kefalaio 4_Layout 1 19/11/2012 5:52 μμ Page 135
ΠΡΟΒ
ΚΕΦΑΛΑιΟ 4ο: ΤΕχνΟΛΟΓιΑ ΤΟΥ ΑνΑσ
ΛΗΜ ΑΤΑ ΓΙΑ ΥνδΥΑσΜ ΛΥΣ ΕνΟΥ D Η
NA
Ο ΘΩ ΙΚ Μ Ο Α Ν Σ Ο Μ Ο Υ
δίνεται η αλληλουχία: 5΄- ATTCGAGCCGGTTGATTAACTGACCGGATATCGCGTCGACCGG- 3΄ 3΄ - TAAGCTCGGCCAACTAATTGACTGGCCTATAGCGCAGCTGGCC- 5΄ Έστω ότι θέλουμε να κλωνοποιηθεί το ενδιάμεσο τμήμα που ξεχωρίζει. α. Ποια περιοριστική ενδονουκλεάση είναι κατάλληλη και γιατί; β. σε πόσα και ποια τμήματα θα κοπεί το συγκεκριμένο DNA με την ενδονουκλέαση αυτή; Σημείωση: δίνεται ότι η κατεύθυνση δράσης και των δύο ενδονουκλεασών είναι 5΄ 3΄.
6. Κατά τη διαδικασία κατασκευής cDNA βιβλιοθήκης ένα μόριο ώριμου mRNA έχει 2.000 νουκλεοτίδια και χρησιμοποιείται ως καλούπι για σύνθεση υβριδίου mRNA-cDNA. στο υβριδικό μόριο που δημιουργήθηκε τα 800 νουκλεοτίδια περιέχουν την αζωτούχα βάση G και τα 200 την αζωτούχα βάση Τ. να απαντήσετε στις παρακάτω ερωτήσεις: α. Ποιες αλληλουχίες βάσεων (ονομαστική αναφορά) υπάρχουν στο mRNA που χρησιμοποιείται ως καλούπι για τη σύνθεση του cDNA; β. Πόσοι φωσφοδιεστερικοί δεσμοί υπάρχουν στο υβριδικό μόριο mRNA-cDNA; γ. Ποιο ένζυμο δημιούργησε το μονόκλωνο cDNA; δ. Πόσα νουκλεοτίδια περιέχουν την αζωτούχα βάση U και πόσα την Α στο υβριδικό μόριο mRNA-cDNA; 7. δίνονται τα παρακάτω μόρια DNA: το Α που είναι γραμμικό και το Β που είναι κυκλικό.
μόριο Α
μόριο Β
στο μόριο Α υπάρχει 3 φορές η αλληλουχία που αναγνωρίζει η EcoRI και στο μόριο Β υπάρχει 2 φορές. (Oι παραπάνω αλληλουχίες έχουν την κατεύθυνση δράσης της EcoRI). Τα παραπάνω μόρια περιέχονται σε δοκιμαστικό σωλήνα στον οποίο υπάρχει και το ένζυμο EcoRI. α. Πόσα θραύσματα – τμήματα προκύπτουν από τη δράση αυτής; β. Πόσοι φωσφοδιεστερικοί δεσμοί και πόσοι δεσμοί υδρογόνου θα διασπαστούν σε κάθε μόριο από τη δράση του ενζύμου; 8. Έστω ότι η αλληλουχία τμήματος DNA που αντιστοιχεί σε εσώνιο κάποιου γονιδίου είναι: 3΄AGGCTATG 5΄ 5΄TCCGATAC 3΄
135