫu lớn không thể bỏ qua so Khi thể tíchGcủa
với thể tích rửa giải (Ve) thì Ve được xác định từ vị trí ½ thể tích mẫu đến vị trí cao nhất của mũi sắc ký. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
11
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL PHỔ ĐỒ SẮC KÝ GEL
n ơ h
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
g o o
Khi thể tích Gcủa mẫu quá lớn tạo nên mũi sắc ký có vùng phẳng ngang, thể tích Ve được xác định từ vị trí ban đầu của mẫu đến vị trí của điểm uốn ở phần đang tăng lên của mũi giải li. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
12
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL PHỔ ĐỒ SẮC KÝ GEL
n V V ơ e o h
www.daykemquynhon.ucoz.com
K av N Vt Vo uy
+D / m
Q m è K K ạy
d
Ve Vo Ve Vo Vi Vt Vo V gelmatrix
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
13
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL PHỔ ĐỒ SẮC KÝ GEL K av Kd
Ve Vo Vt Vno
ơ h N
Ve Vo y Ve Vo u Vi Q Vt Vo V gelmatrix
m è K y ạ
D + / - Vo là thể tích khoảng trống, cột được nhồi tốt m o c . thì thể tích Vo xấp xỉ 30% thể tích cột. e l g o o - Vi là thể tích G pha động bên trong mạng lưới,
trong thực tế Vi rất khó xác định do phải xác định thể tích mạng lưới gel, do đó để thuận tiện thì Vi= Vt-Vo. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
14
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL Đường cong chọn lọc và lựa chọn phương pháp
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
15
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL Đường cong chọn lọc và lựa chọn phương pháp
n - Hệ số phân bố Kav liên quan đến kích thước của phân ơ h N tử. Tỷ trọng và kích thước giống nhau của các phân tử y u Q mô tả mối quan hệ giữa giá trị Km av và logMr . è K - Bằng cách vẽ đường congạyđi qua những điểm giá trị +D protein chuẩn có thể xây Kav ứng với logMr của /các m o dựng được đường cong chọn lọc. c . le g - Phương phápoolọc gel được chọn lựa sao cho khối G lớn được giải li ở thể tích khoảng trống lượng phân tử Vo với mũi giãn rộng ít nhất và thời gian là tối thiểu. - Những hợp chất có khối lượng phân tử nhỏ nhất đượcNơigiải li gần giá trị Vt cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa 16 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL Độ phân giải (độ giải li)
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
Q m è K ufạy +D / m
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
17
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL Độ phân giải (độ giải li) Độ giải li là độ phân tách giữa các peak, chịu ảnh hưởng bởi nhiều n ơ yếu tố: tỷ lệ thể tích mẫu với thể tích cột, tốc độ chảy, kích thước h N hạt gel, tỷ trọng cột y cột, kích thước hạt gel, độ phân bố kích thước u Q nhồi, độ xốp của hạt và độ nhớt của m pha động. Thành công của è K chọn điều kiện sao cho độ phương pháp phân tích sắc ký gelạylựa D chọn lọc cao và khống chế sự của /+ ngoại cảnh trong quá trình tách.
m o .c
Vr1 và Vr2 là thể tích lưu le chất ra khỏi cột của 2 peak liền kề tính ở g o o tâm peak G W1 và W2 độ rộng của các peak (Vr2 – Vr1) là khoảng cách giữa các peak và 1/2 (W1 + W2) độ rộng trung bình của các peak Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
18
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL Độ phân giải
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
19
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ GEL Độ phân giải
Phân tách với độ giải li cao (High resolution n ơ fractionation):
h N y
u Q m è K y Phân tách nhiều cấuDtử ạ trong một mẫu dựa + / m o trên sự khác nhau về kích thước. Mục đích là c . le g o o phân lập một G hoặc nhiều cấu tử để xác định
khối lượng phân tử hoặc phân tích sự phân bố khối lượng phân tử.
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
20
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL Việc tách trong sắc ký gel tùy vào đặc điểm n gian ba của lỗ rỗng trong hệ mạng không ơ h N y chiều. Hạt gel phải có: u Q m + Kích cỡ giống nhau, yKè ạ D + + Trơ về mặt hóa học, / m o c . + Bền về mặt cơ học, le g o o + Các lỗ rỗng trong hạt gel phải có hình G dạng đồng nhất Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
21
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL Có hai loại nguyên liệu để chế tạo gel là xerogel n ơ h và aerogel. N y u Q m + Xerogel là loại gel cổ điển, èlà một polymer được K y ạ D tạo mạng ngang, khi cho + tiếp xúc với dung môi gel / m o .c thành mạng gel với các lỗ sẽ trương nở để letạo g o o G mềm. trống tương đối + Aerogel: là nguyên liệu rắn chắc không phải gel, vd: thủy tinh có lỗ rỗng hay silica có lỗ rỗng. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
22
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL Khi lựa chọn gel sử dụng cần cần xem xét 2 yếu tố:
n độ phân giải + Mục tiêu thí nghiệm (phân tách với ơ h N y u cao hay tách thành từng nhóm hợp chất) Q m è K y + Khối lượng của proteinDạcần tách và tạp chất cần + / m o tách. c . le g o o Trên thị trường G có 5 nhóm thông dụng là Superdex, Serphacryl, Superose, Sephadex, Sephadex LH - 20 Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
23
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SUPERDEX Là sự lựa chọn cho độ giải li cao, thời gian ngắn và độ thu hồi cao. n rỗng agrose đến Là một loại composite dựa trên liên kết ngang giữa cácơhạt h mạng dextran bằng liên kết cộng hóa trị. N uykết ngang và các tính chất Có độ bền vật lý và hóa học cao do mạng agroseQ liên mcủa Superdex cho phép những lọc gel tốt do chuỗi dextran. Độ bền cơ hoc è K chảy qua với tốc độ dòng khá lớn. dung môi giải li có độ nhớt cao như ure 8M y Dạ cao trong suốt quá trình ổn định hay Loại gel này có thể chịu được tốc độ+dòng / lúc rửa cột. Tính bền giúp Superdex m phù hợp cho sử dụng trong công nghiệp o c với tốc độ dòng cao, nhanh và hiệu quả làm sạch tại chỗ. Với điều kiện làm . e l việc bình thường nhữngogtương tác giữa protein và gel Superdex được bỏ qua o khi sử dụng dung môi G có nồng độ ion trong khoảng 0,15M đến 1,5M.
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
24
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SUPERDEX Được sản xuất với 2 loại kích thước hạt (13mm và n ơ h 34mm) với 4 loại chọn lọc khác N nhau (Superdex y u Peptide, Superdex 30, Superdex 75 and Superdex Q m è 200). K y ạ D + Sử dụng cột được nhồi sẵn hạt có kích thước + / m Peptide, Superdex 30, o 13mm của Superdex c . leSuperdex 200 cho phân tích độ g Superdex 75 and o o phân giải cao Gvới thể tích mẫu nhỏ. + Sử dụng cột được nhồi sẵn hạt có kích thước 34mm của Superdex prep grade cho qui mô công nghiệp. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 25 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SUPERDEX
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
26
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHACRYL
n ơ h
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
g cho phân tách nhanh, độ thu hồi cao tại Sephacryl là sự lựaoochọn phòng thí nghiệmGvà qui mô công nghiệp. Sephacryl HR thay thế cho Superdex prep grade trong những ứng dụng yêu cầu các khoảng phân đoạn tương đối rộng, độ bền hóa cao và chịu được tốc độ dòng lowsnlafm cho Sephacryl phù hợp bồi dưỡng kiếnnghiệp. thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa cho sử Nơi dụng công 27 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHACRYL
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Sephacryl HR là một loại composite được hình thành bởi liên kết ngang cộng hóa trị giữa allyl dextran với N,N’-methylane bisacrylamine tạo nên mạng ưa nước có độ bền cơ học cao. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
28
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHACRYL
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
29
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SUPEROSE
n ơ h
N y u
Q m è K ạy
D + / Superose là loại gel bền vật lý vàm hóa học cao dựa trên liên kết ngang của phân o c tử lỗ xốp agarose. . lecần chú ý, đặc trưng là các phân tử kỵ nước nhỏ Một vài tương tác kỵ nước g o o aromatic peptides, membrane proteins, lipoproteins có thể được giải li chậm G hơn dự đoán. Tuy nhiên trong một số ứng dụng những tương tác này có thể làm tăng độ giải li của quá trình phân tách.
Superose có thể dùng trong các phân đoạn khối lượng phân tử Nơi bồi dưỡng kiến thức - Lý -cho Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễnmô Đàn Toán - Lý -nghiệp. Hóa rộng nhưng không phùToán hợp phân tách quy công 30 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SUPEROSE
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Superose được sản xuất với các kích thước hạt khác nhau (11 µm, 13 µm and 30 µm) và với các độ chọn lọc khác nhau Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa (Superose 6 Superose 12). 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
31
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHADEX
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
32
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHADEX
ncó khối lượng Sephadex dùng để tách nhanh những nhóm ơ h N y làm sạch mẫu. u phân tử nhỏ, khử muối, đổi dung môi và Q m è K Sephadex được tạo thành từ các y liên kết ngang của ạ +D / m dextran với epichlorohydrin. o c . le g Các loại khác nhauoocủa Sephadex là do mức độ khác nhau G của liên kết ngang và vì vậy nó có độ trương nở và độ chọn lọc cho các kích thước phân tử đặc trưng. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
33
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHADEX
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
34
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHADEX Sephadex G-10 phù hợp cho việc tách những phân tử n ơ sinh học như peptides (Mr >700) ra khỏi những phân tử h N y nhỏ (Mr < 100) u Q m Sephadex G-50 phù hợp tách ènhững phân tử có Mr > K y 30.000 ra hỏi những phân ạ tử có Mr < 1500 những D +Loại gel này còn được sử dụng / labeled protein hay DNA. m o c . để loại bỏ các nucleotic nhỏ ra khỏi các chuỗi axit nucleic e l g o mạch dài. o G Sephadex G-25 được ứng dụng chính để tách nhóm protein dạng cầu. Loại gel này hiệu quả trong việc khử muối hay những chất bẩn nhỏ ra khỏi những phân tử có Mr>5000. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 35 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHADEX LH-20
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
36
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHADEX LH-20 - Sephadex LH-20 được tạo thành từ những chuỗi ơn đến mạng hydroxypropylated dextran có liên kết hngang Ntrương nở trong y lưới polysaccharide. Loại này có thể u Q nước hoặc dung môi hữu cơ. èm K y - Sephadex LH-20 phù hợpDạcho giai đoạn tinh chế ban + độ tinh khiết cao bằng sắc ký / đầu trước khi tinh chế với m o .c pha đảo hay nó có thể dung trong trao đổi ion hay sắcleký g o giai đoạn tinh chế với độ tinh khiết cao đối với đồng o G không đối quang. - Sephadex LH-20 có thể tách những cấu tử bằng sự phaanchia giữa mạng gel và dung môi hữu cơ. Gel Sephadex có Toán cả -tính nước Nơi bồi LH-20 dưỡng kiến thức Lý - Hóaưa cho học sinh cấp và 2+3 / kị Diễnnước. Đàn Toán - Lý - Hóa 37 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHADEX LH-20
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
38
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
PHÂN LOẠI GEL SEPHADEX LH-20 Sephadex LH-20 được sử dụng tách sơ bộ 2-acetamidobenzoic acid và 4-acetamidobenzoic acid.
n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
39
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG SẮC KÝ GEL Tách
các
nhóm
separations):
phân
N y u
n tử ơ h
(Group
Q m è K ạy
Loại bỏ những phân +D tử nhỏ như muối, / m
o c . protein đánh dấu ra khỏi nhóm các phân tử e l g o o G
lớn. Thường được sử dụng để tinh chế
protein kết hợp khử muối và đổi dung môi. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
40
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG SẮC KÝ GEL Phân tách với độ giải li cao (High n
resolution fractionation):
ơ h N
y u Q
m è Ktử trong một mẫu Phân tách nhiều cấu y ạ D + / mnhau về kích thước. Mục dựa trên sự khác o c . le g olập một hoặc nhiều cấu tử để đích là phân o G
xác định khối lượng phân tử hoặc phân tích sự phân bố khối lượng phân tử.
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
41
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỌC GEL n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Sử dụng cột sắc ký gel để phân tách dựa trên sự khác biệt về khối lượng phân tử để loại muối và những phân tử nhỏ. Cột được nhồi với Sephadex G-25, chỉ trong một bước mẫu sẽ được loại bỏ muối, Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 42 những phân tủ nhỏ.1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỌC GEL n ơ h
www.daykemquynhon.ucoz.com
N y u
+D / m
Q m è K ạy
o c . le
G
g o o
Sắc ký đồ quá trình khử muối ra khỏi (His)6 Nơi bồibằng dưỡng kiếnAKTA thức Toán - prime Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa protein 43 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỌC GEL - Mẫu được khử muối trên cột Hitrap Desalting n ơ h đặt sẵn. 5ml với chương trình AKTA prime cài N y u Q m -Dung môi giải li là natri phosphate 20mM, natri è K y ạ D clorua 0,15M, pH=7. /+ m o .c protein được xác định bằng -Tín hiệu đầu ralecủa g o o G và tín hiệu đầu ra của muối được tia UV (280nm) xác định bằng độ dẫn điện. Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định
44
www.daykemquynhon.ucoz.com
Sưu tầm bởi GV. Nguyễn Thanh Tú # Google.com/+DạyKèmQuyNhơn
n ơ h
N y u
Q m è K ạy
THANK YOU! +D / m
o c . le
G
g o o
Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định