KPL 公司简介 ¾
世界上最早实现亲和纯化二抗商业化的生物公司
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世界上最大的二抗和底物显色系统生产商 拥有近 40 年的产品研发经验
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ISO 9001 质量体系认证，所有产品批间差极小，品质可靠 产品特点：高纯度、高灵敏度、高信噪比 (信号强、背景低) 2013 年被世界著名体外诊断试剂供应商 SeraCare 收购，成为深受广大诊断企业好评的优质试剂供应商
官方授权中国独家代理——北京西美杰科技有限公司
KPL 官方网址: www.kpl.com 客服热线 400‐050‐4006 北京西美杰官方网站：www.seajetsci.com 技术网站：www.seajetsci.cn
手 册 指 南 第一部分 高性价比二抗 ........................................................................................................................... 1 Part 1 如何选择合适的二抗 ............................................................................................................... 1 Part 2 优质多样化二抗产品选择指南 ............................................................................................... 3 第二部分 WB 底物及试剂盒 ...............................................................................................................
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Part 1 WB 底物 ...............................................................................................................................
6
Part 2 WB 通用试剂盒 ...................................................................................................................
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Part 3 WB 常见问题解析 .................................................................................................................... 8 第三部分 ELISA 底物及试剂盒 ................................................................................................................. 9 Part 1 ELISA 底物 ................................................................................................................................. 9 Part 2 ELISA 通用试剂盒 ................................................................................................................... 12 Part 3 ELISA 常见问题解析 ............................................................................................................... 13 第四部分 IHC 检测系统 .......................................................................................................................... 14 Part 1 生物素‐链霉亲和素试剂盒 .................................................................................................... 14 Part 2 免疫组化底物 ......................................................................................................................... 15 Part 3 复染试剂 ................................................................................................................................. 15 Part 4 IHC 常见问题解析 .................................................................................................................. 16 第五部分 免疫学辅助试剂 ..................................................................................................................... 18 第六部分 细菌抗体 ................................................................................................................................. 20 第七部分 蛋白纯化/标记试剂盒 ........................................................................................................... 19 Part1 蛋白纯化 .................................................................................................................................. 22 Part2 蛋白标记 .................................................................................................................................. 23
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We do what we have promised
第一部分 高性价比二抗 Part 1 如何选择合适的二抗 二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标记物，二抗针 大节省了时间和费用； 检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测 方案，如 ELISA、WB、IHC、IF、IP、Flowcyto 等，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案 的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑： 【一抗的种属来源】
二抗应根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。例如：如果一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的 二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可） ；西美杰能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、 兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等 20 多个物种。
高 性 价 比 二 抗
对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大
【一抗的类别与亚型】 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配，通常是针对单克隆抗体而言。如果单克隆一抗是小鼠 IgG 的某一亚类（IgG1, IgG2a,IgG2b,IgG3），那么几乎所有的抗小鼠 IgG 都可以与之结合，在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗 相应物种 IgG，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠 IgG1，那么你可以选择抗 IgG1 的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。另外，在一些特殊的实验里，只需要检测样本里的 IgG 或者 IgM，常规 的 Anti‐IgG (H+L)由于与 IgG 的重链和轻链都有结合反应，而 IgG、IgM、IgA 都有保守的轻链结构域，因此不能特异性 的检测某种类型的 IgG 或者 IgM。这时候就需要针对特殊类型 Ig 分子的二抗。 如 KPL 的 Anti‐IgG (γ)二抗是由 Anti‐IgG(H+L) 与 IgM、IgA 等吸附后的二抗，消除了能与后者结合的部分。西美杰能为您提供各种属通用二抗，或者特定亚型二抗等。
【Anti‐IgG 还是 Anti‐IgG, F(ab’)2 fragment】 全 IgG 形式的二抗是从抗血清中分离出来的完 整的分子；这些抗体有一个 Fc 部分和两个与抗 原结合的 Fab 部分，因此是二价的，也是效价 最高的。F(ab’)2 片段形式的二抗是用胃蛋白酶 消化 IgG 去除 Fc 部分，剩下两个靠二硫键连接 的结合抗原的 Fab 部分，依然是二价的；该抗 体可避免与 Protein A /G 或与 Fc 受体的结合(胸 腺、脾脏、血液的组织以及造血细胞、淋巴细 胞、B 细胞等细胞内 Fc 受体较多)，还由于其 分子本身比较小，更容易渗透入细胞组织结构内而灵敏度更高。Fab 片段形式的二抗是用木瓜蛋白酶消化 IgG 后得到 的，由于只含有一个结合位点，可用来封闭内源性的免疫球蛋白。
【二抗的种属来源】 二抗的种属来源与其质量没有必然的联系，不同来源（如驴或者山羊）的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而 在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果 2 个一抗一个是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗 山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。西美杰有相应的驴来源的二抗，非常适合做类 似双标的免疫实验。
【二抗的耦联标记】 耦联到二抗上的标记主要有酶（辣根过氧化酶 HRP 和碱性磷酸酶 AP 或其衍生物 APAAP，PAP） ， 荧光基团 （FITC、Rhodamine、 Texas Red、PE、Dylight 等）、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验，对于 Western Blot 和 ELISA， 最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基 团标记的二抗，免疫组化中也可以使用 HRP 或 AP 标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用 Biotin/Avidin 检测系统。在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记；而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免 疫电镜中。西美杰能为您提供上述所有不同类型标记的二抗。各种常用普通荧光标记特点如下：
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1. 异硫氰酸荧光素 (FITC) FITC 纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。最大吸收光波长为 490‐495nm， 最大发射光波长为 520‐530nm，呈现明亮的黄绿色荧光，由于 FITC 是小分子化合物，每 一个抗体可标记几个 FITC 分子，是目前应用最广泛的荧光素。FITC 荧光二抗主要优点是 人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。然而 FITC 的最大缺点是 淬灭快，因此要和抗淬灭剂一起使用。
高 性 价 比 二 抗
2. 四甲基异硫氰酸罗丹明及衍生物 TRITC, Rhodamine Red‐X(RRX), Texas Red(TR) 这些罗丹明的衍生物耦联基团具有不同的吸收波长(550, 570, 596nm)和最大发射波长(570, 590, 620nm)。TRITC 为罗丹明的衍生物，紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为 550nm， 最大发射光波长为 620nm，呈现橙红色荧光，与 FITC 的绿色荧光对比鲜明，可配合用于 双重标记或对比染色。TRITC 荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色，是目前最理想的罗丹 明标记替代物。 3. 菁类染料‐Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)
Cy2 耦联基团激发波长为 492nm，发光为波长 510nm 的绿色可见光，但要避免使用含有 磷酸化的苯二胺的封片剂，因为这种抗淬灭剂和 Cy2 反应，在染色片储存后会导致荧光微 弱和扩散。Cy3 和 Cy5 比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。Cy3 耦联基团激 发光的最大波长为 550nm，最强发射光为 570nm。Cy5 耦联基团的激发波长最大 650nm， 发光波长最大 670nm，但难用裸眼观察，而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察 Cy5 时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜，且在水相封片剂中应当加入抗 淬灭剂。使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐使用 Cy5。 4. 藻红蛋白或藻胆色素蛋白‐ PE 存在于被称为藻红的多聚微粒中，位于叶绿素的反应中心，当藻红蛋白被分离和纯化后， 其蛋白质变得具有很强的荧光，能吸收不同波长的光，发出亮红色的荧光，藻红蛋白 PE 的吸收波长范围较广，最大的吸收波长为 566nm，最大的发射波长为 574nm。藻红蛋白 作为荧光标记物具有以下优点：首先具有强的长波长激发和发射荧光，可避免来自其他 生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外 PE 具有非常高的水溶性而且 能够与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。 5. Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA) AMCA 吸收光波长最大为 350nm，发荧光则为 450nm。对于荧光显微镜来说，AMCA 可以用汞灯来激发，用紫外滤板 来观察。由于 AMCA 的信号相对较弱，单标实验中不推荐使用 AMCA，最常用于多标记实验中，AMCA 和 FITC 一样很 快淬灭，建议配合抗淬灭剂使用延长发光时间。
【二抗的纯度】 亲和层析纯相对传统的血清纯化、盐沉淀等方法更加高效，得到的抗体纯度最高，产生的非特异性背景最少，所以亲 和层析纯化的抗体一般更受人们欢迎。亲和层析纯化方法主要有 2 种，一种是 Protein A/G/L 亲和层析纯化，经过此种 纯化，得到的是除杂质以外全部的免疫球蛋白，此种纯化方式简单，效率高，成本相对较低，被大量抗体生产商所使 用；另外一种是抗原亲和层析纯化，此方法是用制备抗体的抗原与抗体特异性结合的方式进行，得到的抗体是特种免 疫球蛋白，效率相对 Protein A/G/L 纯化更高，特异性更好，是特异性反应检测实验的上上之选。KPL 公司均采用抗原 亲和层析纯化二抗，具有纯度高，低背景，特异性好等特点，有效降低了在实验过程中由于非特异性结合所产生的背 景信号问题，大大提高了信噪比，另外，严格的生产工艺保证了产品批间差稳定，能制备成干粉形式提供，产品性能 更稳定，延长了保质期，满足科研、诊断工业等个领域的实验要求。
【血清吸附处理】 经过血清吸附过的二抗排除了与相关物种组织可能发生非特异性反应的免疫球蛋白，因此将二抗与样本的非特异性结 合降低到最低。如经过人血清吸附过的二抗，在检测过程中就不会与样本中人的免疫球蛋白发生交叉反应，KPL 为您 提供的二抗中，大多数常用二抗是经过人、小鼠或大鼠血清，或者多种属（人、兔、鼠、牛、鸡、山羊、山羊、豚鼠、 仓鼠、马等）血清同时吸附的，当样本中可能存在这些种属的免疫球蛋白而导致交叉反应时，推荐使用经过血清吸附 过的二抗。 KPL 是目前屈指可数的血清吸附二抗生产商之一，顶级品牌，值得信赖。
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Part 2 优质多样化二抗产品选择指南 KPL 目前能提供 600 多种二抗，覆盖 20 多个物种，18 种标记。制备抗体的抗原、免疫动物都是经过严格筛 选，得到的抗体经过盐沉淀、抗原吸附亲和纯化、多物种血清吸附处理、多重检测、冻干粉制备，具有高纯度、 高灵敏度、特异性强、批次非常稳定等特点，并有不同亚型抗体如 IgA (α)、IgE (ε)、IgG (γ)、IgM (μ)、IgG (H+L)、 IgG (Fc)，另外还有 F(ab’)2 Fragments 的二抗满足不同检测需求。
高 性 价 比 二 抗
2. 高灵敏度
1. 高纯度 HPLC results for Goat Anti‐Human IgG demonstrates the purity of the KPL antibody vs. that of a leading competitor.(峰越少越好) 3. 特异性强
KPL’s antibody demonstrates signal‐to‐noise.(信号越强越好)
stronger
signal
and
higher
4. 批次稳定
KPL’s Goat Anti‐Mouse IgG (H+L) antibody demonstrates superior specificity when compared with the antibodies of two leading competitors.(非特异性物种检测值越低越好)
DyLight 488 variability among lots was extremely low (less than 4% Relative Standard Deviation)(数值越稳定越好)
5. 种属最全 KPL 的二抗物种覆盖 20 多个，世界上最全。主要种属有：人、兔、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、马、牛、猴、 猪、猫、鸡、豚鼠、仓鼠等，其中独家特殊物种二抗有：鸭、鹿和白足鼠。 6. 亚型丰富 主要有 IgA (α)、IgE (ε)、IgG (γ)、IgM (μ)、IgG (H+L)、IgG (Fc)、IgA+ IgG+ IgM 等多种亚型满足您不同实验需要。 7. 稀释比高 KPL 提供的酶标（HRP/AP）二抗 WB 推荐稀释 1:5000~20000；普通荧光（FITC/TRITC）二抗 IF/ICC 推荐稀释比 为 1:100；Dylight 系列 IF/ICC 推荐稀释比为 1:100~1000.
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KPL 常规标记热销二抗产品列表
高 性 价 比 二 抗
热销星级
标记
抗人
抗小鼠
抗兔
抗大鼠
链霉亲和素
★★★
Unlabeled
01‐10‐06
01‐18‐06*
01‐15‐06
01‐16‐06
‐‐
★★★★★
HRP
074‐1006
074‐1806*
04‐15‐06
14‐16‐06
474‐3000
★★★
AP
05‐10‐06
05‐18‐06*
05‐15‐06
15‐16‐06
475‐3000
★★★
ReserveAP™
0751‐1006
0751‐1806
0751‐1506
‐‐
‐‐
★★★
Biotin
16‐10‐06
176‐1806*
176‐1506
16‐16‐06
57‐40‐06
★★★
Gold(5nm)
58‐10‐06
58‐18‐06
58‐15‐06
‐‐
58‐30‐06
★★★
Gold(40nm)
57‐10‐06
57‐18‐06
57‐15‐06
‐‐
57‐30‐06
★★★★★
FITC
02‐10‐06
172‐1806*
172‐1506
02‐16‐12*
072‐30‐00
★★★★★
TRITC
‐‐
03‐18‐06*
03‐15‐06
03‐16‐06
073‐30‐00
★★★
Cy3
072‐01‐10‐06
072‐01‐18‐06*
072‐01‐15‐06
072‐01‐16‐06
072‐01‐30‐00
★★★
Cy5
072‐02‐10‐06
072‐02‐18‐06*
072‐02‐15‐06
‐‐
072‐02‐30‐00
★★★
RPE
‐‐
0718‐18‐061*
0718‐15‐061
0718‐16‐061*
‐‐
备注：*标记产品为经过血清吸附过的二抗。更多物种、标记、亚型抗体请拨打 400‐050‐4006 咨询。
KPL 除了提供传统酶标、荧光二抗以外，还研发了 DyLight 系列荧光二抗，DyLight 系列荧光二抗相对传统荧 光抗体而言，具有以下特点： 产品特色： ) 荧光亮度更强，灵敏度更高； ) 抗淬灭性好，发光更持久，适合于荧光拍照； ) 高信噪比、低背景； ) 稳定性更好，适用于 pH4~9 的各种缓冲系统中； ) 应用于 IF, WB, ELISA, 流式等多种分析； ) DyLight 680/800 可用于 Licor Odyssey 系统 DyLight Offers Performance Comparable to Alexa
Fluorescent Detection on Western Blots with DyLight 549 and 649
Near Infrared Fluorescent Imaging with DyLight 680 and 800
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热销 DyLight 系列二抗产品列表
标记
替代标记
DyLight 405
DyLight 549 DyLight 594
Cascade Blue Alexa 488, FITC Alexa 546, Alexa 555, TRITC, CY3 Alexa 594, Texas Red
抗小鼠
抗兔
抗大鼠
链霉亲和素
072‐08‐10‐06
072‐08‐18‐06*
072‐08‐15‐06
‐‐
‐‐
072‐03‐10‐06
072‐03‐18‐06*
072‐03‐15‐06
072‐03‐16‐06
072‐03‐30‐00
‐‐
‐‐
042‐04‐15‐06
‐‐
072‐04‐30‐00
‐‐
072‐09‐18‐06*
072‐09‐15‐06
‐‐
‐‐
Alexa 633
‐‐
072‐10‐18‐06*
‐‐
072‐10‐16‐06
072‐10‐30‐00
DyLight 649
Alexa 647, CY5
‐‐
072‐05‐18‐06*
‐‐
‐‐
‐‐
DyLight 680
Alexa 680, Cy5.5
072‐06‐10‐06
072‐06‐18‐06*
072‐06‐15‐06
072‐06‐16‐06
072‐06‐30‐00
DyLight 800
IRDye 800
072‐07‐10‐06
072‐07‐18‐06*
072‐07‐15‐06
072‐07‐16‐06
072‐07‐30‐00
DyLight 633
高 性 价 比 二 抗
DyLight 488
Alexa 405,
抗人
备注：*标记产品为经过血清吸附过的二抗。更多物种、标记、亚型抗体请拨打 400‐050‐4006 咨询。
二抗复溶和保存小贴士 KPL 的二抗大多数是干粉状的，干粉二抗在 4 度可稳定保存 1 年。 对于酶标二抗，KPL 推荐 3 种复溶方式，水，50%甘油，或者使用酶标 稳定剂（KPL 推荐），使用水或者 50%甘油复溶的二抗需要在‐20 度条件下保存，并避免反复冻融，使用酶稳定剂复溶的二抗则在 4 度保存即可，复溶的二抗可稳定保存 1 年； 对于普通荧光二抗，如 FITC、TRITC 等，使用水复溶即可，复溶后于‐20 度避光保存，防止荧光淬灭，可稳定保存 1 年。 对于 Dylight 系列二抗，使用水复溶即可，复溶后于 4 度避光保存，防 止荧光淬灭，可稳定保存 1 年。
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第二 二部分 WB 底物 物及试剂 剂盒 Partt 1 WB 底物 底 WB/IP 实验 验要得到一个 个优质的实验 验图片，除了 了与使用高质 质量的一抗、二 二抗以外，还 还与后期的检 检测系统的灵 灵敏 度有 有很重要的关 关系。WB 和 IP 目前使用 用最多的是化 化学发光显色 色，当然也有 有采用普通沉 沉淀型底物进行比色法分析 析， 或者 者使用荧光二 二抗进行的荧 荧光法检测也 也越来越受欢 欢迎。西美杰 杰独家代理的 KPL 公司为您 您提供各种检 检测方法，各 各种 灵敏 敏度的 WB/IIP 显色底物， ，可以满足您 您不同的实验 验需求。 检测
WB 底 物 及 试 剂 盒
方法
酶
热销星级 ★ ★★★★★
化 学
膜 膜张数
货号
组分 分
LumiGLO 2‐C C
54‐61‐00
2*120 ml(A 液+B 液 液)
LumiGLO Resserve 3‐C
54‐71‐02
2
(10 0cm )
颜色 色
240
‐‐
100
‐‐
1*17 mL A 液,1*34 液 HRP
★★★
mL B 液,1*10 00 mL 20X 洗脱液
发 AP
显 色 AP
(HRP g//ml) (pg)10‐12 (pg~fgg) 10‐15~10 0‐12
54‐51‐00
2*25 ml(A 液+B 液 液)
100
‐‐
‐ (fg)10‐15
★★
PhosphaGLO O 1‐C
55‐60‐03
1* 30 mL
60
(pg)10‐12
★★
PhosphaGLO O Reserve 1‐C
55‐60‐01
1*30 mL
60
‐‐ ‐‐
TMB 1‐C
50‐77‐18
1* 100 mL
100
深蓝 蓝色
(pg)10‐12
4 400
蓝色 深蓝
(ng)10 0‐9
100
蓝紫 紫色
200
紫色 蓝紫
100
红色 色
★★★★ HRP
灵敏度 度
LumiGLO Ulttra 2‐C
★★★
光 光
法
品名
★★★
TMB Membrrane System 3‐C
50‐77‐00
★★★
BCIP/NBT 1‐C C
50‐81‐18
★★★
BCIP/NBT System 2‐C
50‐81‐00
FirePhos 1‐C
50‐81‐30
★★
4*100 ml(A 液+B 液 液) 1*40 ml 增强 强剂 1* 100 mL 2*100 ml(A 液+B 液 液) 1*100 ml 缓冲 冲液 1* 100 mL
‐ (fg)10‐15
(ng~pgg) 10‐12~10‐9 (ng~pgg) 10‐12~10‐9 (ng~pgg) 10‐12~10‐9
荧 光
请参见荧光二 二抗部分
法
LumiGLO Peroxid dase Chemilu uminescent Substrate
LumiGLO (KPL) vs. ECL a and ECL Plus (LumiGLO producces a more linear sign nal on film for a broader range of detectio on)
此款产品 品是基于鲁米 米诺开发的一 一种非同位素的 HRP 底物，当有 鲁米诺发光，且这个反应 应相当迅速。该底 H2O2 存在时，HRP 可催化鲁 物检 检测信号与被 被检蛋白浓度 度呈非常好的 的正相关关系 系，灵敏度高 高达 pg 级 别。此外，反应 应物可从膜上 上洗去，然后 后重新加入底 底物反应，如 如此进行 验结果的优化 化而不再需要 要重复全部 WB W 过程。 实验 Lum miGLO Reservve 是对 LumiGLO 的第二 二代升级产品，可检测 pgg‐fg 级 (HR RP g/ml)，Lu umiGLO Ultra 则是第三代 代产品，信号超强，能检测 测 fg 级。 产品特色： ) 既可用 用于 WB 又可 可用于 ELISA A； ) 信号产 产生迅速； ) 灵敏度 度高，是同类 类产品的 2 倍以上 倍 ) 全部试 试剂均为即用 用型的，使用 用方便； ) 工作液 液可存放 8~~24h； ) 发光时间长，可持 持续 1~2 小时 时； ) 可于 2~8℃稳定保 保存 1 年以上 上。
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Part 2 WB 通用 用试剂盒 另外，KPLL 还将显色系 系统进行优化 化，提供各种 种 WB 显色成套 套试剂盒，试 试剂盒中提供 供除部分抗体 体以外的所有 有试 剂，优质的试剂 剂与优化的操 操作程序为完 完美的 WB 提供了保证， 提 尤其适用于研 研发质控系统 统、新手入门 门、需要快速 速得 到实 实验结果的客 客户。（备注： ：本试剂盒只含 含试剂，不含 WB 过程中需要 要的膜） 酶 酶
热销星级 级 ★★★★ ★ ★★★★ ★★
HRP P
品名 SignaLo ock HRP Chem mi Western Kit (Imager)) ock HRP Chem mi SignaLo Western Kit (Film)
灵敏度
膜张数
(HRP g/ml)
10cm2
54‐54‐00
10‐15
100
54‐53‐00
‐15
10 ~10
100
54‐12‐50
10‐12
250
货号
‐1 12
LumiGLLO Western
★★★ ★
Western Blotting Kit
Western Kit
54‐11‐50
10
250
BT Western BCIP/NB Blottingg Kit
LumiGLO Reeserve 底物， ， SignaLock 封 封闭液，洗脱 脱液
二 一抗、二抗
封闭液，洗 洗脱液，HRP 抗
一抗 抗
液，洗脱液 液，HRP 抗兔和
抗 一抗
WB 底 物 及 试 剂 盒
PhosphaGLO Reserve 底 54‐56‐00
‐15
‐1 12
10 ~10
100
物，SignaLock 封闭液，洗
一抗、二抗 二
脱液 BCIP/NBT 底 底物，Deteco or
Protein Detector ★★
SignaLock 封 封闭液，洗脱 脱液
抗小鼠二抗 抗
(Film/Im mager)
AP P
一抗、二抗 二
TMB 底物， ，Detecor 封闭 ‐12
SignaLo ock AP Chemi ★★★ ★
试剂 剂
兔和抗小鼠 鼠二抗
Blottingg Kit Protein Detector TMB
LumiGLO Ultra 底物，
需自备 备
LumiGLO 底 底物，Deteco or
Protein Detector ★★★★ ★★
组分
55‐11‐50
10
‐12
250
封闭液，洗 洗脱液，AP 抗兔 抗
一抗 抗
和抗小鼠二 二抗
SignaLock H HRP Chemi W Western Kit 般的检测，使 使用 Protein D Detector 即可 可满足要求，但是对于一 一些 对于一般 达量低，交叉 叉反应较大的 的检测来说，灵敏度和背 背景更为重要 要，需要更高 高要 表达 求的产品才能满 满足。SignaLLock 系列试剂 剂盒是 Detecctor 试剂盒的 的升级产品，其 包含的发光底 底物是 KPL 顶级灵敏度的 顶 的 LumiGLO U Ultra ，而封闭液采用的是 是 中包 SiggnaLock 封闭液，它是无蛋 蛋白、无动物 物源成份高效 效封闭液，相 相对普通封闭 闭试 剂如 如 BSA，脱脂 脂奶粉、血清 清等封闭效果 果更好，背景 景更低。 Compare SSignaLock HRP P ChemiWesttern Kit (Imager) with Othe er Leading Blo otting Kits
SiggnaLock HRP Chem miWestern Kit (Imaager) Superr Signal West Dura a with Super Blockk ECL P Prime with Prime B Block
供 WB/IP 实验 验中的各种辅 辅助试剂，如 如封闭液、洗液等，具体产 产品与介绍请 请参见第五部 部分免疫学辅 辅助 KPL 还为您提供 剂部分(P16)。 试剂
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Part 3 WB 常见问题解析 问题
可能原因
转膜不充分致信号较 弱
解决办法
膜没有完全均匀湿透
使用 100%甲醇浸透膜
靶蛋白分子量小于 10,000
选择小孔径的膜，缩短转移时间
靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲
可尝试使用其他缓冲液如 CAPS 缓冲液(pH 10.5)或使用低 pH 值缓冲液
液 pH 值
如乙酸缓冲液 过高甲醇浓度会导致蛋白质与 SDS 分离，从而沉淀在凝胶中，同时
甲醇浓度过高
WB 底 物 及 试 剂 盒
会使凝胶收缩或变硬，从而抑制高分子量蛋白的转移。降低甲醇浓度 或者使用乙醇或异丙醇代替
转移时间不够
对于厚的胶以及高分子量蛋白需要延长转移时间
洗膜不充分
增加洗液体积和洗涤次数
阻断不充分
降低二抗浓度
检测过程中膜干燥
保证充分的反应液，避免出现干膜现象
曝光过度
缩短曝光时间
抗体染色不充分 酶活降低甚至失活
标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太 低
信号较弱
试剂不匹配
检测抗体与阻断蛋白的交叉反应性，选择无交叉反应的封闭剂。洗涤 液中加入 Tween‐20 可减少交叉反应 增加抗体浓度，延长孵育时间 直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效 期内、有活性的酶联物 设置阳性对照，如果阳性对照有结果，但标本没有则可能是标本中不 含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考虑增加标本上样量解决靶蛋白含量 低的原因。 一抗与组织种属，一抗与二抗或/和底物与酶系统之间不匹配。通过 设置内参照可以验证二级检测系统的有效性
一抗失效
选择在有效期内抗体；并选择现配现用的工作液
洗膜过度
缩短洗涤时间
HRP 抑制剂
所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠
抗体活性降低
选择在有效期内的抗体，工作液现配现用，避免长时间放置
蛋白转移不充分
见上述
封闭过度
减少封闭剂的量或缩短时间；换用不同封闭剂类型
曝光时间过短
延长曝光时间
二抗的非特异性结合
条带位置（大小）不对；
粉，BSA，酪蛋白等)
二抗浓度过高
抗体与阻断蛋白有交叉反应
没有阳性条带或条带
增加封闭液孵育时间，或者提高温度。选择合适的封闭试剂(脱脂奶
增加一个对照：不加一抗，其他操作过程不变，即可验证背景是否由 二抗系统来源。选择其他二抗（特异性更强的，只针对重链的）
一抗的特异性不够
使用单克隆或者亲和纯化的抗体，保证抗体的特异性
蛋白降解
使用新鲜制备的标本，并使用蛋白酶抑制剂，实验中增加内参。
蛋白二聚体或多聚体存在
增加蛋白质变性过程及强度
抗体浓度过高
降低抗体（一抗、二抗）浓度，可以减少非特异性条带
蛋白上样量过大
降低上样量
封闭剂中有聚集体
使用前过滤封闭试剂
HRP 耦联二抗中有聚集体
过滤二抗试剂，去除聚集体
HRP 含量过高
降低酶联二抗的浓度
或有非特异性条带
背景有斑点 膜上出现反像（暗背景 上白色带）
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第三 三部分 ELISA 底物及试剂 底 剂盒 Part 1 1 ELISA 底物 ELISA 检测 测系统可谓是 是免疫学反应 应应用到科研 研生产中最为广 广泛最为灵敏 敏的技术手段 段，可是在新 新老手操作过 过程 中总是会出现或 或大或小的问 问题，尤其是 是新手在操作 作过程中遇到 到的问题会更 更多，如果要保 保证实验的高 高效效率，得 得到 比较 较可靠的实验 验结果，除了 了严格遵守实 实验操作、注 注意各种细节 节等问题之外，显色系统的 的高灵敏度也 也是非常重要 要的 一个 个因素，KPLL 将 ELISA 底物显色系统 底 进行优化，所 所提供的 ELIISA 专用显色 色系统相对传 传统或者普通 通显色底物而言， 具有 有更高的灵敏 敏度，质量更 更加稳定，批 批间差非常小 小，无致癌性危险，多样化 化的底物显色 色系统可以满 满足广大客户 户的 各种 种需求。 检 检测 方 方法
酶
热 热销星级 ★ ★★★★★
色 法 AP
化
HRP
学 发 AP
T TMB 1‐C
组分
终 终止前
终止 止后
灵敏度
颜 颜色
颜色
M(HR RP)
53‐0 00‐02
4*100 ml
蓝 蓝色
黄色
5*10 0‐16
★ ★★★★
S SureBlue TMB B 1‐C
52‐0 00‐02
4*100 ml
蓝 蓝色
黄色
10‐115
★ ★★★★
T TMB 2‐C
50‐7 76‐00
6*100 ml(A 液+B 液) 液
蓝 蓝色
黄色
5*10 0‐15
★★★
A ABTS 1‐C
50‐6 66‐00
6*100 ml
蓝 蓝绿色
蓝绿 绿色
10‐113
★★★
A ABTS 2‐C
50‐6 62‐00
6*100 ml(A 液+B 液) 液
蓝 蓝绿色
蓝绿 绿色
10‐113
★★
B BluePhos 2‐C
50‐8 88‐00
液 6*100 ml(A 液+B 液)
蓝 蓝色
蓝紫 紫色
10‐113
★★
p pNPP
50‐8 80‐00
Table ets+ 100 ml 5X X 缓冲液
黄 黄色
黄色
10‐113
★★
L LumiGLO 2‐C
54‐6 61‐00
液 2*120 ml(A 液+B 液)
‐‐
‐‐
5*10 0‐18
‐‐
‐‐
5*10 0‐19
★★ ★★
光
S SureBlue Rese erve
货 货号
★★
L LumiGLO Rese erve 2 2‐C P PhosphaGLO 1 1‐C P PhosphaGLO R Reserve 1‐C
54‐7 71‐02
1*17 mL A 液,1*34 4 mL B 液,1* *100 mL 20X 洗脱液
55‐6 60‐03
1* 30 0 mL
‐‐
‐‐
10‐221
55‐6 60‐01
1*30 mL
‐‐
‐‐
10‐221
底 物 及 试 剂 盒 ELISA
比
HRP
品名
荧 光
请参见荧光二 二抗部分
法
SurreBlueTM TM MB Microwelll Substrate
SureBlue R Reserve’s supe erior sensitivity
经有 20 多年 年的历史，是 TMB 的优化 化产品，一 SureBlue TTMB 产品已经 、使用方便深 深受广大科研 研工作者及诊 诊断试剂生产 产商的青睐。 直以性能稳定、 质。产品具有 有灵敏度高、有效期长、使用方 与 HRP 反应后生成蓝色物质 等优点,加上 上批次间差异小和背景低等 等特点，SurreBlue 被推荐 荐为 ELISA 便等 实验 验的首选底物 物。SureBluee Reserve 是对 对 SureBlue 的进一步优化 的 化，灵敏 度是 是 SureBlue 的 2 倍，并且 且有效期长达 达 24 个月。 产 产品特色： Lot‐to‐Lot C Consistency o of SureBlue TM MB ) 灵敏度高 高； ) 质量稳定 定，严格的质 质量控制确保 保批次间产品实验差异不超 超过 15％； ) 有效期长 长，2~8℃保存 存一年以上产 产品仍具有高 高灵敏度与低 低背景 的活性； ) 单组分产 产品使用方便 便； ) 安全环保 保，无致癌性 性、不含任何 何有害物质如 DMSO、DM MF 等。 北京 010‐88597835 0 上海 021‐635998 871 成都 028‐6 64600404
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Part 2 ELISA 通用试剂盒 此外，KPL 还将整套 ELISA 实验过程使用试剂（除一抗）进行优化，以试剂盒形式提供，无需任何摸索条件 过程，为您节约了大量的时间，也避免了由于试剂原因造成的误差和不良结果困扰。尤其适用于研发质控系统、 新手入门、需要快速得到实验结果的客户。（备注：本试剂盒只含试剂，不含 ELISA 需要的 96 孔板） 酶
热销星级
HRP ★★★
★★★★
底 物 及 试 剂 盒 ELISA
★★★★
★★★ AP
品名 Protein Detector HRP Microwell Kit, Anti‐Human Protein Detector HRP Microwell Kit, Anti‐Mouse Protein Detector HRP Microwell Kit, Anti‐Rabbit Protein Detector AP Microwell Kit, Anti‐Human
货号
54‐62‐10
54‐62‐18
54‐62‐15
55‐81‐10
规格
20plates
20plates
20plates
20plates
Microwell Kit, Anti‐Mouse
组分
(fg) 10‐15 (pg~fg) 10‐15~10‐12 (pg) 10‐12 (pg~fg) 10‐15~10‐12
需自备 试剂
包被液、封闭液、洗脱液、 HRP 标记抗人二抗，二抗复
一抗
溶液、ABTS 底物、终止液 包被液、封闭液、洗脱液、 HRP 标记抗小鼠二抗，二抗
一抗
复溶液、ABTS 底物、终止液 包被液、封闭液、洗脱液、 HRP 标记抗兔二抗，二抗复
一抗
溶液、ABTS 底物、终止液 包被液、封闭液、洗脱液、 AP 标记抗人二抗，二抗复溶
一抗
液、BluePhos 底物、终止液 包被液、封闭液、洗脱液、
Protein Detector AP ★★★★
灵敏度 (HRP g/ml)
55‐81‐50
20plates
and Anti‐Rabbit
(pg)
AP 标记抗小鼠、兔二抗，二
‐12
抗复溶液、BluePhos 底物、
10
一抗
终止液
产品特色： ) 应用于直接 ELISA、间接 ELISA、杂交瘤筛选等实验； ) 提供全部溶液，可节约大量的实验准备时间； ) 所有包被液、封闭液与洗液均经验证，保证将实验 背景控制在最低范围； ) 分别使用 ABTS、BluePhos 作为底物，确保实验高灵 敏度； ) 所有试剂均经过实验条件的优化，检测中仅需调整 一抗的浓度； )
无致癌性、安全无污染。 KPL 还为您提供 ELISA 实验中的各种辅助试剂，如包被液、 封闭液、洗液、终止液等，具体产品与介绍请参见第五部 分免疫学辅助试剂部分(P16)。
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Part 3 ELISA 常见问题解析 问题
可能原因 1、试剂盒在运输途中时间太长，温度 太高 2、试剂盒未充分平衡
显色淡，
3、培养箱温度不足 37℃ 4、保温时间不足
偏低
5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、 洗涤次数增加
8、底物作用时间不足
准确定时
显色
3、培养箱温度超过 37℃或反应时间过 长 4、吸嘴重复使用，未洗净或消毒不彻 底
拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染
调整培养箱温度，准确定时 吸嘴尽可能一次性使用
5、蒸馏水被污染
使用新鲜蒸馏水
6、酶等试剂混用
不同批号试剂勿混用 合理安排实验，避免几块酶标板同时加样
重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近
2、保温时间不一致，洗涤条件不一致， 重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致， 操作人员不一致
以排除这些因素造成的不一致的可能性
3、加样量不一致
样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴
1、显色液变质
更换新的显色液
2、洗涤液配制有误
请按说明书所示稀释倍数配制
3、未加酶结合物而认为已加入
注意不要漏加
4、终止液误作洗涤液稀释或当底物液 使用
温全部溶解后再量取稀释；充分洗涤，彻底拍干。加样或加酶
样品应新鲜采集，或低温保存，防止污染
有短
对照不
浓缩洗液准确配制；10 倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室
底 物 及 试 剂 盒 ELISA
使用新鲜合格的蒸馏水
1、样品数量多少不一，加样时间有长
板，阳性
按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数
7、蒸馏水水质有问题
太长，导致实际反应时间延长
出现白
度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意
最好一次性使用
7、一次实验的标本量过多，加样时间
不佳
注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温
太多或内壁不清洁
2、样品污染
重复性
确保所有试剂已平衡至室温（约 25℃）。
校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，
其它成分残留或酶标记物残留
有色,
试剂盒从 2~8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少 20 分钟，
6、移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水
1、洗涤不充分，洗后未拍干，样品中
全部呈
尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温
校正定时钟准确定时
灵敏度
背景深，
解决方法
每次加液前均应看清标签
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第四部分 IHC 检测系统 IHC 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、 同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量研究的一项免疫学技术。IHC 实 验常常通过生物素‐亲和素(或链霉亲和素)系统进行信号放大，将亲和素(或链霉亲和素)与酶标生物素结合，亲和 素(或链霉亲和素)可与一抗/二抗上的生物素结合。由于每个亲和素(或链霉亲和素)分子有四个生物素结合部位， 此时一个标记了生物素的抗体分子可通过其生物素连接多个亲和素(或链霉亲和素)分子，如此形成多级放大作用。
Part 1 生物素‐链霉亲和素试剂盒 由于链霉亲和素不带糖基、等电点低，在检测中不存在与组织样本的非特异性结合，因而具有比亲和素低的 背景，信噪比高于传统的亲和素。KPL 提供的 HistoMark Biotin‐Streptavidin kits 正通过生物素标记二抗与一抗特异 结合、经链霉亲和素的信号放大作用，从而对细胞表面抗原，包括冷冻或石蜡包埋组织切片、细胞涂片、组织触 片抗原提供快速、精确、高灵敏度、低背景检测。 HistoMark Biotin‐Streptavidin Kits 酶
IHC底 物 及 试 剂 盒
HRP
AP
适用一抗类型
货号
规格
所含组分
Mouse primary antibody
71‐00‐18
500 slides
生物素标记抗小鼠二抗、HRP 标记链霉亲和素、山羊血清
Rabbit primary antibody
71‐00‐19
500 slides
生物素标记抗兔二抗、HRP 标记链霉亲和素、山羊血清
Rat primary antibody
71‐00‐20
500 slides
生物素标记抗大鼠二抗、HRP 标记链霉亲和素、山羊血清
Goat primary antibody
71‐00‐26
500 slides
生物素标记抗山羊二抗、HRP 标记链霉亲和素、兔血清
Mouse primary antibody
71‐00‐39
500 slides
生物素标记抗小鼠二抗、AP 标记链霉亲和素、山羊血清
Rabbit primary antibody
71‐00‐40
500 slides
生物素标记抗兔二抗、AP 标记链霉亲和素、山羊血清
Rat primary antibody
71‐00‐41
500 slides
生物素标记抗大鼠二抗、AP 标记链霉亲和素、山羊血清
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产品特色： )
全部滴瓶包装方便使用；
)
高灵敏度，采用生物素－链霉亲和素系统对 信号级联放大；
)
低背景，链霉亲和素无非特异性结合，解决 了传统亲和素方法背景深的缺点；
)
全部二抗均经其它物种血清吸附，有效降低 交叉反应。
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Part 2 免疫组化底物 KPL 为免疫组化研究提供了一系列优化的底物，可用于 HRP、AP 及 X‐Gal 等酶的检测，产品具有灵敏度高、 使用方便等特点。与 HistoMark Biotin Streptavidin Kits 配合使用效果更佳。HistoMark 系列尤其产品适用于双染、 多染实验。
热销等级
产品名称
颜色
货号
组分
主要特色
★★★★★
TrueBlue
深蓝色
50‐78‐02
1
比 DAB 灵敏度高 50‐100 倍，无致癌危险
★★★
DAB Reagent Set
棕色
54‐10‐00
3
即用型溶液、滴瓶包装，方便、安全
StableDAB
棕色
54‐11‐00
2
工作液可在 2~8℃保存 2 周
HistoMark BLACK
黑色
54‐75‐00
3
高灵敏度
★★★
HistoMark ORANGE
橙红
54‐74‐00
3
高灵敏度
★★★
HistoMark TrueBlue
蓝色
54‐78‐00
1
灵敏度是 DAB 的 100 倍；无致癌性
HistoMark Red
红色
55‐69‐00
3
含左旋咪唑，可抑制内源性的 AP
HistoMark Blue
蓝色
55‐70‐00
3
含左旋咪唑，可抑制内源性的 AP
β‐Gal
浅绿色
54‐13‐00
2
不需要封闭内源的 HRP 与 AP
★★★★★ ★★
★★★ ★★★ ★★★
酶
HRP
AP X‐Gal
试剂名称
货号
颜色
染色部位
推荐配套显色底物/系统
Contrast Blue
71‐00‐06
蓝色
nuclear
HistoMark Red or other red substrates
Contrast Green
71‐00‐11
绿色
nuclear
DAB, HistoMark BLACK or ORANGE
Contrast Red
71‐00‐05
粉红色
nuclear
HistoMark BLUE or other blue substrates
DAPI
1971‐3‐1
蓝色荧光
nuclear
TRITC and Cy3
Eosin
1971‐2‐1
红色
cytoplasmic
HistoMark BLUE or other blue substrates
Orcein
1971‐1‐1
粉红色
nuclear
HistoMark BLUE or other blue substrates
Propidium Iodide
1971‐4‐1
粉红色
nuclear
FITC and Cy2
IHC底 物 及 试 剂 盒
Part 3 复染试剂
KPL 还为您提供 IHC 实验中的各种辅助试剂，如封闭液、洗液等，具体产品与介绍请参见第五部分免疫学 辅助试剂部分(P16)。 Smooth muscle actin in skin tissue, using streptavidin peroxidase stained with StableDAB, Contrast BLUE Retinal pigment epithelial cell, Class III β‐tubulin counterstained. stained with HistoMark ORANGE
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Part 4 IHC 常见问题解析 问题
可能原因 真阴性结果
整个染色过程没有出现问题，组织或细胞确实不表达相关的抗原。
甲醛固定组织未进行抗原修复
加一抗反应前先进行抗原修复。
一抗不能满足实验要求 无色片
解决方法
选用一抗时注意抗体的应用：是否可以用于 IHC，是用于石蜡切片还是 冰冻切片。
一抗失效
检查一抗的保存条件与效期，确认其是否失效。
忘记加二抗或三抗，或用了两次二抗而缺少
在三抗孵育结束时，将切片上的三抗甩在一张白纸上，在将配制好的
了三抗
DAB 滴一滴在白纸的三抗上，观察是否出现棕色。如果出现了，证明 三抗和 DAB 的配制过程没有错误。如果这种 DAB 再滴到切片上没有出
配制 DAB 时少了过氧化氢
现任何阳性信号，问题一定是出在三抗以前。如果纸上不出现棕色反 应，问题肯定在三抗 DAB 或 DAB 的配制过程。
一抗浓度过高
每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，找到适合自己实验室 的理想工作浓度 严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免
抗体孵育时间过长或温度较高
因遗忘而造成时间延长。一些敏感性很高的方法要求要根据染色结果
IHC底 物 及 试 剂 盒
进行调整。 DAB 最好现用现配，未用完的 DAB 存放在冰箱里几天后再用这种似乎 全片着色
DAB 变质和显色时间太长
节约的办法是不可取的。DAB 的显色最好在显微镜下监控，达到理想 的染色程度时立即终止反应，一些商品化底物需注意工作液是否可以 保存。
组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、 染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液 流失等都是造成组织变干的原因 切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长（大 于 24 小时） 组织边缘与玻片粘贴不牢，边缘组织松脱漂 浮在液体中，每次清洗不易将组织下面试剂 切片边缘着
洗尽所致。
色
切片上滴加的试剂未充分覆盖组织，边缘的 试剂容易首先变干，浓度较中心组织高而致 染色深。
组织一半着
试剂未能覆盖全部组织
色一半无着
染片盒不平，切片倾斜，虽然开始试剂已全
色
部覆盖了组织，但后来试剂流向一边，部分
操作要认真仔细，采用 DAKO 笔或 PAP Pen 在组织周围画圈，可以有效 的避免液体流失，也能提高操作速度。 将装有切片和修复液的容器放在 4℃冰箱过夜，对结果无明显影响， 如果放在室温，特别是炎热的夏天，会出现背景着色，因此，不可存 放时间太长。 制备优质的胶片（APES 或多聚赖氨酸），切出尽量薄的组织切片，不 厚于 4 微米，组织的前期处理应规范，尽量避免选用坏死较多的组织。 试剂要充分覆盖组织，应超出组织边缘 2 mm.用 DAKO 笔画圈时，为了 避免油剂的影响，画圈应距组织边缘 3‐4 mm。 在加完试剂后，仔细看一遍，如有组织未被试剂完全覆盖，建议用牙 签而不是用吸头或试剂瓶口将试剂引流开使之将组织全部覆盖。
对于这种问题，只要留心或想到了很容易发现，也很容易解决。
组织未被试剂覆盖。 漂片时水未排尽，在局部形成气泡使组织突
漂片盒里的气泡应去尽，晾片热台不能平放，应有 45 度左右的斜度，
起，染色时试剂渗入后不易洗尽
利于水流走和蒸发。 组织坏死后细胞破坏、酶的释放、蛋白游离、分解，复杂的肽链残段
灶片状着色
坏死组织灶
（如 Fc 段）可能与一抗或/和二抗结合导致最终着色。在选择染色切 片时应避免选择坏死组织较多的切片。
14
APES 胶浓度太高，干燥后在玻片上留下白色
按照标准的制备方法进行制片，如果制片过程中，因丙酮逐渐挥发而
小点，显色时白色小点着色。
胶变浓时可适当加入一些丙酮。
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问题 间质非特异 性着色
可能原因
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解决方法
抗体与组织中的蛋白质因蛋白疏水基团相 互作用形成非特异性的连接 组织间质中存在免疫球蛋白，造成间质着色
加一抗前用血清封闭。 使用经与组织同源的血清吸附过的二抗，减少交叉反应。
胞浆里含有较多的蛋白质，因此，很多非特 异性的染色除了见于间质也可以出现在胞 细胞浆非特
浆中。
异性着色
因内源酶造成的着色
通过血清封闭解决。
根据选用显色系统，选择合适的封闭或抑制剂。
巨噬细胞等细胞或组织表面有 Fc 受体，与 抗体的 Fc 片段结合
选用 F(ab)’2 的抗体。
不适当的组织处理，如组织在二甲苯里浸泡 细胞核非特 异性着色
时间太长、缓冲液中浸泡时间太长、组织变 干、微波修复液的 pH 值和修复时间不当或
严格按照操作常规进行工作
修复过程中修复液留下得太少，未没过组织 等。
KPL底物使用代表文献
LumiGLO Reserve™ Chemiluminescent Substrate Suttichai Krisanaprakornkit, Pareena Chotjumlong,Prachya Kongtawelert, and Vichai Reutrakul. Involvement of phospholipase D in regulating expression of anti‐microbial peptide human ‐defensin‐2. Int.Immunol. 20 (1):21‐29, 2008. TMB Microwell Peroxidase Substrate System Susan L. Pichla‐Gollon, Mark Drinker, Xiangyang Zhou, Feng Xue, John J. Rux, Guang Ping Gao, James M. Wilson, Hildegund C. J. Ertl, Roger M. Burnett, and Jeffrey M. Bergelson. Structure‐Based Identification of a Major Neutralizing Site in an Adenovirus Hexon. J.Virol. 81 (4):1680‐1689, 2007 BluePhos® Microwell Phosphatase Substrate System Tian Luo, Xiaofeng Zhang, Abdul Wakeel, Vsevolod L. Popov, and Jere W. McBride. A Variable‐Length PCR Target Protein of Ehrlichia chaffeensis Contains Major Species‐Specific Antibody Epitopes in Acidic Serine‐Rich Tandem Repeats. Infect.Immun. 76 (4):1572‐1580, 2008.
IHC底 物 及 试 剂 盒
LumiGLO Chemiluminescent Substrate Cao, Z., Zhao, Z., Mohan, R., Alroy, J., Stanley, P., and Panjwani, N. (2001). Role of Lewis Glycan Determinant in Corneal Epithelial Cell Adhesion and Differentiation. J Bio Chem. 276:24, pp. 21712‐21723.
HistoMark® BLACK Arshad M. Khan, Todd A. Ponzio, Graciela Sanchez‐Watts, B. Glenn Stanley, Glenn I. Hatton, and Alan G. Watts. Catecholaminergic Control of Mitogen‐Activated Protein Kinase Signaling in Paraventricular Neuroendocrine Neurons In Vivo and In Vitro: A Proposed Role during Glycemic Challenges. J.Neurosci. 2007, 27 (27), 7344‐7360. HistoMark® TrueBlue/ TrueBlue™ Peroxidase Substrate/ TrueBlue™ Substrate Gomez‐Duarte, O.G.,Pasetti, M., Santiago, A.,Sztein, M., Hoffman, S., Levine, M. (2001). Expression, extracellular secretion, and immunogenicity of the Plasmodium falciparum sporozoite surface protein 2 in Salmonella vaccine strains. Infection and Immunity. 69, pp.1192‐1198.
IHC 一抗选择小贴士 IHC 实验图片的好坏与所选试剂有很大的关系，主要涉及一抗，二抗，显色底物系统，复染试剂，其中一抗的 特异性尤为重要。来自美国的专业 IHC 抗体生产商 Lifespan 公司专注生产 IHC 特色抗体 20 年，目前拥有 13 万 种抗体，其中近 3 万种抗体经过的 Lifespan 特有的 IHC‐plusTM 验证，即经过 20 多种组织切片验证（多物种， 多组织的冰冻和石蜡切片），更强的特异性，更高的信噪比，图片更加清晰可信，是高影响因子期刊的不二之 选！发展至今，Lifespan 已成为了生物分子病理学方面的领衔品牌，并将继续验证更多的免疫组化抗体。
IHC‐plusTM Antibodies Because seeing is believing
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第五部分 免疫学辅助试剂 在免疫学实验中，每一个环节，每一种试剂对实验都至关重要，KPL 将 WB/IP、ELISA、IHC 等免疫学实验中 需要的试剂如封闭试剂、缓冲液、终止液等经过优化，为您的实验顺利进行提供有力保障。
样品/抗体稀释液
货号
品名
A7101
Sample Buffer T‐
A7134
Sample Buffer T+
A6485
CrossDown Buffer
A7148
Antibody Stabilizer‐PBS
A7135
Antibody Stabilizer‐Tris
应用说明 一种即用型的免疫学试验所需的样本或抗体稀释液。不含磷酸盐因而可以用 于 AP 或 HRP 标记的抗体，且不含任何表面活性剂可用于 IHC 试验。 含有 Tween，可以用于 ELISA、EIA、WB、免疫 PCR 以及蛋白芯片等试验。 用于 ELISA、WB、IHC 以及蛋白芯片等试验中，可以有效降低交叉反应以及一 些非特异的结合。 PBS 缓冲系统，用于大多数抗体或蛋白的溶解与稀释，延长试剂盒的保存时 间 Tris 缓冲系统，可以稳定蛋白结构、保持蛋白功能，从而延长抗体或蛋白在 2~8℃的保存时间。
酶标记物稳定剂
品名
54‐15‐01
HRP Stabilizer
55‐15‐00
AP Stabilizer
描述 用于 HRP 标记物的稀释、保存，比 BSA、50%甘油等的保存效果更好，更稳定， 保存时间更久，即用型溶液 用于 AP 标记物的稀释、保存，比 BSA、50%甘油等的保存效果更好，更稳定， 保存时间更久，即用型溶液
包被液
免 疫 学 辅 助 试 剂
货号
货号
品名
A7150
Coating Buffer C pH 9.6
A7136
Coating Buffer PBS pH 7.4
A7708
AppliCoat Plate Stabilizer
50‐84‐00
应用说明 一种碳酸盐缓冲液，用于 ELISA、EIA、RIA、蛋白芯片以及免疫 PCR 试验中抗原或 捕获抗体的包被。 是 PBS 缓冲液，应用与 Coating Buffer C pH9.6 相似。主要由蛋白或抗体的特性决 定。 一种即用型的包被板稳定剂，主要用于延长包被有抗原或抗体的 ELISA 板的保存 时间。
Coating Solution Concentrate Kit
最佳 pH 值与离子浓度，保证蛋白/抗体与固相的最大结合度
封闭试剂
品名
货号
描述
推荐应用实验
特等封闭液 无蛋白，无动物源成份
SignaLock™
50‐58‐00
5X Detector Block
71‐83‐00
鱼胶来源，信噪比非常高
50‐61‐00
纯蛋白，避免大量交叉反应
无背景，信噪比最高，极其稳定
WB、抗体/蛋白稀释液 ELISA, Southern, Northern, and Western blotting
普通封闭液 10% BSA Diluent Blocking Solution
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ELISA, WB, IHC
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We promise what we can do
品名 Milk Diluent Blocking Solution Blocking Reagent CA PhosphoBlocker Blocking Reagent
货号
描述
推荐应用实验
50‐82‐01
大大降低非特异性结合
ELISA, WB
A3409
牛酪蛋白成份，不含生物素
AKR‐103
Nonfat dried milk powder
We do what we have promised
A0830
核酸杂交（要求探针为非放 射性），WB
转为磷酸化蛋白 WB 检测设计，增
WB
强特意信号的同时不会提高背景 脱脂奶粉，传统封闭试剂
ELISA, WB, IHC 等
内源性酶封闭液 Universal Block
71‐00‐61
Blocking Solution Concentrate
71‐00‐10
封闭内源性的 HRP 和 AP
IHC
尤其适合于复染 封闭内源性的 HRP
IHC
洗涤液
分类
货号
描述
Wash Solution Concentrate
50‐63‐00
独特配方，适用于大部分免疫学实验
Phosphatase Wash Solution
50‐63‐15
独特配方，磷酸化蛋白 WB 检测专用
Biotin Wash Solution
50‐63‐06
专利配方，适用于生物素-链霉亲和素系统实验，如 IHC、原位杂交等
TBST with 0.5% Tween 20
51‐18‐01
10 倍浓缩液，适用于大部分免疫学实验
TBST with 10% Tween 20
51‐19‐01
10 倍浓缩液，适用于大部分免疫学实验
PBST
51‐14‐01
10 倍浓缩液，适用于大部分免疫学实验
Dulbecco’s PBST
51‐16‐01
10 倍浓缩液，适用于大部分免疫学实验
特等洗涤液
免 疫 学 辅 助 试 剂
普通洗涤液
ELISA 底物显色终止液
品名 ABTS Peroxidase Stop Solution TMB Stop Solution TM
TMB BlueSTOP APStop
货号
适用底物
50‐85‐01
ABTS 2‐C, ABTS 1‐C
50‐85‐05
TM
Solution
50‐89‐00
ABTS 通用型终止液，终止后颜色不变 TMB 终止液，终止后颜色变黄
TMB 2‐C, SureBlue TM
TMB 终止液，终止后颜色不变
SureBlue Reserve
50‐85‐30
TM
描述
TM
pNPP, BluePhos®,FirePhos
适用于所有 AP 酶底物
膜再生液
货号 A7140 AKR‐102
品名
应用说明 用于 Western 中转移了蛋白的膜的重复利用
Stripping Buffer I
专门用于去除磷酸化抗体而不影响蛋白
Phospho Antibody Stripping Solution
荧光抗淬灭剂
货号
品名
描述
71‐00‐16
Fluorescent Mounting Media
用于荧光实验中防止荧光的淬灭，也可以用于荧光标记物的稀释与保存，即用型溶 液
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第六部分 细菌抗体 食品安全和环境安全是世界各国关注的公众健康问题，由食品中和环境中的病原微生物导致的疾病，对人类 的健康构成了严重的威胁。几十年来许多国家的食源性疾病发生率一直呈上升趋势，主要与食物中微生物引起的 疾病增多有关，而大部分是由治病微生物污染食品所致。至于被污染的环境也对人们的生活构成潜在的威胁。 KPL 提供 BacTrace ®抗细菌抗体已有近 30 年历史，产品主要涉及造成全球重大经济损失的疾病病原体，该类 产品成功占有了研究室以及体外诊断试剂盒开发商等市场。 主要应用有： 1. 食品病原体导致的相关疾病检测：如大肠杆菌引起的出血性结肠炎、溶血性尿毒症综合征等 2. 传染性疾病监测：包柔氏螺旋体（Borrelia burgdorferi）导致的莱姆病、幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori） 导致的胃溃疡、军团杆菌（Legionella）导致的军团杆菌病、鼠疫杆菌（Yersinia pestis）导致的瘟疫等 3. 水生动物细菌性肾病(BKD)的检测 4. 植物病毒检测
细 菌 抗 体
产品特色
) 灵敏度高：可检测104 cfu/mL菌体或ng级别的细菌抗原 ) 特异性强：识别菌体表面抗原以及胞内抗原 ) 产品多样性：未标记、HRP、AP、Biotin、FITC或DyLight 488 标记的抗体可供选择
) 应用范围广：ELISA、WB、IHC、IF、FC等
Colorimetric ELISA demonstrates highly specific reactivity of BacTrace Anti‐E.coli O157:H7 antibody for the O157:H7 serotype with minimal reactivity to other potentially cross‐reacting serotypes.
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We promise what we can do
We do what we have promised
细菌抗体选择指南 细菌种类
无标记
HRP
AP
FITC
食品病原体
BIOTIN
Dylight 488
对照
Campylobacter species
01‐92‐93
04‐92‐93
E.coli O103
011‐95‐93
04‐95‐93
16‐95‐93
072‐03‐95‐93
50‐95‐93
E.coli O111
011‐95‐91
04‐95‐91
16‐95‐91
072‐03‐95‐91
50‐95‐91
E.coli O121
011‐95‐95
04‐95‐95
16‐95‐95
072‐03‐95‐95
50‐95‐95
E.coli O145
011‐95‐94
04‐95‐94
16‐95‐94
072‐03‐95‐94
50‐95‐94
04‐95‐90
01‐95‐90
E.coli O157:H7
01‐95‐90‐MG
05‐92‐93
02‐92‐93
02‐95‐90
16‐95‐90
50‐92‐93
50‐95‐90
E.coli O26
011‐95‐92
04‐95‐92
16‐95‐92
072‐03‐95‐92
50‐95‐92
E.coli O45
011‐95‐96
04‐95‐96
16‐95‐96
072‐03‐95‐96
50‐95‐96
Listeria species
01‐90‐90
04‐90‐90
Salmonella Common Structural Antigen (CSA‐1)
01‐91‐99 01‐91‐99‐MG
Shigella species
01‐90‐01
Vibrio cholera
01‐90‐50
Vibrio species
01‐90‐02
Borrelia burgdorferi
04‐91‐99 04‐90‐01
05‐91‐99
02‐90‐90
16‐90‐90
50‐90‐90
02‐91‐99
16‐91‐99
50‐74‐01
04‐90‐02
01‐97‐91
04‐97‐91
Borrelia species
01‐97‐92
04‐97‐92
Helicobacter pylori
01‐93‐94
04‐93‐94
Legionella species
01‐90‐03
04‐90‐03
16‐90‐03
072‐03‐90‐03
50‐90‐03
Yersinia species
01‐90‐04
04‐90‐04
16‐90‐04
072‐03‐90‐04
50‐90‐04
16‐90‐01
072‐03‐90‐01
16‐90‐02
072‐03‐90‐02
50‐90‐01 50‐90‐02
传染疾病
Renibacterium
50‐93‐94
01‐96‐91
04‐96‐91
05‐96‐91
02‐96‐91
50‐96‐91
salmoninarum
细 菌 抗 体
水生动物细菌性肾病(BKD)
02‐93‐94
50‐97‐91
植物病原体 Clavibacter michiganensis
011‐90‐51
另外，在细菌样本的富集过程对后期检测也是一个非常重要的影响因素，在传统的检测方法中，一般都要 5‐7 天时间，而且也会因为目的细菌浓度较低、多种杂质共存的情况下容易造成漏检。 KPL 研发的免疫磁珠捕获抗体，可以在短时间内有效地分离富集目的细菌，去除检测样品中的杂质，以便于 后续的 PCR 及涂板等检测。该产品在磁性材料上包被有 KPL 高特异性的细菌抗体，并通过 BSA 封闭，可以高亲 和力高特异性地结合目的细菌，具有操作简单方便，富集效果好的特点。
富集细菌种类
货号
品名
E. coli O157
082‐01‐95‐90
BacTrace® Anti‐E.coli O157 Magnetic Beads
E. coli O121
082‐01‐95‐95
BacTrace® Anti‐E.coli O121 Magnetic Beads
E. coli O103
082‐01‐95‐93
BacTrace® Anti‐E.coli O103 Magnetic Beads
E. coli O145
082‐01‐95‐94
BacTrace® Anti‐E.coli O145 Magnetic Beads
E. coli O45
082‐01‐95‐96
BacTrace® Anti‐E.coli O45 Magnetic Beads
E. coli O111
082‐01‐95‐91
BacTrace® Anti‐E.coli O111 Magnetic Beads
E. coli O26
082‐01‐95‐92
BacTrace® Anti‐E.coli O26 Magnetic Beads
Salmonella CSA‐1
082‐01‐91‐99
BacTrace® Anti‐Salmonella CSA‐1 Magnetic Beads
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第七部分 蛋白纯化/标记试剂盒 Part1 蛋白纯化 蛋白质作为生命形态中最重要的分子，一直以来都是全球科学家 们研究的焦点。免疫沉淀技术(Immunoprecipitation)是以抗体与抗原间 的专一性为基础用于研究蛋白质相互作用的经典方法，也是确定两种 蛋白质在细胞内相互性生理作用的有效方法。目前常规操作是利用共 价结合蛋白 A 或蛋白 G 的琼脂糖或磁珠将反应后的抗原‐抗体复合物富 集纯化。蛋白 A 和蛋白 G 能特异地和抗体的保守区 Fc 段结合，形成 稳定的抗原‐抗体复合物附着在磁珠上（示意图见左图），溶液内无关 的分子可以通过洗涤磁珠被清除，最后，再采用一系列方法分析纯化 抗原或与抗原结合的其他分子。 Protein A 和 Protein G 与抗体结合能力却因抗体类型有着较大的差异，具体可参见下表
单抗 抗体类型
结合能力
结合能力
蛋 白 纯 化 标 记 试 剂 盒
Protein A
Protein G
Protein A
Protein G
Human IgG1
++++
++++
Rabbit
++++
+++
Human IgG2
++++
++++
Cow
++
++++
Human IgG3
‐‐‐
++++
Horse
++
++++
Human IgG4
++++
++++
Goat
‐
++
Mouse IgG1
+
++++
Guinea Pig
++++
++
Mouse IgG2a
++++
++++
Sheep
+/‐
++
Mouse IgG2b
+++
+++
Pig
+++
+++
Mouse IgG3
++
+++
Rat
+/‐
++
Rat IgG1
+
Mouse
++
++
++++
Chicken
‐‐‐
+
Rat IgG2b
‐‐‐ ‐‐‐ ‐‐‐
++
Human IgG
++++
++++
Rat IgG2c
+
++
Human IgM
‐‐‐ ‐‐‐ ‐‐‐
+
+ : strong binding; ‐ : weak or no binding
抗体类型
Rat IgG2a
多抗
Human IgD Human IgA
免疫沉淀操作流程示意图
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+ +
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We do what we have promised
KPL 提供用于蛋白纯化的高品质 Protein A 和 Protein G 琼脂糖等系列产品，具体说明如下：
Protein A/G Agarose 产品名称
货号
结合能力
优势
Protein A Agarose
223‐50‐01
35mg 人 IgG/ml 凝胶
Protein G Agarose
223‐51‐01
20mg 人 IgG/ml 凝胶
热稳定、在 4M 尿素、盐酸胍环境中稳定，特异 性结合 Fc 区域，不破坏抗体与抗原的结合 能结合 Fc 和 Fab 区域，IgG 亲和力比 Protein A 更高
IP(Immunoprecipitation,免疫沉淀)试剂盒 产品名称
货号
Protein A Agarose Immunoprecipitation kit
553‐50‐01
Protein G Agarose Immunoprecipitation kit
553‐51‐01
规格
组分 Buffers, washes, protease inhibitors, and Protein A agarose reagents Buffers, washes, protease inhibitors, and Protein G agarose reagents
20reactions 20reactions
Protein A 和 Protein G 纯化试剂盒 产品名称
货号
Protein A Agarose Purification kit
553‐50‐00
Protein G Agarose Purification kit
553‐51‐00
规格
组分 Buffers, washes, purification column,
5ml
and Protein A agarose reagents Buffers, washes, purification column,
10ml
and Protein G agarose reagents
KPL 提供的 SureLINK 蛋白/抗体标记试剂盒能快速，高效的将目的蛋白/抗体标记各种基团，如生物素，荧 光等。主要产品详细介绍如下：
产品名称
货号
组分
规格
时间
• FITC • 5 Carbonate Bi‐carbonate
SureLINK Fluorescein (FITC) Labeling Kit
82‐00‐01
• Anhydrous DMF
5*0.3mg rxn
1.5 ‐ 2 h <30 m hands‐on time
（荧光信号相对 FAM‐X 更强）
Buffer Capsules
蛋 白 纯 化 标 记 试 剂 盒
Part2 蛋白标记
• Spin‐Pure Filters • Reaction Tubes • FAM‐X • Borate Buffer
SureLINK Fluorescein‐X(FAM‐X) Labeling Kit
82‐00‐02
（荧光信号相对 FITC 更稳定）
• Anhydrous DMF
5*0.3mg rxn
• Spin‐Pure Filters
1.5 ‐ 2 h <30 m hands‐on time
• Reaction Tubes • Activated Biotin SureLINK Chromophoric Biotin Labeling Kit
• Reconstitution Solvent 86‐00‐01
• Modification Buffer
3 h 5*1mg rxn
<30 m hands‐on
• Reconstitution Solvent
time
• Spin filters
北京 010‐88597835 上海 021‐63599871 成都 028‐64600404
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