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Aspectos prác+cos  sobre  procedimientos  de  colecta,   empaque,  e+quetado,  transporte  y  almacenamiento  de   muestras  de  mal  de  Panamá  en  bananos  

Dr. Miguel  A.  Dita    Rodríguez   San  Juan  Puerto  Rico,  Octubre,  2013  


Diagnós+co de  enfermedades  en  Plantas     Obje+vo:  reconocer  el  agente  causal  priario  de  una  determinada  enfermedad                                  hongo,  Bacteria,  Virus,  Nematodo,  Fitoplasma,  Factores  abióDcos       En  tejidos  vegetales  enfermos,  pueden  estar  presentes  varios  microorganismos   saprófitos.     Como   determinar,   entonces,   cual   es   el   agente   e:ológico   de   la   enfermedad   ?   Usualmente  en  Fitopatología,  se  emplean  los  Postulados  de  Koch.       1-­‐  Associación  constante  del    microorganismo  con  la  enfermedad;   2-­‐   Aislamiento   del   organismo   en   cul+vos   puros   y   descripción   de   sus   caracterís+cas;   3-­‐  Inoculación  del  organismo  aislado  en  un  hospedante  sano  y  comparar  los   síntomas  exibidos  con  los  ya  observados;   4-­‐  Re-­‐aislamiento  del  microorganismo  en  cul+vo  puro  y  compararlo  con  el  ya   obtenido  anteriormente    


Diagnós+co de  enfermedades  en  Plantas     Etapas  generales  :     1.  Obtener  informaciones  generales  sobre  la  planta  y  la  enfermedad   2.  Obtener  buenas  muestras  de  plantas  o  partes  de  plantas  enfermas   3.  Examinar   las   plantas   y   describir   los   síntomas   y     señales   de   la   enfermedad   4.  Obtener  literatura  que  describa  las  enfermedades  del  culDvo   5.  IdenDficar   la   enfermedad.   Comparar   la   descripción   hecha   por   usted  con  las  descritas  en  la    literatura  


Diagnós+co de  enfermedades  en  Plantas     Material  básico  para  el  trabajo  de  campo     1.  Lapicero   esferográfico,   lápiz   o   marcador   con   Dnta   indeléble   (permanente)   2.  Sobres  de  papel  impermeable  (papel  cristal  ou  celofan);   3.  Azadon,  Machete,  Cuchill@s;   4.  Fichas  de  campo  y  block  de  notas;   5.  Lente  de  aumento  (x15  ou  x20)  -­‐  Lupa;   6.  Cámara  fotográfica;   7.  Prensa  y  papel  para  envolver  las  muetras  (periódicos  viejos);     8.  Bolsas  plásDcos;   9.  Tijera  de  poda.  


Diagnós+co de  enfermedades  en  Plantas     Algunos  Procedimientos  Importantes   1.  Ac+tud  durante  la  visita   2.  Obtención  de  buenas  muestras   •   CanDdad  y  representaDvidad     •   Problemas  con  muestras  en  estados  muy  avanzados:  saprofitas.   •   Problemas  bolsa  plásDcas:  formación  de  cámara  húmeda   •    Cuidados   con   el  secado   :   uso   de   prensa   botánica   y   cambio   diario   de   los  papeles  hasta  que  se  seque   •    Evitar   la   mezcla   de   suelo   con   material   vegetal   (suelo   por   lo   general   no  sirve  parael  diagnós+co  u+nario  de  enfermedades  de  plantas).  


© Miguel  Dita          

Qué muestra  tomar?    

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© Miguel  Dita  

Qué muestra  tomar?    


Local: Peña  Blanca,    Honduras   Variedad:  Gros  Michel  

© Miguel  Dita          

Qué muestra  tomar?    


Fotos: Miguel  Dita  

Sintomas del  Mal  de  Panamá  en  bananos    


Foto: Miguel  Dita  

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Qué muestra  tomar?     A  

B

C

Síntomas internos del Mal de Panamá en banano. A. Corte transversal en el cormo

(rizoma)

mostrando descoloración de los tejidos. B. Corte transversal del pseudotallo mostrando necrosis avanzada del tejido vascular. C. Corte longitudinal del pseudotallo mostrando necrosis a lo largo de los haces vasculares. Fotos: M. A. Dita y L. Pérez-Vicente


Fotos: Plutarco  Echegoyen  

Colecta de  muestras  para  envío  a  laboratorio    


Foto: Miguel  Dita  

ReDre filamentos   (haces   vasculares)   del   pseudotallo   de   coloración   marron   (10-­‐15   cm).   ReDre   el   execeso   de   humedad    y  coloquelos  en  un   p a p e l / s o b r e /   b o l s a   debidamente  eDquetado,    


Fotos: Plutarco  Echegoyen  

Preparación de  muestras  para  envío  a   laboratorio    


Foto: Plutarco  Echegoyen  

Envío a  laboratorio    


A

B

C

D

E  

F

G


© Miguel  Dita  

Diagrama representativo del proceso de aislamiento de Fusarium oxysporum f. sp. cubense a partir de muestras de pseudotallo afectados

Pseudotallo de una planta de banano con síntomas típicos del mal de Panamá (Foto: L.P. Vicente)

Fragmentos de haces vasculares del pseudotallo secos

Fragmentos de pseudotallos en placa de Petri con medio de cultivo Komada

Crecimiento micelial de Fusarium oxysporum f. sp. cubense raza 4 tropical (Foc RT4) tropical (5 días después)

Cultivo de Foc RT4 en medio de cultivo agar papa dextrosa


© Miguel  Dita  

Etapas Colecta de muestras Pseudotallo, peciolo etc. Lugar , variedad, etc Ficha de campo

Envío de muestras a laboratório con Informaciones sobre la plantación

RT4?

Muestras

Extracción de ADN

RT4? Procesamiento de muestras Plaqueo en medio de Komada

Aislamiento del hongo Purificación Medio PDA

Medio Komada

?

Foc -PDA

Extracción de ADN

PCR Extracción de ADN


m.dita@cgiar.org

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