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BUN PRESENTACIÓN NÚMERO/PRUEBAS VOLUMEN/PRUEBA REACTIVO 1 ESTANDAR STD MUESTRA

1 x 60 mL 60 1.0 mL 1 x60 mL 1 x 5 mL Suero

USO Y CARACTERISTICAS El Kit de diagnóstico de BUN XERION, se utiliza para la determinación cinética cuantitativa de Nitrógeno Ureico (BUN) en suero humano. Esta técnica muestra una amplia linealidad, reduciéndose las repeticiones por valores elevados. Las sustancias utilizadas en la reacción, se encuentran distribuidas adecuadamente en los reactivos en la forma líquida original, manteniéndose así las óptimas condiciones operacionales, permitiendo la utilización directa de los reactivos en sistemas automatizados.

PRINCIPIO Ureasa ⎯-----------------------→2NH₃ + CO₂ GD NH₃ + 2 Oxiglutarato +NADH + H+ ------→ L glutamato + NAD+ + H₂O

normal y

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Reactivo listo para el uso. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Los reactivos del kit de diagnostico BUN XERION permanecen estables hasta la fecha de vencimiento indicada en la etiqueta cuando son almacenados de 2°C a 8°C en sus respectivos recipientes bien cerrados y alejados de la luz solar directa. El reactivo debe ser transparente e incoloro. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA 

RESUMEN La determinación de la urea es la prueba más utilizada para evaluar función renal. La prueba es usada frecuentemente en conjunción con la determinación de la creatinina para el diagnóstico de hiperuremia pre renal, hiperuremia renal e hiperuremia post- renal. La urea es el producto final degradación del metabolismo de las proteínas y aminoácidos. En el catabolismo las proteínas son reducidas a aminoácidos y son desaminadas. El amoniaco formado en este proceso es sintetizado a urea en el hígado. Esta es la vía catabólica más importante para eliminar el exceso de nitrógeno en el cuerpo humano. La urea ha sido determinada por el método directo donde la urea se condensa con diacetil para formar un cromógeno y por un método indirecto donde se mide el amoniaco que de libera de la acción de la ureasa sobre la urea. El amoniaco libre se ha medido utilizando el reactivo de Nessler y la reacción de Berthelot, Talke y Schubert introdujeron un procedimiento (enzimático) en 1965 utilizando ureasa y glutamato dehidrogenasa. Este procedimiento presente se basa en una modificación de aquel método.

Sueros control con valores conocidos de BUN patológico.

Toda muestra biológica debe ser manipulada con la suficiente precaución como si fuera potencialmente infecciosa y recolectarse de acuerdo a las normas de bioseguridad. No usar anticoagulantes que contengan fluoruro o iones amonio. El fluoruro en altas concentraciones es inhibidor de la Ureasa. La Urea es estable en el suero por 7 días entre 2°C-8°C o 20°C25°C y 12 meses a -20°C.

PROCEDIMIENTO Longitud de onda Tipo de Análisis Muestra / reactivo Dirección de reacción Temperatura Retraso de fase Tiempo de lectura Normal Baja Normal Alta

340nm Tiempo Fijo 1:101 Decreciente 37° C 30 segundos 60 segundos 8 mg / dl 23 mg / dl

1.

Tome 3 tubos de ensayo márquelos y proceda como se expone a continuación Estándar Muestra MUESTRA -10µl STD 10µl -REACTIVO TRABAJO 1000µl 1000µl

Urea + H₂O

La urea se hidroliza por la ureasa para producir amoniaco y agua, el amoniaco liberado reacciona con 2 Oxiglutarato en la presencia de NADH para dar glutamato. Una cantidad equimolar de NADH se oxida durante la reacción resultando en una disminución de la absorción que es directamente proporcional a la concentración de nitrógeno de urea en la muestra.

2. 3. 4.

5. 6.

MATERIALES REQUERIDOS NOMBRE R1 Enzimático STD

CONTENIDO α-Ketoglutarato 2.9 mM,; Ureasa ≥24000 U/L; GLDH ≥1300 U/L NADH 0.35mmol/L Estándar de 20 mg/dl.

7.

Medir 1000µl en cada uno de los tubos Agregar 10 µl de las muestras, una a una. Mezclar y activar simultáneamente el cronómetro y medir la absorbancia A1 de la muestra y estándar exactamente a los 30 segundos y leer la absorbancia A2 exactamente a los 60 segundos después de la primera lectura.(Incubación 37° C) Usar la diferencia de absorbancia (A) entre los dos tiempos (A30-A60) para calcular los resultados. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente, manteniéndose la relación MuestraReactivo 1:100. Se sugiere utilizar Calibradores Proteicos para la calibración de sistemas automáticos.

CALCULOS Absorbancia muestra BUN (mg/dl) = ----------------------------------Absorbancia estándar

x 20mg/dl

MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS   

Reloj o cronometro Elementos para obtención, almacenamiento y procesamiento de las muestras. Pipetas automáticas. Espectrofotómetro capaz de leer a 340 nm

Nota: para convertir resultados en unidades SI (mmol/L), multiplicar el resultado por 0.357 (mg/dl)


CALIBRACION

Precisión

Utilice un estándar acuosos de BUN (20mg /dl) o un calibrador apropiado.

Entre corridas

CONTROL INTERNO DE CALIDAD EN EL LABORATORIO El laboratorio debe mantener un programa de calidad interno que establezca claramente los objetivos, procedimientos, normativas, criterios para límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de actividades. Por lo cual, el uso de sueros control para evaluar la imprecisión e inexactitud de las determinaciones debe ser una práctica rutinaria de laboratorio clínico. Se sugiere utilizar los sueros control XERITROL 1 Y XERITROL 2 para el control interno en los ensayos de química clínica. Se recomienda calibración de dos puntos después del cambio de lote del reactivo y cuando sea requerido de acuerdo a los procedimientos de control de calidad del laboratorio.

Las muestras con valores sobre 80 mg/dl se deben diluir con solución salina 0.9% 1:1, corra de nuevo y los resultados multiplíquelos por dos.

Este reactivo es para diagnóstico "In Vitro" solamente. Evite ingestión. Evite contacto. El reactivo es una solución ácida. Lave con agua. El reactivo contiene Azida de Sodio como preservativo, éste puede reaccionar con cobre o plomo de tubería y formar compuestos explosivos. Lave con grandes cantidades de agua para prevenir destrucción.

INTERFERENCIAS

VALORES DE REFERENCIA BUN: 8 mg/dl a 23 mg/dl Urea 17 - 49mg/dL Urea (mg/dL) = BUN (mg/dL) × 2.14 Urea (mmol/L) = Urea (mg/dL) × 0.167 Estos valores deben ser usados únicamente de forma orientativa, se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia en la población atendida. Para fines diagnósticos los resultados de Urea o BUN siempre deben ser evaluados en conjunción con la historia médica, exámenes clínicos y otros resultados del paciente. DESEMPEÑO

Especificidad

Sensibilidad Metodológica

REF.:

mg/dl

mg/dl

%

Muestra 1

11.4

0.3

2.63

Muestra 2

36.2

0.52

1.44

MEDIA

DE

CV

mg/dl

mg/dl

%

Muestra 1

11.62

0.5

4.3

Muestra 2

36.15

1.16

3.21

Diferentes Días

RECOMENDACIONES GENERALES

Se debe leer y seguir cuidadosamente las instrucciones del procedimiento de ensayo con el objeto de realizarlo en forma correcta. Todos los materiales usados durante el ensayo deben considerarse como potencialmente infecciosos, manipúlelos y deséchelos de acuerdo con las normas de Bioseguridad vigentes y normas de protección ambiental. El kit de diagnóstico BUN XERION Exclusivamente para uso en diagnóstico IN VITRO y para ser usado por profesionales. La limpieza y el secado adecuado del material usado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. Durante la manipulación los reactivos están sujetos a contaminación química y bacteriana que pueden reducir la estabilidad. Evite la evaporación manteniéndolos recipientes de los reactivos debidamente tapados.

BIBLIOGRAFIA 1.

El amoniaco producido en la cubeta durante una determinación de GLDH ó lactato UV interfiere con la prueba. Pueden ocurrir concentraciones elevadas bajo condiciones acídicas. (Acidosis) Se debe tener mucho cuidado para prevenir la contaminación con amoniaco de las muestras y los calibradores a ser analizados para BUN.

Linealidad

CV

PRECAUCIONES     

DE

LIMITACIONES 

MEDIA

80 mg/dl Un estudio comparativo hecho entre este método y otro método BCG resultó con un coeficiente de correlación de 0.999 con una ecuación de regresión. y = 1.04x - 0.669. El límite de detección fotométrica hallado fue de 1.0 g/dl.

LOTE:

VENCE:

Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia W.B. Saunders (1976). 2. Fearon, W.R., Biochem J. 331:902 (1939). 3. Marshall, E.K., Jr., J. Biol. Chem. 15:487 (1913). 4. Gentzkow, C.J., J. Biol. Chem. 143:531 (1952). 5. Fawcett, J.K., Scott, J.E., J. Clin. Path. 13:156 (1960). 6. Talke, H., Schubert, G.E., Klin. Wschr. 43:174 (1965). 7. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia W.B.Saunders, p991 (1976). 8. NCCLS document “Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue”, 2nd Ed. (1991). 9. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975). 10. NCCLS document “Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices”, 2nd Ed. (1992).

LOTE: N06C095S1

VENCE: 03/2015

REF: Kit x 60 mL

REVISIÓN: 10/2013

REVISIÓN:

Bun  

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