La microbiología ocular en el diagnóstico de ulceras infecciosas de cornea
Culturette,solucion de Hanks y M4 para virus, el Transtube para transportar muestras con sospecha de chlamydia y virus, y la solución de Page o el agar base no nutritivo sembrado con bacteria para transportar Acanthamoeba. En medios de cultivo líquidos de enriquecimiento como el caldo tripticasa soya, tioglicolato, infusión de cerebro corazón ( BHI), y el caldo de carne cocida se siembran y transportan bacterias aerobias, anaerobias y hongos. Una vez en el laboratorio, se procede a teñir los extendidos para realizar tinciones de Gram, Giemsa, KOH, Azul de Lactofenol, Ziehl-Nielsen, Blanco de Calcofluor o Naranja de Acridina según la sospecha clínica del germen causal. La muestra es sembrada a su vez en agares sólidos para luego ser incubadas a temperaturas específicas según el germen sospechado. La técnica clásica de siembra de muestras de cornea en microbiología ocular, cuando se siembra directamente del ojo es haciendo tres filas de estrias en C. Una primera fila de estrías proviene del centro de la ulcera. La segunda y tercera fila corresponden a los bordes superior e inferior de la ulcera. En caso de estar sembrando una muestra proveniente de medios de transporte o caldos de enriquecimiento, se usan aplicadores, y se utiliza la técnica clásica de la microbiología general de la siembra en rallas discretas múltiples. Los medios de rutina en que se hacen las siembras son agares enriquecidos para el aislamiento de gérmenes fastidiosos, como son el agar sangre, el agar chocolate (aeróbico y anaeróbico) y el agar sabouroid para hongos. Medios diferenciales-selectivos como el agar de Mc Konkey para
gramnegativos, el agar sales de manitol para estafilococo, y el Eosina azul de metileno para gamnegativos, también pueden utilizarse en casos escogidos. Posteriormente, Los medios de cultivo sembrados son incubados. La incubadora se utiliza como medio para exponer la muestra a una temperatura determinada y obtener el crecimiento deseado. Para gérmenes comunes se incuban las muestras a 37oC en agar sangre y agar chocolate, por un periodo de tiempo que varia entre 48 horas y 7 dias. La concentración de CO2 debe estar entre 3 a 10%. Los anaerobios son incubados en jarra anaeróbica a 35oC, hasta por 14 días. El crecimiento de hongos fastidiosos y Actynomices puede obtenerse entre 25 y 30º, y puede tomar entre 4 y 6 semanas. Mycobacterias requieren una concentración de 5 a 10% de CO2 y pueden tardar en crecer hasta 6 semanas. Una vez estamos ante la presencia de colonias, procedemos a identificar la bacteria causal. Este paso se realiza mediante pruebas bioquímicas de caracterización, que son esencialmente baterías de medios diferenciales, seleccionados para identificar grupos específicos de bacterias. Mediante formulas matemáticas, los resultados de las pruebas bioquímicas son transformados en números de biotipos de especies bacterianas, previamente identificados en la información obtenida de observar miles de reacciones bioquímicas. Ejemplos de estas pruebas que se usan en microbiología ocular son el reactivo API 20 A para anaerobios, Indol, Xylol y Bromo de Cresol. Para mayor precisión, las pruebas se complementan con la evaluación de la morfología colonial, de la presentación
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