UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ FACULDADE DE FARMÁCIA, ODONTOLOGIA E ENFERMAGEM DEPARTAMENTO DE FARMÁCIA DISCIPLINA: FARMACOGNOSIA I
INTRODUÇÃO A CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)
MESTRANDO: FRANCISCO CIRINEU DAS CHAGAS NETO
FORTALEZA, ABRIL DE 2017.
Sumário Cromatografia CCD Aplicações
Sistema Técnica Vantagens Desvantagens Considerações finais
CROMATOGRAFIA A cromatografia é um método físico-químico de separação dos componentes de uma mistura. Separação Identificação Quantificação (combinado a outros equipamentos)
Duas fases Estacionária
Móvel
TIPOS DE CROMATOGRAFIA
CCD
CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD) A cromatografia em camada delgada (CCD) consiste na separação dos componentes de uma mistura sólido líquido onde a fase móvel (líquida) migra sobre uma camada delgada de adsorvente retido em uma superfície plana (fase estacionária – sólida). ADSORÇÃO. Competição. Proporções da fase móvel.
ADSORÇÃO É importante ressaltar que Absorção é diferente de Adsorção. Na Absorção, uma substancia se infiltra na outra, enquanto que a Adsorção é apenas superficial.
CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)
Fase mรณvel Fase estacionรกria
APLICAÇÕES DA CCD Separação
APLICAÇÕES DA CCD Estabelecer a identidade de compostos;
APLICAÇÕES DA CCD Estabelecer a identidade de compostos; Determinar o número de componentes de uma mistura;
3 componentes
APLICAÇÕES DA CCD Estabelecer a identidade de compostos; Determinar o número de componentes de uma mistura; Determinar o solvente apropriado para uma separação por cromatografia em coluna;
APLICAÇÕES DA CCD Estabelecer a identidade de compostos; Determinar o número de componentes de uma mistura; Determinar o solvente apropriado para uma separação por cromatografia em coluna; Assegurar a autenticidade de fitoterápicos. Limoneno Trans-cariofileno
Quercetina
SISTEMA Fase Estacionรกria
FASE ESTACIONÁRIA
FASE ESTACIONÁRIA
FASE NORMAL
Carรกter polar
FASE REVERSA
Carรกter apolar
SISTEMA Fase mรณvel
FASE MÓVEL O Solvente utilizado possui papel fundamental na separação dos componentes.
Competição entre as moléculas da amostra e da fase móvel, pela superfície adsorvente. Natureza química da amostra e a polaridade da FM. Mistura de solventes.
SOLVENTES PARA CROMATOGRAFIA
Éter de petróleo
Ciclohexano
Tetracloreto de carbono
Benzeno
Cloreto de metileno
Clorofórmio
Éter etílico
Acetato de etila
Piridina
Acetona
Álcool n-propílico
Etanol
Água
Ácido acético
Ordem geral de eluição Aumento da polaridade
SISTEMA Revelador
REVELADORES Pode ser por métodos físicos ou químicos. Método físico: Compostos UV-ativos, que aparecem como manchas em fundo fluorescente, se a placa for iluminada com lâmpada de luz ultravioleta. Método químico: Quase todas as classes de substâncias orgânicas (exceto alcanos e haletos alifáticos) reagem com iodo formando complexos. A formação desses complexos é reversível.
REVELADORES (CONT.) Revelação sob luz ultravioleta (254 nm): indicado para substâncias com cromóforos (sistemas conjugados), pois absorvem radiação UV e tornam-se fluorescentes. Revelação com vapores de iodo: revelador universal para qualquer substância orgânica. Forma manchas marrons. Métodos químicos (destrutivo): a solução do revelador é borrifada com ar comprimido. Após aquecimento ocorre a reação da substância com o revelador formando manchas coloridas. Ex. CeSO4 (Universal) Métodos biológicos: quando há procura por uma substância com atividade biológica. Revelador é uma suspensão de fungos.
REVELADORES Vapor de iodo
UV
TÉCNICA CCD
PROCESSOS PARA A PREPARAÇÃO Escolha da fase estacionária Preparação das placas cromatográficas Ativação das placas cromatográficas Seleção da fase móvel Aplicação das amostras Preparação da cuba cromatográfica Desenvolvimento do cromatograma Revelação do cromatograma Cálculo do fator de retenção Rf.
PREPARAÇÃO DAS PLACAS CROMATOGRÁFICAS
Suspensão do adsorvente
Placa de vidro
Espalhar uniformemente
PLACAS CROMATOGRÁFICAS PRONTAS
$$$
ATIVAÇÃO DAS PLACAS Deve-se ativar as placas para se retirar substâncias aderidas ao adsorvente. A ativação é um aquecimento e varia par cada adsorvente. Sílica, alumina e terra diatomácea: 105°C – 110°C por 30 a 60 min. Celulose: 105° até no máximo 10 min.
APLICAÇÃO DAS AMOSTRAS Aplicadas na forma de soluções, em solvente bastante voláteis, que possam ser facilmente eliminados após a aplicação. Aplicar 1,5 cm a 2,0 cm acima do bordo inferior, evitando que fique mergulhada na FM.
APLICAÇÃO DAS AMOSTRAS Padrões: Ácido gálico
Rutina Cumarina Amburosídeos...
CUBA CROMATOGRÁFICA
SEPARAÇÃO DE CONSTITUINTES
VÍDEO DEMONSTRATIVO
FATOR DE RETENÇÃO Análise qualitativa: A análise qualitativa com CCD, consiste na determinação do Rf e sua comparação com Rf de padrões. Rf = distância percorrida pelo analito distância percorrida pelo solvente
• Quando as condições são especificadas, Rf é constante para um composto e corresponde à uma propriedade física do mesmo, os valores ideais para Rf estão entre 0,4 e 0,6.
FATOR DE RETENÇÃO
FATOR DE RETENÇÃO
VANTAGENS DA CCD Fácil execução;
Maior rapidez; Boa resolução; Baixo custo;
Versatilidade; Útil no estudo fitoquímico na pesquisa de novos fármacos.
DESVANTAGENS DA CCD Difícil reprodutibilidade: é muito difícil a confecção de duas placas idênticas, com a mesma quantidade de amostra, etc;
Cuidado na determinação exata do Rf; Método qualitativo.
OUTROS TIPOS DE CROMATOGRAFIA
CONSIDERAÇÕES FINAIS
OBRIGADO!
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