LA INFECCIÓN URINARIA El urocultivo
LA INFECCION URINARIA FACTORES PREDISPONIENTES • Alteraciones orgánicas del aparato urinario • Alteraciones funcionales del aparato urinario • Instrumentación urinaria • Diabetes • Alcoholismo • Malnutrición • Enfermedades debilitantes • Alteración inmunológica • Larga hospitalización Diagnóstico y tratamiento de infecciones del tracto urinario en los Servicios de Urgencias https://www.youtube.com/watch?v=kIIxgAYz5CI MªSol Nieto.TEL
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RECOGIDA DE MUESTRAS Para la recogida, transporte y manipulación de muestras podrán tenerse en cuenta los protocolos establecidos por la SEIMC. La correcta recogida y conservación de la orina para urocultivos es fundamental para que puedan obtenerse resultados fiables. Los puntos clave son: - Mujeres: Obtención de la orina después de separar los labios vaginales de manera que el chorro de orina no toque genitales externos. -Hombres: Retracción del prepucio de manera que el chorro de orina salga directamente. MªSol Nieto.TEL
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UROCULTIVO El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar infección del tracto urinario. En el cultivo de orina se cuantifica el número de bacterias presentes, que suele expresarse como unidades formadoras de colonias (UFC) por ml.
El urocultivo debe permitir cuantificar el número de bacterias entre 1.000 y más de 100.000 UFC/ ml y obtener colonias aisladas y realizar antibiograma.
UROCULTIVO • La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnóstico de infección del tracto urinario, ya que prácticamente está presente en todas las infecciones urinarias. Una excepción es la bacteriuria sintomática en la que la piuria puede estar ausente.
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UROCULTIVO • Cuando llega una muestra de orina podemos sembrarla directamente ó hacer un screening pasándola por los analizadores automáticos para la detección de bacterias en orina y si da negativo no se siembra pero si da positivo si procedemos a sembrarla en placa y hacer antibiograma si procede. MªSol Nieto.TEL
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SCREENING DE ORINAS El sistema SYSMEX UF-1000 es un analizador de orinas que realiza el sedimento de orina mediante citometría de flujo (lo vamos a utilizar como ejemplo de analizador de orinas). Los parámetros que se informan son: • Leucocitos • Hematíes • Células de epitelio plano • Células redondas pequeñas • Cilindros • Bacterias •Levaduras La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnóstico de infección del tracto urinario, ya que prácticamente está presente en todas las infecciones urinarias. Una excepción es la bacteriuria sintomática en la que la piuria puede estar ausente. MªSol Nieto.TEL
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SCREENING DE ORINAS La citometría de flujo (CMF) es una técnica de análisis de partículas en suspensión en un líquido que les permite pasar a gran velocidad, de una en una, por delante de uno o varios rayos láser.
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SCREENING DE ORINAS PRINCIPIO DEL ANÁLISIS
Un sistema óptico e informático analiza las propiedades ópticas de las células (difracción y reflexión luminosa) permitiendo caracterizarlas y clasificarlas. La utilización de moléculas fluorescentes permite aumentar el número de parámetros estudiados Utiliza 2 colorantes específicos para los ácidos nucleicos y para las membranas. Existen 2 cámaras de análisis separadas y específicas: bacterias y sedimento. MªSol Nieto.TEL
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SCREENING DE ORINAS ETAPAS DEL ANÁLISIS 1.
Aspiración de la orina.
2. La muestra es separada en 2 mediante una cánula de muestreo y transferida a 2 cámaras reactivas (para el análisis del sedimento y para el análisis de bacterias).En cada una de las cámaras se efectúa una dilución y una tinción.
3. Las muestras son agitadas y calentadas. Las bacterias se tiñen durante aproximadamente 20 segundos a 42°C 4. Se mide la conductividad de la muestra de orina 5. Las muestras teñidas son aspiradas y empujadas al canal de recogida en el que se introduce el líquido conductor 6. Este líquido forma un túnel líquido
(flujo laminar de tipo sheath) en el que las células de la orina son estiradas y alineadas para ser analizadas. MªSol Nieto.TEL
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SCREENING DE ORINAS Se pueden visualizar las diferentes gráficas de resultados o Scattergramas, dónde se representa la distribución de los elementos encontrados en el análisis de la muestra urinaria. Scattergrama 2:
Scattergrama 1:
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UROCULTIVO La técnica más habitual es la siembra con asa calibrada.
Esta técnica es fácil y rápida y permite depositar sobre la superficie del medio de cultivo un volumen determinado de orina (0.001 ml o 0.01 ml), de forma que cada colonia en el medio (después de incubar) equivale a 1.000 (asa de 0.001 ml) ó a 100 UFC/ml (asa de 0.01 ml) MªSol Nieto.TEL
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MEDIOS DE CULTIVO Los medios que se utilizan para cultivo de orinas son: • CLED • MC.CONKEY • AGAR SANGRE • AGAR chromID CPS (medio cromegénico) MªSol Nieto.TEL
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MEDIOS DE CULTIVO CLED (Agar cistina-lactosa-deficiente en electrolitos) - Agar peptona base con lactosa y Lcistina - Azul de bromotiol (indicador) inhibe la actividad de Proteus spp. Es un medio no selectivo que permite el crecimiento de casi todos los uropat贸genos y permite distinguir aquellos que fermentan la lactosa (E. coli, Klebsiella) de los que no la fermentan (Proteus) y de los enterococos. M陋Sol Nieto.TEL
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MEDIOS DE CULTIVO MCCONKEY:
- Peptona base con lactosa como azúcar diferencial. - El rojo neutro actúa como indicador: lactosa (+): rosa lactosa (-): incoloro - Cristal violeta, inhibidor de Gram positivos - Sales biliares, inhibidor de Gram positivos y algunos bacilos Gram negativos. Útil para el Aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos fermentadores y no fermentadores de lactosa. MªSol Nieto.TEL
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MEDIOS DE CULTIVO AGAR SANGRE: Agar base con digerido pancreático de caseína y soja o con infusión de cerebro y corazón con 5% de sangre de oveja. Este medio sostiene el desarrollo de la mayoría de los gérmenes con importancia clínica excepto los más exigentes. MªSol Nieto.TEL
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MEDIOS DE CULTIVO AGAR chromID CPS: El agar consta de una base nutritiva rica que combina diferentes peptonas y 3 sustratos cromogénicos que favorecen la detección de las actividades de enzimas específicas. La identificación de las bacterias aisladas más comúnmente en infecciones del tracto urinario como: • E. coli: coloración espontánea (de rosa a burdeos) • Enterococcus: coloración espontánea de color turquesa • Klepsiella: coloración espontánea entre verde azulado a gris azulado • Proteus: coloración espontánea de color marrón MªSol Nieto.TEL
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CULTIVOS DE ORINA • Los cultivos deben incubarse durante 18 - 24 h en aerobiosis a 37C y aunque los negativos pueden desecharse tras la primera lectura, ante diagnósticos específicos (microorganismos de lento crecimiento, sospecha de patógenos inusuales) la incubación debe prolongarse 24 - 48 h más. MªSol Nieto.TEL
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LECTURA DE CULTIVO EN UFC/ml: 10.000 UFC/ml
100.000 UFC/ml
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1000.000 UFC/ml
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LECTURA DEL CULTIVO EN UFC/ml Menos de 1.000 ó 10.000 UFC Se informará: “Menos de 1.000 ó 10.000 UFC/ml”. MªSol Nieto.TEL
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LECTURA DEL CULTIVO EN UFC/ml De 10.000 a 100.000 UFC • Un patógeno sin células epiteliales: informar microorganismo, número de colonias, antibiograma y valorar clínicamente. • Dos patógenos: informar microorganismos, número de colonias y solicitar nueva muestra. • Más de dos patógenos: “Cultivo mixto, probable contaminación”. MªSol Nieto.TEL
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LECTURA DEL CULTIVO EN UFC/ml 100.000 ó más UFC: -Uno o dos patógenos: informar identificación más antibiograma
-Más de dos especies: “cultivo mixto, probable contaminación”. MªSol Nieto.TEL
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AGENTES ETIOLÓGICOS A INVESTIGAR GRAM NEGATIVOS
GRAM POSITIVOS
• Escherichia. coli
•Enterococcus faecalis
• Proteus mirabilis
•Sthaphyllococcus (aureus,epidermidis..)
• Klebsiella pneumoniae
• Enterobacter • Pseudomonas MªSol Nieto.TEL
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AGENTES ETIOLÓGICOS A INVESTIGAR HONGOS • Candida albicans VIRUS • Herpesvirus Adenovirus OTROS • • • •
Chlamydia trachomatis Neisseria gonorrhoeae Anaerobios Mycobacterias MªSol Nieto.TEL
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IDENTIFICACION DE UROPATOGENOS EN PLACA Utilizaremos los medios cromogenicos pues la identificación presuntiva los principales uropatógenos de interés clínico en el medio de cultivo cromogénico proporciona una respuesta diagnóstica rápida, reduce la carga de trabajo y los costos, al evitar pruebas adicionales en la mayoría de los aislamientos y puede ser considerada como una técnica fiable en laboratorios asistenciales con un gran número de pacientes diarios. MªSol Nieto.TEL
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IDENTIFICACION DE E.coli • • • •
Enterobacteria. Bacilo. Gram negativa. Produce vitamina k y B.
• Anaerobia facultativa. • Con flagelos peritricos (rodean su cuerpo) • fermenta la glucosa y la lactosa. • Produce cistitis y pielonefritis. MªSol Nieto.TEL
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IDENTIFICACION DE E.coli Crecimiento en
CPS después de 24 h a 37ºC en aerobiosis.
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IDENTIFICACION DE E.coli con el sistema automatizado Vitek utilizaríamos • tarjeta de identificación GN (para Gram negativos).
• tarjeta de antibiograma 244 (para enterobacterias uro patógenas fermentadoras de lactosa)
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E. COLI • Tributo a E coli , divertido https://www.youtube.com/watch?v=JAqW4OTFB4M
• E coli , imagen https://www.youtube.com/watch?v=BWVHGviSiMs&list =PL8EB227914C08F7BA&index=2
• bacterias https://www.youtube.com/watch?v=tqOVYpkZ0qs&index=6&list=PL 8EB227914C08F7BA
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Klebsiella pneumoniae ES: • Bacilo • Aerobio • Gram negativo • Catalasa positiva • Oxidasa negativa • poca movilidad • Fermenta la glucosa y la lactosa y produce gas. • Patógeno oportunista. PRODUCE: • sepsis. • infecciones respiratorias. • infecciones urinarias. Presenta fuerte resistencia trasferible a antibióticos.
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Klebsiella pneumoniae CRECIMIENTO EN CPS después de 24 h a 37ºC en aerobiosis.
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IDENTIFICACION DE Klebsiella pneumoniae
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IDENTIFICACION DE Klebsiella pneumoniae con el sistema automatizado Vitek utilizaríamos • tarjeta de identificación GN (para Gram negativos).
• tarjeta de antibiograma 244 (para enterobacterias uro patógenas fermentadoras de lactosa)
http://www.youtube.com/watch?v=1bVIcY30YU0 MªSol Nieto.TEL
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Enterococcus faecalis Es una bacteria comensal, que habita el tracto gastrointestinal de humanos. Es el 3º organismo más común responsable de las infecciones nosocomiales. E. faecalis es: • Gram positiva. • Inmóvil. • Anaerobia facultativa. • Fermenta la glucosa sin producir gas. • Catalasa negativo. E. faecalis puede vivir en ambientes extremos que incluyen pH altamente alcalino de 9,6 y elevadas concentraciones de sal.
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Enterococcus faecalis En una ITU producida por Enterococcus faecalis los síntomas incluyen : fiebre, orina turbia, fuerte olor de la orina, dolor o sensibilidad sobre el hueso púbico, sensación de ardor que acompaña a la micción, sangre en la orina, irritabilidad, falta de apetito, pérdida del control urinario, una mayor frecuencia de micción, náuseas y vómitos.
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Enterococcus faecalis E. faecalis puede causar: • endocarditis. • infecciones de vejiga. • infecciones de próstata. • infecciones de epidídimo. MªSol Nieto.TEL
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Enterococcus faecalis CRECIMIENTO EN CPS después de 24 h a 37ºC en aerobiosis.
CRECIMIENTO EN Agar sangre después de 24 h a 37ºC en aerobiosis.
http://www.youtube.com/watch?v=Lcs2OkoS8uY MªSol Nieto.TEL
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Enterococcus faecalis identificación La identificación y antibiograma lo hacemos por Vitek con las tarjetas: • GP(Estafilococos y Estreptococos) • AST-P589 (Estreptococos/ Enterococos)
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Enterococcus faecalis • E. faecalis resiste aminoglicósidos, aztreonam, cefalosporina, clindamicina, las penicilinas semisintéticas (nafcilina , oxacilina, amoxicilina y trimetoprim-sulfametoxazole). • La exposición a las cefalosporinas es un riesgo particularlmente importante en la colonización e infección con enterococos. Existen una variedad de Enterococos que particularmente pueden ser resistente a muchos glicopeptidos como la Vancomicina MªSol Nieto.TEL
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Enterococcus faecalis
Clase virtual de Streptococcus https://www.youtube.com/watch?v=BewCmJB6fuY video de Enterococcus faecalis https://www.youtube.com/watch?v=Lcs2OkoS8u Y MÂŞSol Nieto.TEL
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Pseudomonas aeruginosa • Clase virtual Género Pseudomonas especie aeruginosa https://www.youtube.com/watch?v=O0Y_ MefppRs • Pseudomonas.wmv https://www.youtube.com/watch?v=NdfsIq NEowo MªSol Nieto.TEL
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Pseudomonas aeruginosa
Bacteria pseudomonas https://www.youtube.com/watch?v=4uFtNOW5Q5k&index=3&list=PLMJ CIhZFitTrHfOf91xTgujNzJc9leLw6 MÂŞSol Nieto.TEL
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Proteus mirabilis PROTEUS MIRABILIS
• http://www.youtube.com/watch?v=g5mxYQw2GuY • First 24 hour trial Proteus mirabilis on SBA http://www.youtube.com/watch?v=opfQHjN5dAo Proteus VB http://www.youtube.com/watch?v=yNI_Axi7IDY
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Proteus mirabilis
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IDENTIFICACION Y ANTIBIOGRAMA
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ANTIBIOGRAMA MANUAL • El estudio de la sensibilidad de los microorganismos a los antimicrobianos se realiza por técnicas de dilución o de difusión. • Las técnicas de dilución proporcionan resultados cuantitativos (concentración mínima inhibitoria, CMI) • Las técnicas de difusión cualitativos (sensible, intermedio, resistente) MªSol Nieto.TEL
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ANTIBIOGRAMA MANUAL Para el antibiograma utilizamos suspensión de la colonia a estudiar con una concentración de 05 McFarlan que inoculamos en una placa de Muller Hilton salino, incuba 18 horas a 37ºC. Antibiograma por difusión con discos en el que se observa la presencia de halos de inhibición. Antibiograma por E-test en el que se observa una elipse de inhibición. El punto donde la elipse corta con la tira es el valor de CMI, en este caso 0,5 mg/l.
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Video sensibilidad bacteriana ANTIBIOGRAMA
https://www.youtube.com/watch?v=uweRheNCj_c
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IDENTIFICACIÓN Y ANTIBIOGRAMA DE MICROORGANISMOS SISTEMA AUTOMATIZADO El sistema VITEK 2 realiza los análisis de identificación y sensibilidad supervisando continuamente el crecimiento y la actividad de los organismos en el interior de los pocillos de las tarjetas del test. El sistema óptico lleva a cabo esta función. El sistema óptico de transmitancia utiliza luz visible para medir directamente el crecimiento del organismo. Este sistema óptico se basa en una lectura de luz inicial en un pocillo, antes de que se haya producido un crecimiento significativo. El muestreo de la transmitancia de luz en el mismo pocillo cada 15 minutos mide el crecimiento del organismo mediante la cantidad de luz a la que se impide pasar a través del pocillo. MªSol Nieto.TEL
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IDENTIFICACION automatizada VITEK 2 es un sistema que utiliza tarjetas con reactivos colorimétricos, las que son inoculadas con la suspensión de un cultivo puro microbiano y el perfil de desarrollo es interpretado de forma automática. Las tarjetas reactivas tienen 64 pozos que contienen, cada uno, un sustrato de prueba individual. Con estos sustratos se miden varias actividades metabólicas como acidificación, alcalinización, hidrólisis enzimáticas y desarrollo en presencia de sustancias inhibidoras.
Existen 4 tipos de tarjetas reactivas disponibles para la identificación de diferentes clases de organismos: 1. GN – Bacilos Gram negativos fermentadores y no fermentadores. 2. GP - Cocos y bacilos no formadores de esporas Gram positivos 3. YST – Levaduras y organismos levaduriformes 4. BCL – Bacilos formadores de esporas Gram positivos.
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IDENTIFICACIÓN Y ANTIBIOGRAMA DE MICROORGANISMOS POR METODOS AUTOMATIZADOS (VITEK) LAS TARJETAS PARA IDENTIFICACIÓN -GRAM-NEGATIVOS: GN(Enterobacteriasy Bacilos GN no fermentadores) -GRAM-POSITIVOS: GP(Estafilococos y Estreptococos) -Neisseria-Haemophilus: NH(Neisseria/Haemophilus/Ca mpylobacter/HACEK)
LAS TARJETAS PARA ANTIBIOGRAMA -Enterobacterias(AST-N243) -Enterobacterias-aislamientos urinarios (AST-N244) -BGN No Fermentadores (AST-N245) -Estafilococos (AST-P626) -Estreptococos/ Enterococos(AST-P589) -Neumococo (AST-ST01) -Levaduras (AST-Y01)
-Anaerobios-Corynebacterias: ANC -LEVADURAS: YST(Candida y Cryptococcus)
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IDENTIFICACIÓN Y ANTIBIOGRAMA POR METODOS AUTOMATIZADOS (VITEK)
video vitek https://www.youtube.com/watch?v=1bVIcY30YU0 MªSol Nieto.TEL
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VIDEOS RELACCIONADOS • Video de E.coli en heces y en orina https://www.youtube.com/watch?v=JAqW4OTFB4M • SuperbacteriaE.coli https://www.youtube.com/watch?v=gJ12hb5Lzp4 • Diagnóstico y tratamiento de infecciones del tracto urinario en los Servicios de Urgencias https://www.youtube.com/watch?v=kIIxgAYz5CI
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