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RAPID Hp StAR™ K671311-2

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Ensayo inmunocromatográfico rápido para la detección de antígeno de H. pylori en muestras de heces.

SERVICIO DE ASISTENCIA TÉCNICA Y ATENCIÓN AL CLIENTE Para cualquier pregunta, por favor, contacte con la delegación o el distribuidor local de Oxoid.


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INDICACIONES DE USO

RAPID Hp StAR™ es un ensayo inmunocromatográfico cualitativo in vitro para la detección de antígeno de Helicobacter pylori en muestras de heces humanas. El estudio está indicado para ayudar en el diagnóstico de la infección por Helicobacter pylori y para monitorizar la respuesta postratamiento en pacientes adultos y diagnóstico primario en pacientes de pediatría.

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RESUMEN

En 1984 Marshall y Warren describieron la presencia de ungermen similar a Campylobacter en el antro y el cuerpo de pacientes con evidencia histológica degastritis y úlcera péptica1. En la actualidad se reconoce que H. pylori es una de las principales causas de enfermedades gastrointestinales2. La infección por H. pylori produce inflamación, que tiene una correlación muy importante con la gastritis crónica, las úlcerasgástricas y duodenales y el carcinoma gástrico3,4. Los pacientes con tratamiento para la erradicación exitosa muestran evidencia de que existe esta relación causa/efecto y con frecuencia lagastritis y las úlceras se curan. Estas bacterias se adaptaron a vivir en el medio ácido del estómago. La enzima ureasa se disocia en amoníaco y dióxido de carbono, por lo que neutraliza el ácido y permite que H. pylori sobreviva en las condiciones bactericidas del estómago. La producción de catalasa y superóxido dismutasa protege a la bacteria de la agresión por parte de los neutrófilos en la mucosa del estómago3. Muchos pacientes infectados por H. pylori desarrollan gastritis, y alrededor del 10% de ellos, úlceras. De los pacientes que sufren de úlceras duodenales ogástricas, el 90% son H. pylori positivos, independientemente de la edad. Las razones de estos fenómenos, además del modo de infección, son tema de investigación en todo el mundo5. Hay dos métodos generales para realizar el diagnóstico de infección por H. pylori: la detección directa delgermen y la determinación indirecta, por medio de la detección de anticuerpos contra H. Pylori desarrollados por el paciente1,6,7. Los métodos directos, pero invasivos, para detectar la infección por H. pylori son la prueba rápida de ureasa, la histología o el cultivo delgermen a partir del material de biopsia8. El cultivo de H. pylori a partir de material de biopsia es difícil y requiere de mucho tiempo. Las dificultades técnicas pueden provocar resultados falsos negativos y, por lo tanto, puede disminuir la sensibilidad del método. Además, H. pylori tiende a colonizar la mucosa en parches y puede, por lo tanto, no ser hallado durante la endoscopia9. Otra forma directa de diagnosticar H. pylori es el uso de la prueba de urea en aire exhalado, que detecta el dióxido de carbono producido por la actividad de la ureasa. Si bien es sumamente sensible y específica, requiere de instrumentación especializada y de la ingesta de urea marcada con isótopos por parte del paciente8,10. Un método frecuentemente utilizado es la detección serológica de anticuerpos específicos contra H. pylori. Este es un método indirecto que detecta anticuerpos específicos contra H. pylori desarrollados por el paciente10. La sensibilidad y especificidad puede variar mucho entre las pruebas de diferentes proveedores. Además, el control de la erradicación con métodos serológicos es insuficiente, debido a que se necesitan varios meses para poder observar una disminución significativa de los niveles de anticuerpos. RAPID Hp StAR™ es un ensayo inmunocromatográfico rápido en formato de flujo lateral (FFL) para la detección directa, no invasiva, de antígeno de H. pylori en las muestras de heces humanas. Debido a la detección directa del antígeno, esta prueba se puede usar para el diagnóstico inicial de infección por H. pylori, además de la monitorización de la erradicación exitosa cuatro a seis semanas después de completar el tratamiento de erradicación y del diagnóstico de reinfección.

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PRINCIPIO DEL ENSAYO

RAPID Hp StAR™ es un ensayo basado en una membrana inmunocromatográfica que utiliza tecnología de amplificación para la determinación de antígeno de H. pylori en muestras de heces. Un reactivo amplificado de captura que incorpora estreptavidina se une a la membrana de nitrocelulosa. Dos anticuerpos monoclonales diferentes específicos para el antígeno de H. pylori se secan en otra membrana en la base de la tira. Uno de estos anticuerpos monoclonales se conjuga con oro coloidal, y el otro se conjuga con biotina. Cuando la tira se sumerge en la muestra de heces diluida, la muestra líquida se desplaza hacia arriba por la tira por acción capilar, solubilizando los dos conjugados de anticuerpo monoclonal. Todo antígeno de H. pylori presente en la muestra se unirá a los dos conjugados de anticuerpo monoclonal solubilizados para formar un complejo antígeno-anticuerpo. Cada complejo estará formado por el antígeno, unido tanto al anticuerpo monoclonal conjugado con oro coloidal como al anticuerpo monoclonal conjugado con biotina. Este complejo migra más arriba por la tira hasta que alcanza al reactivo de captura con estreptavidina, que captura el elemento biotina del complejo antígenoanticuerpo, por lo que inmoviliza todo el complejo y forma una línea de color violáceo-rosa. El resto del conjugado de oro coloidal no unido continúa migrando hacia arriba por la tira y es capturado por un anticuerpo policlonal anti-ratón que está inmovilizado en el área de control de la nitrocelulosa, por lo que forma una segunda línea de color violeta-rosa, lo que indica que la prueba se realizó correctamente.

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DEFINICIONES

En la información del producto se han utilizado los siguientes símbolos.

N

Número de catálogo del producto Instrucciones de uso Contenido suficiente para <N> ensayos Fabricante Fecha de caducidad Código de lote Límite de temperatura Número de muestra/ID de paciente

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REACTIVOS SUMINISTRADOS

20 - Cada kit contiene materiales suficientes para 20 determinaciones. en la etiqueta exterior del envase. 5.1

- La vida útil del kit es la indicada

CONTENIDO DEL ENSAYO RAPID Hp StAR™ Un folleto con las instrucciones de uso 25 palitos de madera 20 pipetas Pasteur de plástico (graduadas a 0,1mL) 20 tiras que se suministran en un tubo de ensayo transparente, listas para su uso. 20 diluyentes de muestra de 1,35mL. Solución salina tamponada con fosfatos que contiene agente antimicrobiano, suero animal y detergente. 2/10

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5.2

PREPARACIÓN, ALMACENAMIENTO Y REUTILIZACIÓN DE LOS COMPONENTES DEL KIT

A fin de asegurar la óptima eficacia del kit, es importante que todos los componentes sin usar del kit se almacenen con arreglo a las siguientes instrucciones. 5.2.1

Tiras para ensayo –

Lista para su uso. Para usar sólo una vez. Almacene las tiras de ensayo no utilizadas a una temperatura de 28°C. Deseche las tiras usadas inmediatamente después de su uso. 5.2.2

Diluyente de muestras -

Lista para su uso. Para usar sólo una vez. Almacene el diluyente de muestras sin usar a una temperatura de 2-8°C.

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EQUIPO

Necesitará el siguiente equipo: Mezclador de vórtex (opcional)

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PRECAUCIONES

Toda persona que lleve a cabo un ensayo con este producto debe recibir formación para su uso y tener experiencia en los procedimientos de laboratorio. 7.1

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD

7.1.1 Los reactivos de este kit contienen agentes antimicrobianos. Evite el contacto con la piel y los ojos. Aclarar inmediatamente congran cantidad de agua en caso de que se produjera un contacto. 7.1.2 No se aplique cosméticos, no fume, no beba ni coma, ni almacene o prepare alimentos dentro del área de trabajo designada. 7.1.3

No pipetee los materiales con la boca.

7.1.4 Lleve puestosguantes desechables cuando manipule muestras clínicas y reactivos. Lávese siempre las manos después de trabajar con materiales infecciosos. 7.1.5

Deseche todas las muestras clínicas con arreglo a la legislación local.

7.1.6

Los usuarios profesionales pueden solicitar a Oxoid una hoja de datos sobre seguridad.

7.2

PRECAUCIONES TÉCNICAS

7.2.1 No utilice los componentes más allá de la fecha de caducidad impresa en las etiquetas. No mezcle ni intercambie lotes de reactivos diferentes. 7.2.2

No congele ningún componente del kit.

7.2.3 Se debe examinar visualmente los componentes del kit para detectar signos de contaminación, deterioro o rotura.

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7.2.4 Si la línea de control no aparece a los 15 minutos, esto puede indicar el bloqueo de las membranas con material particulado. En este caso se recomienda preparar una muestra de dilución y analizarla con una tira de ensayo nueva. 7.2.5 No se deben analizar las muestras recogidas en medio de transporte u otro medio de preservación. 7.2.6

Evite la contaminación de los reactivos.

7.2.7

Las tiras de ensayo no se deben volver a usar

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RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS DE HECES

8.1

RECOGIDA DE MUESTRAS

El ensayo se puede realizar con muestras de heces frescas o congeladas. Las muestras se pueden almacenar hasta 5 días a una temperatura de 2-8°C sin que esto interfiera con la eficacia del ensayo. Para períodos más prolongados, almacene las muestras a una temperatura de -20°C o más baja. Se debe evitar la congelación y descongelación repetida de las muestras. No se deben analizar las muestras recogidas en medio de transporte u otro medio de preservación. 8.2

PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS DE HECES

Retirar la tapa del número requerido de viales para diluyente de muestras. Haciendo uso de una varilla aplicadora de madera agregar una muestra del tamaño de un guisante (unos 0,1g) a cada vial de diluyente y volver a colocar la tapa. Homogeneizar durante 15 segundos en un vórtex o, a mano, agitando vigorosamente. Utilice un nuevo aplicador de madera para cada muestra. Se puede almacenar la suspensión de heces preparadas hasta 5 días a una temperatura de 2-8°C, pero no se la puede congelar.

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PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO

CONSULTE LA SECCIÓN 7,2, PRECAUCIONES TÉCNICAS, ANTES DE LLEVAR A CABO EL PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO. Los reactivos y las muestras deben llevarse a temperatura ambiente (18-30ºC) antes de su uso. 9.1

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO

9.1.1

Adición de las muestras

Abrir cuidadosamente el vial con la tira de prueba y extraer verticalmente tanto la tira como la tapa. Con la pipeta de plástico desechable, agregar 350µL de la suspensión de heces al vial con la tira de prueba, cuidando de mantener limpias las paredes del vial. 9.1.2

Incubación

Vuelva a colocar el tapón y la tira con firmeza, de manera que la base de la tira quede inmersa en la muestra. Deje la tira en posición vertical a temperatura ambiente (18-30°C) durante 15 minutos. 4/10

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9.1.3

Lectura de los resultados del ensayo

Los resultados del ensayo se deben leer visualmente a los 5 minutos después de finalizados los 15 minutos de incubación.

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INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL ENSAYO

Inspeccione visualmente la tira a través del tubo transparente. Si el ensayo se realizó de la manera correcta, al menos aparecerá una línea violeta-rosa. Los resultados se deben interpretar de acuerdo al diagrama que se muestra a continuación.

Hp StAR

d) Hp StAR

c) Hp StAR

b) Hp StAR

a)

C C

C C

C C

C C

T T

T T

T T

T T

Positivo

Negativo

No válido

No válido

a) Dos líneas (T y C):

Positivo

b) Una línea (C solamente):

Negativo

c) Ninguna línea:

Resultado no válido – repetir el ensayo

d) Una línea (T solamente):

Resultado no válido – repetir el ensayo

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LIMITACIONES DE LA EFICACIA

11.1 RAPID Hp StAR™ es para uso diagnóstico in vitro. El estudio está indicado para ayudar en el diagnóstico de la infección por H. pylori y para monitorizar la respuesta postratamiento en pacientes adultos. Un médico debe interpretar los resultados del ensayo, en conjunto con los hallazgos clínicos y/o los resultados de otros procedimientos diagnósticos. 11.2

RAPID Hp StAR™ es un ensayo cualitativo y no se debe hacer ninguna interpretación cuantitativa.

11.3 Se sabe que los antibióticos, los inhibidores de la bomba de protones y los preparados con bismuto inhiben el crecimiento de H. pylori. La toma de muestras de heces se debe realizar no antes de las 2 semanas después de haber terminado la ingesta de inhibidores de la bomba de protones y preparados con bismuto y 4 semanas después de haber terminado la ingesta de antibióticos, respectivamente. 11.4 Un resultado negativo no excluye la posibilidad de una infección por H. pylori en el paciente. La incapacidad para detectar H. pylori puede ser consecuencia de factores tales como la recogida de muestras en un momento inadecuado en el transcurso de la enfermedad en el que haya demasiado poco antígeno presente, una recogida de muestras incorrecta o la manipulación incorrecta de las muestras. 5/10

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11.5 Un resultado positivo solo no justifica la indicación de tratamiento de erradicación. Pueden ser necesarios otros métodos para confirmar una infección por H. pylori. Podría estar indicado realizar el diagnóstico diferencial con métodos endoscópicos invasivos para determinar la presencia de alguna otra complicación, p. ej., úlcera,gastritis autoinmune o cáncer.

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VALORES ESPERADOS

Los valores esperados dependen de la ubicación geográfica y del tipo de población estudiada. La tasa de ensayos con resultados positivos puede variar debido al tipo de ensayo utilizado y el método de recogida y manipulación de la muestra. Los estudios epidemiológicos mostraron que la infección por H. pylori es prevalente en todo el mundo. En Europa y América del Norte, 25 a 50% de la población es portadora de H. pylori. Se informaron tasas de prevalencia incluso más elevadas, entre 70 y 90% en Asia, África y América del Sur1,11. Se demostró que la frecuencia de infección por H. pylori se correlaciona con la edad, el origen étnico, la clase socioeconómica y el medio sanitario engeneral, p. ej., la prevalencia de infección en los Estados Unidos aumenta con la edad, aproximadamente 1% por año12.

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CARACTERÍSTICAS DE EFICACIA ESPECÍFICAS

13.1

ESTUDIOS CLÍNICOS

Estudio 1: Diagnóstico primario en pacientes adultos El ensayo RAPID Hp StAR™ se evaluó en 227 pacientes ambulatorios (86 mujeres, 141 hombres, rango de edad 18–88 años) de un centro en España que estaban siendo estudiados por síntomas de dispepsia. El examen de las heces se realizó en un laboratorio independiente en forma ciega. Los pacientes tuvieron una variedad de enfermedades gástricas, entre las que se destacaron lagastritis, las erosiones gástricas, las erosiones duodenales y la úlcera péptica. Los pacientes con cirrosis (n=73) e insuficiencia renal (n=86) también se incluyeron en el estudio. Se determinó el estado confirmado o la presencia de resultados no concordantes por uno de los siguientes criterios: resultados concordantes de histología y prueba rápida de ureasa, resultados concordantes de histología y prueba de urea en aire exhalado o resultado de prueba de urea en aire exhalado solo. Los resultados del ensayo RAPID Hp StAR™ se compararon con Amplified IDEIA™ Hp StAR™, Oxoid, Ely. Los resultados se muestran en la tabla 1. Tabla 1: Diagnóstico primario en adultos con RAPID Hp StAR™ y Amplified IDEIA™ Hp StAR™

RAPID Hp StAR™

+ -

Amplified IDEIA™ Hp StAR™ + 115 13a 3b 96

Correlación: 93,0% Intervalo de confianza 95%: 88,8-95,9% a) b)

Todas las muestras confirmadas como negativas según uno de los criterios anteriores Todas las muestras confirmadas como positivas según uno de los criterios anteriores

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Estudio 2: Control del tratamiento de erradicación Se evaluó el ensayo RAPID Hp StAR™ en 95 pacientes adultos ambulatorios infectados por H. pylori (29 mujeres, 66 hombres, rango de edad 21 – 86 años) de un centro en España, que habían recibido tratamiento de erradicación. La infección por H. pylori se confirmó por prueba de urea en aire exhalado (PUAE). Se recogieron las muestras de heces 8 semanas después de terminar el tratamiento de erradicación. El examen de las heces se realizó en un laboratorio independiente en forma ciega. Los resultados se muestran en la tabla 2. Tabla 2: Control del tratamiento de erradicación en adultos con RAPID Hp StAR™ y PUR

PUAE RAPID Hp StAR™

+ -

+ 7 2

5 81

Especificidad relativa: 94,2% Intervalo de confianza 95%: 87,0-94,2% Valor predictivo negativo 94,2% Intervalo de confianza 95%: 87,0-98,1% Correlación: 92,6% Intervalo de confianza 95%: 85,4-97,0%

Estudio 3: Diagnóstico primario de infección por H. pylori El ensayo RAPID Hp StAR™ se evaluó en 80 pacientes con sospecha de infección por H. pylori (rango de edad 10 – 100 años) de un centro del Reino Unido. El análisis de heces se realizó en Oxoid a ciegas. Los resultados se muestran en la tabla 3. Tabla 3: Diagnóstico primario con RAPID Hp StAR™ y Amplified IDEIA™ Hp StAR™

RAPID Hp StAR™

+ -

Amplified IDEIA™ Hp StAR™ + 40 1 1 38

Sensibilidad relativa: 97,6% Intervalo de confianza 95%: 87,1-99,9% Especificidad relativa: 97,4% Intervalo de confianza 95%: 86,5-99,9% Correlación: 97.5% Intervalo de confianza 95%: 91,3%-99,7%

Estudio 4: Diagnóstico primario en pacientes pediátricos RAPID Hp StAR™ fue evaluado en 118 pacientes (con edades comprendidas entre 3 meses y 18 años) de un centro en Alemania. Todos los pacientes realizaron una endoscopia, seguida de tinción histológica, un cultivo, un test de urea en el aliento (UBT) y un test rápido de ureasa, además de proporcionar una muestra de heces para la prueba de antígenos. Las muestras de heces fueron congeladas en el momento de la endoscopia. Todas las muestras de heces fueron comprobadas con el ensayo RAPID Hp StAR™ por dos operarios independientes. El resultado de RAPID Hp StAR™ fue comparado con el estado de la muestra basado en una combinación estándar de oro de métodos de referencia. 54 niños fueron clasificados como infectados por H. pylori, definido por cultivos positivos y otros dos ensayos positivos (UBT, histología y test rápido de ureasa). Los 64 niños restantes presentaron resultados negativos concordantes en los cuatro métodos de referencia. La Tabla 4 recoge los resultados. 7/10

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Se eliminaron del estudio cuatro muestras, debido a resultados no válidos, además de otras cinco que dieron resultados equívocos (dos operadores independientes dando resultados diferentes). Tabla 4: Diagnóstico primario en pacientes pediátricos

RAPID Hp StAR™

+ -

Estándar de oro + 38 6 13 52

Sensibilidad relativa: 74,5% (38/51) 95% Intervalo de confianza: 60,4-85,7% Especificidad relativa: 89,7% (52/58) 95% Intervalo de confianza: 78,8-96,1% Valor predictivo positivo: 86,4% (38/44) 95% Intervalo de confianza: 72,7-94,8% Valor predictivo negativo: 80,0% (52/65) 95% Intervalo de confianza: 68,2-88,9% Correlación: 82,6% (90/109) 95% Intervalo de confianza: 75,4-89,7%

13.2

REACTIVIDAD CRUZADA

RAPID Hp StAR™ es sumamente específica para antígenos de H. pylori. No se observó reactividad cruzada cuando se analizaron losgérmenes que se enumeran a continuación. Los análisis se realizaron con cultivos de laboratorio degérmenes conocidos. Especies de Acinetobacter Especies de Aeromonas Especies de Bacillus Especies de Bacteroides Estreptococo beta hemolítico (grupo A) Especies de Campylobacter Candida albicans Especies de Citrobacter Clostridium difficile Especies de Enterobacter Enterococcus faecalis Escherichia coli

Haemophilus influenzae Especies de Klebsiella Especies de Lactobacillus Especies de Listeria Especies de Proteus Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhimurium Especies de Serratia Shigella sonnei Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus

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REFERENCIAS

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