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COLESTEROL PRESENTACIÓN NÚMERO/PRUEBAS VOLUMEN/PRUEBA REACTIVO COLESTEROL ESTÁNDAR STD MUESTRA

2x50mL 100 1.0mL 2x50mL 1x5mL

4 x 50mL 200 1.0mL 4 x50mL 1 x 5mL Suero - S

MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS 1x250mL 250 1.0mL 1x250mL 1x5mL

  

Reloj o cronometro Elementos para obtención, almacenamiento y procesamiento de las muestras. Pipetas automáticas. Espectrofotómetro capaz de leer a 520 nm

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS

USO Y CARACTERISTICAS

Reactivo listo para la utilización

El Kit de diagnóstico de COLESTEROL XERION, es un sistema completamente enzimático para la determinación cuantitativa de Colesterol en suero en método de punto final.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

El Kit está compuesto por un único reactivo listo para el uso, con gran estabilidad que garantiza un desempeño consistente en su forma líquida original y mantiene las condiciones óptimas de la reacción para su uso, utilizando metodología enzimática de gran especificidad analítica, de sencilla y fácil aplicación. Solamente para uso diagnostico IN VITRO

Los reactivos del kit de diagnostico COLESTEROL XERION permanecen estables hasta la fecha de vencimiento indicada en la etiqueta cuando son almacenados de 2°C a 8°C en sus respectivos recipientes bien cerrados y alejados de la luz solar directa. Después de abiertos los reactivos son estables 12 semanas cuando son almacenados de 2°C a 8°C y 4 semanas si se almacenan de 20°C a 25°C protegidos de la luz solar.

RESUMEN El colesterol proviene de la comida y es sintetizado por el cuerpo humano, principalmente dentro de las células hepáticas e intestinales. El colesterol es el componente de las células y membranas orgánicas. Es el precursor metabólico de los ácidos biliares, la vitamina D y hormonas esteroideas. La determinación del colesterol se utiliza para detección de riesgo aterosclerótico y en el diagnostico y tratamiento de desórdenes que implican niveles elevados del colesterol así como desórdenes metabólicos de lípidos y lipoproteínas. El análisis de colesterol fue reportado primero por Liebermann en 1885 seguido por Burchard en 1889. En la reacción de Liebermann-Burchard, el colesterol forma un tinte azul verdoso de los carbohidratos no saturados poliméricos en un medio ácido acético concentrado anhídrido y ácido sulfúrico. El método de ABEI y Kendall es específico para el colesterol pero es una técnica compleja y requiere el uso de reactivos corrosivos. En 1974, Roeschlau y Allain describieron el primer método completamente enzimático. Este método es basado en la determinación de peroxidasa/fenol/4-aminoantipirinala después de la unión enzimática del éster de colesterol por el colesterol esterasa. La conversión del colesterol por la colesterol oxidasa, y la medición subsecuente por la reacción de Trinder del peróxido de hidrógeno formado. La optimización de la unión del éster (99.5%) permite la estandarización usando estándares primarios y secundarios y una comparación directa con los métodos de referencia de la CDC y del NIST.

PRINCIPIO El Colesterol total es determinado de conformidad a las reacciones expuestas a continuación:

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA 

    

Toda muestra biológica debe ser manipulada con la suficiente precaución como si fuera potencialmente infecciosa y recolectarse de acuerdo a las normas de bioseguridad. Usar suero. Anticoagulantes como citrato, oxalato o EDTA producen resultados falsamente disminuidos Mezclar bien las muestras lipémicas antes de la utilización. No usar muestras fuertemente hemólizadas. El Colesterol es estable en el suero o plasma por 7 días entre 18oC -25°C y 6 meses a -20°C.

PROCEDIMIENTO Longitud de onda Tipo de Análisis Muestra / reactivo Temperatura Cubeta Ajustar Abs a 0 1.

Tome 3 tubos de ensayo márquelos y proceda como se expone a continuación:

C. Estearasa Esteres de colesterol

Colesterol + Ácidos grasos C. Oxidasa

Colesterol + O2

520nm (500-550) Punto Final 1:101 37° C 1cm paso de Luz Contra Blanco de reactivo

MUESTRA STD REACTIVO

BLANCO --1000µl

ESTÁNDAR -10µl 1000µl

MUESTRA 10µl -1000µl

Colesterol 3-uno + H2O 2

2H2O2 + Fenol + 4-Aminoantipirina + p-HBS Peroxidasa

2. 3. 4. Quinoneimina + 4H2O

Medir 1000 µl de reactivo. Adicionar 10 µl de muestras e incubar a 37°c por 10 minutos. Determinar la absorbancia de la prueba y el estándar en 520 nm (500550), ajustando el cero con el blanco.

(Colorante Rojo)

Los ésteres de colesterol son hidrolizados por el colesterol esterasa a colesterol libre y ácidos grasos. El colesterol libre es oxidado por el colesterol oxidasa a colesterol-3-en uno y peróxido de hidrógeno. En presencia de per oxidasa y peróxido de hidrógeno, el fenol y la 4-aminoantipirina son oxidados formando la quinonimina, que tiene absorvancia máxima en 520 nm. La intensidad del color rojo formado en la reacción final es directamente proporcional a la concentración de colesterol en la muestra que puede ser determinado fotométricamente.

MATERIALES REQUERIDOS REACTIVO 1. COLESTEROL

2.

STD

CONTENIDO ( Concentración) 4-Aminoantipirina 0.6mM, Colate de Sodio 8.0mM, Colesterol Esterasa  150U/L, Colesterol Oxidasa  150U/L, Peroxidasa de rábano picante  1,200U/L, p-hidroxi benceno sulfonato 20mM, Buffer 125mM, pH 6.8, ingredientes no-reactivos Estándar de 200 mg/dL.

CALCULOS Absorbancia de la prueba Colesterol (mg/dL) = ------------------------------------ x 200 Absorbancia del Estándar

CALIBRACION Utilice un estándar acuosos de Colesterol (200mg /dL) o un calibrador apropiado.

CONTROL INTERNO DE CALIDAD EN EL LABORATORIO El laboratorio debe mantener un programa de calidad interno que establezca claramente los objetivos, procedimientos, normativas, criterios para límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de actividades. Por lo cual, el uso de sueros control para evaluar la imprecisión e inexactitud de las determinaciones debe ser una práctica rutinaria de laboratorio clínico. Se sugiere utilizar los sueros control XERITROL 1 Y XERITROL 2 para el control interno en los ensayos de química clínica. Se recomienda calibración de dos


puntos después del cambio de lote del reactivo y cuando sea requerido de acuerdo a los procedimientos de control de calidad del laboratorio.

LIMITACIONES Las muestras con valores superiores a 500 mg / dL se deben diluir 1:1 con solución salina y volver a analizar. El resultado obtenido debe ser multiplicado por dos.

Este reactivo es para diagnóstico "In Vitro" solamente. Evite ingestión. Evite contacto. El reactivo es una solución ácida. Lave con agua. El reactivo contiene Azida de Sodio como preservativo, éste puede reaccionar con cobre o plomo de tubería y formar compuestos explosivos.

Anticoagulantes como fluoruro y oxalato o EDTA producen resultados falsamente disminuidos. La prueba no es influenciada por los valores de hemoglobina hasta 200mg/dL o por niveles de bilirrubina hasta 10mg/dL. Interferencia de muestras altamente ictéricas y/o hemolizadas en gran medida se puede corregir mediante el uso de un blanco de muestra. VALORES DE REFERENCIA Estos valores deben ser usados únicamente de forma orientativa, se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia en la población atendida. Colesterol (mg/dL) Deseable < 200 mg/dL Riesgo moderado 200 mg/dL– 239 mg/dL Alto Riesgo ≥ 240 mg/dL

DESEMPEÑO

Comparación

 

 

INTERFERENCIAS

LINEALIDAD SENSIBILIDAD

El Colesterol Oxidasa no es totalmente específico para el colesterol. Otros análogos de colesterol (dihidrocolesterol, 7-dehidrocolesterol, etc.) también se oxidan. Estos análogos normalmente no ocurren en cantidades apreciables en el suero. RECOMENDACIONES GENERALES

PRECAUCIONES     

ESPECIFICIDAD

500mg/dL Un cambio de absorbancia de 0.001 a 520nm corresponde a 1mg/dL bajo la condición indicada de este sistema de prueba. Una comparación entre este procedimiento y uno que está certificado por el Centro para el Control de Enfermedades (CDC) y el “National Cholesterol Education Program” (NCEP) sobre la base de muestras humanas probadas tanto por el método de Abell-Kendall y por el método que está certificado produjo una ecuación de regresión de y = 0.94 x – 2.80 (N = 47) con un coeficiente de correlación de 0.99.

Se debe leer y seguir cuidadosamente las instrucciones del procedimiento de ensayo con el objeto de realizarlo en forma correcta. Todos los materiales usados durante el ensayo deben considerarse como potencialmente infecciosos, manipúlelos y deséchelos de acuerdo con las normas de Bioseguridad vigentes y normas de protección ambiental. El kit de diagnóstico COLESTEROL XERION es exclusivo para uso en diagnóstico IN VITRO y para ser usado por profesionales. La limpieza y el secado adecuado del material usado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. Durante la manipulación los reactivos están sujetos a contaminación química y/o bacteriana que pueden reducir la estabilidad. Evite la evaporación manteniéndolos recipientes de los reactivos debidamente tapados.

BIBLIOGRAFIA 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11.

Lieberman, C., Ber. 18:1803 (1885). Burchard, H., Chem. Fentr. 61:25 (1890). Flegg, H.M., Ann. Clin. Biochem. 10:79 (1973) Richmond, W., Scand. J. Clin. Lab. Invest. 29:Suppl. 26, abstr. (1972) Allain, C.C., et al, Clin. Chem. 20:470 (1974) Roeschlau, P., et al, Z. Klin. Chem. Klin. Biochem 12:226 (1974) Trinder, P., Ann. Clin. Biochem. 6:24 (1969) Perlstein, M.T., et al, J. Microchem. 22:403 (1977). Witte, D.L., et al, Clin. Chem. 20:1282 (1974). Young, D.S. et al, Clin. Chem. 21:1D (1975). National Institute of Health Publication No. 88-2926 “Detection,Evaluation, and Treatment of High Cholesterol in Adults”, November

LOTE: N07C1231

VENCE: 10/2014

REF: 1 Frasco x 250mL

REVISIÓN: 09/2013

Precisión RESULTADOS ENTRE CORRIDA

DIFERENTES DÍAS CORRIDA A CORRIDA

REF.:

MEDIA

DE

CV

mg/dL

mg/dL

%

150

9.7

6.5

124

8.8

7.0

MEDIA

DE

CV

mg/dL

mg/dL

%

142

7.4

5.2

114

6.1

5.3

LOTE:

VENCE:

REVISIÓN:

Col total  

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