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qwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasBiotecnología dfghjklzxcvbnmqwertyuiopasSeparación cromatográfica dfghjklzxcvbnmqwertyuiopasde pigmentos vegetales dfghjklzxcvbnmqwertyuiopas2013/14 dfghjklzxcvbnmqwertyuiopasMesa 2 dfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwertyuiopa


1. EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES

EXTRACCIÓN DE LOS PIGMENTOS VEGETALES CON HEXANO:ETANOL (4:2) DE: − −

LECHUGA ACELGA

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA: −

FASE ESTACIONARIA: Sílica gel (compuesto polar) sobre una lámina de vidrio.

FASE MÓVIL: eluyentes apolares. o Benceno (1) o Benceno:Acetona (7:3) (2) o Etanol (3) o Etanol:Acetona (6:4) (4)


2. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. Se emplearon diferentes disolventes de diferente naturaleza polar/apolar para determinar cuál era aquel o aquellas mezclas que aumentaban la eficacia del proceso: − − − −

Benceno (apolar) (1) Benceno:Acetona (apolar:polar) (7:3) (2) Etanol (muy polar) (3) Etanol:Acetona (polares) (6:4) (4)

El principio del método se basa en que la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. El eluyente no sólo actúa como fuerza propulsora sino que, además, su propia estructura química contribuye a que los pigmentos puedan separarse mediante sucesivos equilibrios de adsorción-desorción. Si solo empleamos un disolvente apolar, las clorofilas no podrían separarse porque quedarían adsorbidas en el punto de aplicación (fase estacionaria polar). Añadiendo una pequeña porción de disolvente polar, en el cual estas moléculas son solubles, posibilita el establecimiento de esa serie de equilibrios y por ende su separación.

(1)

(2)

En nuestro caso, ajustándonos al tiempo disponible para realizar la experiencia, utilizamos 4 eluyentes (fase móvil) diferentes en base a su “polaridad/apolaridad”. El tipo de polaridad de las sustancias a separar permite que los solventes de acuerdo con su naturaleza polar o apolar las arrastren o no.

(3)

(4)

DATOS A TENER EN CUENTA: −

Las clorofilas A y B difieren en el tipo de sustituyente de su carbono 3 (grupo metilo y grupo aldehído, respectivamente) => la Clorofila B es más polar que la Clorofila A. Carotenoides (menos polares que las clorofilas): o Carotenos son hidrocarburos que sólo poseen H y C, siendo solubles en disolventes no polares. o Xantofilas son derivados oxigenados de los carotenos, siendo solubles en alcohol.

Referencia: http://dialnet.unirioja.es/descarga/articulo/2510362.pdf


3. RESULTADOS Y CONCLUSIONES. Se presentan los resultados obtenidos a partir de la cromatografía efectuada a muestras de dos extractos diferentes: uno de lechuga (L) y otro de acelga (A). Tras realizar las distintas experiencias, concluimos que la mezcla más adecuada de todas las que empleamos fue la (2) “Benceno:Acetona (7:3)”, que permitió una mejor separación de los diferentes pigmentos en el caso de la acelga.

Se ha utilizado esta mezcla por contener un disolvente apolar (benceno) con una pequeña proporción de uno polar (acetona) lo que nos permite separar los pigmentos más representativos, no siendo posible separar la totalidad de los pigmentos debido a sus diferentes polaridades. Como se puede observar, los pigmentos se separan de forma proporcional a su polaridad, es decir, los más polares como las clorofilas quedan retenidos cerca de la línea de máxima altura mientras que los menos polares como los carotenos lo hacen más cerca del punto de aplicación del eluyente.

Rf1= 4,9/5,3 = 0,92 Rf2= 5,1/5,3 = 0,96 Rf3= 5,2/5,3 = 0,98


Informe cromatografia acabado  
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