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畜牧兽医学报  2009 ,40 (1) :52258

A ct a V eteri nari a et Zootechnica S i nica

不同品种肉鸡肠道 r BAT 和 y + L AT2 mRNA 表达的发育性变化 冯定远1 3 ,谭会泽1 ,2 ,邹仕庚1 ,3 ,刘清神1 ,左建军1 ,董泽敏1 ,叶  慧1 ,张常明1 (1. 华南农业大学动物科学学院 ,广州 510642 ; 2. 广东温氏食品集团有限公司 ,新兴 527439 ;3. 广东科贸职业学院 ,广州 510430)

摘  要 : 选用遗传背景相同的 1 日龄父母代雄性 Arbor Acre (AA) 和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各 160 羽 ,采用相 对定量 R T2PCR 方法 ,以 AA 肉鸡和岭南黄肉鸡十二指肠 、 空肠和回肠样品为模板 ,研究不同品种肉鸡肠道碱性氨 基酸转运载体 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达的发育性变化 。结果显示 : 十二指肠和空肠 rBA T 和 y + L A T2 mR2 NA 表达的发育性变化与回肠有着较大的差异 。不同品种肉鸡 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 在十二指肠和空肠的表

达具有相同的发育模式 ,从 2~30 d 不断升高 ,44 d 下降 ,55 d 回升 ; 岭南黄肉鸡 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达丰 度的变化幅度小于 AA 肉鸡 ,AA 肉鸡 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达丰度在 2~30 d 时均高于岭南黄肉鸡 。回肠 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和 AA 肉鸡间有显著差别 , 岭南黄肉鸡回肠 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达在后期 ( 30~58 d) 高于前期 ( 2~16 d) ; 而 AA 肉鸡回肠 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达在 58 d 显著高于其它时间点 ,在 16 d 时最低 。以上结果说明 : ( 1 ) 十二指肠和空肠 rBA T 、 y + L A T2 mRNA 表达的发育

性变化与回肠有着较大的差异 ,这表明肠道近端和远端在碱性氨基酸吸收的功能上可能有差异 ; (2) 不同品种肉鸡 十二指肠和空肠 rBA T 、 y + L A T2 mRNA 的表达具有相同的发育模式 ,但在时间点上有一定的差异 ,而与回肠的表 达模式不同 ,表明 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 的表达受到发育阶段 、 品种和肠段的影响 ; (3) 回肠 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和 AA 肉鸡间有显著差别 。

关键词 : 肉鸡 ; 肠道 ; 碱性氨基酸转运载体 ; 发育性表达 中图分类号 : S8311 1     文献标识码 : A     文章编号 :036626964 ( 2009) 0120052207

Ontogenetic Expression of rBAT and y + LAT2 mRNA in Intestine of Broiler F EN G Ding2yuan1 3 , TAN Hui2ze1 ,2 , ZOU Shi2geng1 ,3 , L IU Qing2shen1 , ZUO J ian2jun1 , DON G Ze2min1 , YE Hui1 , ZHAN G Chang2ming1 ( 1 . Col le ge of A ni m al S cience , S out h Chi na A g ricult u ral U ni versi t y , Guan g z hou 510642 , Chi na; 2 . Guan g don g W en′ s Grou p Co. , L t d , X i n x i n g 527439 , Chi na;

3 . Guan g don g V ocational Col le ge of S cience an d T ra de , Guan g z hou 510430 , Chi na) Abstract : 160 12day2old parental male Arbor Acre ( AA ) broiler s and 160 12day2old parental male Lingnan Yellow broiler s were rando mly divided into 4 replicates , respectively. Ontogenetic ex2 p ressio n of rBA T and y + L A T2 mRNA in duodenum , jejunum and ileum of AA broilers and Ling2 nan Yellow broiler s were determined by relative quantitative R T2PCR. It was fo und t hat : ( 1 ) Onto genetic exp ressio n of rBA T and y + L A T2 mRNA in duodenum and jejunum was different f ro m t hat in ileum. ( 2) Ontogeny pat terns of rBA T and y + L A T2 mRNA in duodenum and jeju2 num were co nsistent bet ween AA broiler s and Lingnan Yellow broilers. The abundance of rBA T and y + L A T2 mRNA in t wo breeds was increased f ro m day 2 to day 30 , t hen decreased o n day 44 收稿日期 :2007212203 基金项目 : 国家重点基础研究发展计划 (973) 项目 (2004CB117501) ; 广东省科技攻关项目 (2005B20201016) ; 广东省联合基金项目 ( U0731004) 作者简介 : 冯定远 (19612) ,男 ,教授 ,博导 ,主要从事动物营养需要与分子营养研究 3 通讯作者 : 冯定远 , E2mail : fengdy @scau. edu. cn


1 期

冯定远等 : 不同品种肉鸡肠道 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达的发育性变化

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and increased again o n day 58. While co mpared two breeds directly , t he change range of rBA T and y + L A T2 mRNA in AA broiler s was larger t han t hat in Lingnan Yellow broilers. The abun2 dance of rBA T and y + L A T2 mRNA in AA broilers was higher t han t hat in Lingnan Yellow broil2 er s f ro m day 2 to day 30. ( 3) Ontogeny patterns of rBA T and y + L A T2 in ileum was different be2 t ween t wo breeds. These result s indicate t hat : ( 1) Ontogeny pat terns of rBA T and y + L A T2 mR2 NA in duodenum and jejunum was different f ro m t hat in ileum , indicating t hat t he f unctio n of cat 2 io nic amino acid absorptio n in p ro ximal intestine may be different f ro m t hat in distal intestine. ( 2) Ontogeny of rBA T and y + L A T2 mRNA in t wo breeds had same pattern in duodenum and je2 junum , and t here was difference at same develop ment stage bet ween AA broiler s and Lingnan Yellow broilers and o ntogeny pat tern bet ween duodenum ( jejunum ) and ileum indicating t hat rBA T and y + L A T2 mRNA exp ressio n co uld be regulated by develop mental stage , breed and seg2 ment of intestine. ( 3 ) Ontogeny of rBA T and y + L A T2 mRNA in ileum were different bet ween Lingnan Yellow broiler s and AA broiler s. Key words : broiler ; intestine ; catio nic amino acid t ransporter ; o ntogenetic exp ressio n

  细胞的氨基酸转运系统可以分为中性 、 酸性和 碱性氨基酸转运系统 , 每类转运系统由多个转运机 制不同的转运载体组成 [ 1 ] 。肠道中存在的碱性氨基 酸转运系统包括 y + 、 b0 , + 、 y + L 和 B0 , + 。转运系统 B0 , + 在肠道不发 挥主 要的 转运 功能 , 其转 运蛋 白

指肠 、 空肠和回肠 rBA T 、 y + L A T2 mRNA 表达的 发育模式 ,并进行品种间比较 ,揭示肉鸡碱性氨基酸 反向交换转运系统 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 的表 达规律 ,为碱性氨基酸营养在肉鸡生产中的应用提 供理论依据 。

A TB0 , + 在肠道后段表达水平较高 ,转运由肠道微生

物产生的 D 型氨基酸 [ 2 ] 。肠道对碱性氨基酸的吸 收主要是通过转运系统 y + 、 b0 , + 和 y + L 协同来实现 的 [ 325 ] 。系统 b0 , + 和 y + L 的蛋白质属于异二聚体结

1  材料与方法

构 ,由重链和轻链组合发挥其转运功能 ,均属于反相 交换转运机制 。系统 b0 , + 主要在肠道和肾小管上皮 细胞顶端表达 [ 627 ] ,主要从肠腔面吸收碱性氨基酸和 胱氨酸 ,转出中性氨基酸 , 其重链为 rBA T , 轻链为 SL C7A9 。转运系统 y + L 在钠离子的协同作用下 ,

育正常的 1 日龄父母代雄性 AA 肉鸡和父母代雄性 岭南黄肉鸡各 160 羽 ( 快大型 ,8 周龄上市体质量 11 5 kg) ,每个品种按照体质量一致的原则分为 4 个 重复 ,每个重复 40 只鸡 。 11 11 2  日粮组成及营养水平  参照 N RC ( 1994 ) 和 国家标准 ( 1986) 0 ~ 8 周龄肉鸡营养需要设计饲料 配方 ,日粮组成和营养水平参照文献 [ 12 ] 。于 31 日 龄开始采用逐步换料的方法 ,至 34 日龄全部更换为 后期日粮 。 11 11 3  饲养管理与免疫  试验在华南农业大学动 物科学学院种鸡场进行 ,粉料饲喂 。红外取暖 ,自由 饮水和采食 ,人工持续光照 , 保持正常育雏温度 , 常 规免疫 。 11 11 4  组织采样  分别于 2 、 16 、 30 、 44 和 58 d , 每 个重复取 2 只接近平均体质量的鸡 ( 即每个处理共 8 只) ,断颈宰杀 ,宰前不禁食 。分离肠道 ,沿纵向剖 开 ,用 4 ℃预冷的磷酸缓冲液 ( PBS) 冲洗 ,再用吸水 纸吸干 。分别从十二指肠 U 状弯曲的起始处和结 束处向下取 3 cm 肠段 , 作为十二指肠和空肠样品 ;

对胞外的中性氨基酸有高的亲和力 , 向细胞内转入 中性氨基酸的同时 ,转出细胞内的碱性氨基酸[ 3 ,829 ] , 该系统主要定位于肠细胞和肾小管的基底膜 , 其 2 个轻链 ( y + L A T1 和 y + L A T2 ) 分别和重链 4 F2hc 构成 2 个不同转运蛋白 。y + 系统包括 4 个成员 , 其 转运蛋白分别为 CA T1~4 , 其中 CA T1 ~ 3 相互间 碱基 的 同 源 性 达 到 60 % 左 右 , 而 与 CA T4 只 有 40 %[ 5 ] 。y + 转运系统属于细胞中典型的为数极少 的单向转运系统[ 10 ] ,其转运驱动力主要是膜两侧的 电势梯度 。与系统 b0 , + 和 y + L 不同 ,y + 系统主要是 逆着碱性氨基酸浓度梯度向细胞内聚集碱性氨基 酸 [ 11 ] 。   研究选用父母代雄性 AA 鸡和岭南黄肉鸡 , 运 用相对定量 R T2PCR 方法研究不同品种肉鸡十二

11 1  试验动物与样品采集 11 11 1  试验动物  选用遗传背景相同的同批次 、 发


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畜  牧  兽  医  学  报

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含 Rando me ( 10) 引物 5 μmol ・L - 1 ,1 mmol ・L - 1 dN TP ( 北京赛百盛基因技术有限公司) ,20 U RNA 酶抑制剂 ( RNase inhibitor , Ta Ka Ra , 大连 ) ,200 U 反转 录 酶 ( MML V R T , Pro mega ) , 5 μL 5 ×R T Buffer 。样品总 RNA 、 Rando me ( 10 ) 和 dN TP 在反

从回盲韧带起始处向下取 3 cm 肠段 , 作为回肠样 品 。放入 11 5 mL 离心管中 ,置液氮速冻 , - 70 ℃冷 冻保存 。 11 2  相对定量 RT2PCR 11 21 1  样品总 RNA 提取  采用 Trizol ( 北京赛百 盛基因技术有限公司) 一步抽提法提取肠道组织总 RNA ,紫外比色法测定总 RNA 的浓度和纯度 ( Ep 2 性琼脂糖凝胶电泳 , 根据 28S r RNA 和 18S r RNA

转录前 70 ℃变性 5 min ,冰上放置 5 min ,再加入其 余试剂 ,混匀后于 37 ℃反应 60 min , 95 ℃变性 5 min 。反转录产物 ( cDNA ) - 20 ℃保存备用 。 11 21 3  目的基因引物设计和 PCR 反应条件  PCR

的灰度比评价 RNA 的质量 。 11 21 2  反 转 录  分 别 准 确 量 取 2 μg 各 样 品 总 RNA 进行反转录 。反转录反应体积为 30 μL , 其中

引物采用 Primer 软件设计 ,由北京赛百盛基因技术 有限公司合成 , 引物序列及参数见表 1 。以β2actin 管家基因作为内标 ,对目的基因进行相对定量分析 。

pendorf Bio Photo meter 260 nm ) 。用 11 4 %甲醛变

表 1  rBAT、 y + LAT2 和β2actin 基因引物参数 Table 1  Parameters of primer pairs for rBAT, y + LAT2 andβ2actin gene

基因 Gene

引物位置/ bp

 

) 引物序列 ( 5′ 23′

产物长度/ bp

( GenBank accession)

Localizatio n

 

Primer sequence

Product size

rBA T ( SL C3A1)

366~386   

Sense : C TACCA GGTC TACCC TC GT TC

( XM 426125. 1)

779~760   

Antisense : T TCCCA TA GACAC TCACCCA

y + L A T2 ( SL C7A6)

350~367   

Sense : CC T GA TA GTA GGCAACA T

( XM 413988)

930~912   

Antisense : A GAACAA GGCA GA GTA GA G

83~101   

Sense : T GC T GC GC TC GT T GT T GAC

373~355   

Antisense : GGGT GC TCC TCA GGGGC TA

β2actin ( XM 429312)

  扩 增 片 段 测 序 后 在 网 站 ht tp :/ / www . ncbi. nlm. nih. gov/ BL A S T/ 上进行 BL A S T 比对 , 结果 显示目的基因序列与预测序列完全吻合 , rBA T 和 y + L A T2 的扩增片段分别跨越了 3 个和 2 个内含 子 ,从而避免了基因组的污染 。   内标基因β2actin Primer s ( 10 μmol ・L - 1 ) 和 Co mpetimer s ( 10 μmol ・L - 1 ) : 参照 Dieffenbach [ 13 ] 所提供的方法 ,将β2actin Primers 的 3′端进行修饰

414 581 291

中只能与模板结合而不能延伸 , 得到β2actin Co m2 petimer s ( N H2 2β2actin ) 。将 β2actin Primer s 和 Co mpetimers 均稀释至 10 μmol ・L - 1 备用 。   PCR 反应条件 : 采用单管法进行 PCR 扩增 , 以 混合样 ( 待测样品等比例混合) 对 PCR 反应条件 、 循 环数以及β2actin 与β2actin Co mpetimer s 的比例等 进行优化 。rBA T 和 y + L A T2 基因 PCR 反应条件 如表 2 所示 ( 25 μL 的反应体系) 。

( 北京赛百盛基因技术有限公司) ,使其在 PCR 过程 表 2  rBAT 和 y + LAT2 基因 PCR 反应条件 Table 2  PCR condition of rBAT and y + LAT2

基因

β2actin ∶

cDNA

Buffer

MgCl 2

dN TP

Taq 酶

引物

/μL

/μL

/μL

/μL

/μL

Primer/μL

N H 22β2actin

rBA T

2

2. 5

1. 5

0. 5

0. 5

2

+

2

2. 5

1. 4

0. 5

0. 5

2

Gene

y L A T2

退火温度

循环数 Cycle

Annealing temperat ure/ ℃

十二指肠

空肠

回肠

6 ∶4

60

26

25

25

4 ∶6

57

29

29

29

  PCR 循环条件为 : 94 ℃预变性 5 min ;94 ℃变

min 。

性 30 s ,退火温度 30 s ,72 ℃延伸 50 s ;72 ℃延伸 10

  电泳及灰度分析 : 取 10 μL PCR 产物在 21 0 %


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冯定远等 : 不同品种肉鸡肠道 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达的发育性变化

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EtBr 染色的琼脂糖凝胶上电泳 。图像处理及灰度

分析用 LabWorks Image Acquisitio n and A nalysis Soft ware 41 0 ( Ult ra2Violet Product s L t d1 , Cam2 bridge , U K) 进行 ,根据目的基因和β2actin PCR 产 物的灰度比 , 确定样品中各基因表达的相对含量 。 每一基因的检测 , 其 R T2PCR 过程至少重复 2 次 , 直至得到相同的结果 。 11 3  数据分析   试验数据以平均数 ±标准误 ( g x ±sgx ) 表示 。用 SPSS111 0 分析数据 ,差异显著性检验用独立样本 t

检验 和 单 因 子 方 差 分 析 ( o ne2way ANOVA ) , 以 L SD 方法进行多重比较 。

2  结果与分析 21 1  不 同 品 种 肉 鸡 十 二 指 肠 rBAT 和 y + LAT2 mRNA 表达的发育性变化

  AA 肉 鸡 和 岭 南 黄 肉 鸡 十 二 指 肠 不 同 时 期 rBA T mRNA 的表达丰度如图 1 所示 。岭南黄肉 鸡与 AA 肉鸡十二指肠 rBA T mRNA 的表达具有 相似的发 育性 变化 ; 2 个不 同品 种肉 鸡十 二指 肠 rBA T mRNA 表达丰度均在 2 d 时最低 ,30 d 时最 高 ; 其中岭南黄肉鸡 2 d 时 rBA T mRNA 表达丰度 显著低于其它各个时期 ( P < 01 05 ) , AA 肉鸡 2 d 时显著低于 16 、 30 和 58 d ( P < 01 05) 。不同品种肉 鸡间十二指肠 rBA T mRNA 的表达丰度在各个时 期 AA 肉鸡均高于岭南黄肉鸡 ,其中在 16 d 时达到 显著水平 ( P < 01 05) 。   AA 肉鸡和岭南黄肉鸡十二指肠不同时期 y + L A T2 mRNA 的表达丰度如图 2 所示 。岭南黄肉 鸡与 AA 肉鸡十二指肠 y + L A T2 mRNA 表达具有 相似的发育性变化 ,且与十二指肠 rBA T mRNA 表 达的发 育模 式类 似 ; AA 肉 鸡十 二指 肠 y + L A T2 mRNA 的表达丰度变化幅度较大 ,16 d 显著高于 2 d 和低于 30 d ( P < 01 05 ) ; 岭南黄肉鸡十二指肠 y + L A T2 mRNA 的表达丰度变化幅度较小 , 各个时期

间差异均不显著 ( P > 01 05 ) 。不同品种肉鸡间 ,AA 肉鸡十二指肠 y + L A T2 mRNA 的表达丰度在各个 时期都高于岭南黄肉鸡 , 其中在 2 、 16 和 30 d 时达 到显著水平 ( P < 01 05) 。 21 2  不同品种肉鸡空肠 rBAT 和 y + LAT2 mRNA 表达的发育性变化   AA 肉鸡和岭南黄肉鸡空肠不同时期 rBA T mRNA 的表达丰度如图 3 所示 。从图 3 可以看出 ,

AA 肉鸡和岭南黄肉鸡空肠 rBA T mRNA 的表达

丰度具 有相 似的 发育模 式 , 且与 十二 指肠 rBA T mRNA 表达的发育模式类似 ;AA 肉鸡 30 d 时空肠 rBA T mRNA 的表达丰度显著高于其它各阶段 ( P < 01 05) ,44 d 显著低于 30 和 58 d ( P < 01 05) ; 岭南

黄肉鸡空肠 rBA T mRNA 的表达丰度 2 d 水平最 低 ,显著低于 16 、 30 和 58 d ( P < 01 05 ) 。不同品种


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肉鸡间 ,AA 肉鸡 30 d 时空肠 rBA T mRNA 的表达 丰度显著高于岭南黄肉鸡 ( P < 01 05 ) , 其它时期差 异不显著 ( P > 01 05) 。

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别 ,且不同于十二指肠和空肠 rBA T mRNA 的发育 模式 。AA 肉鸡回肠 16 d 时 rBA T mRNA 的表达 丰度最低 ,显著低于其它各个时期 ( P < 01 05 ) ,58 d 时显著高于其它各个时期 ( P < 01 05 ) ; 岭南黄肉鸡 回肠 rBA T mRNA 的表达丰度在 2 和 16 d 接近 , 30 d 达到最高 ,显著高于 2 和 16 d ( P < 01 05 ) 。44 d 时又有所降低 ,58 d 回升 。其中 58 d 时与 30 d 接 近 ,且显著高于 2 和 26 d 时 ( P < 01 05 ) 。在不同时 间点 ,不同品种肉鸡间回肠 rBA T mRNA 的表达丰

图 3  不同品种肉鸡空肠 rBAT mRNA 表达的发育性 变化 Fig1 3  Ontogenetic expression of rBAT mRNA in jeju2 num of different broiler breeds

度有较大差 异 ; 2 、44 和 58 d 时 岭 南 黄 肉 鸡 回 肠 rBA T mRNA 的表达丰度均显著低于 AA 肉鸡 ( P < 01 05) ,其中 58 d 时达到极显著水平 ( P < 01 01 ) ; 在 16 和 30 d 时 ,2 品种肉鸡回肠 rBA T mRNA 的 表达丰度接近 。

  AA 肉鸡和岭南黄肉鸡空肠不同时期 y + L A T2 mRNA 的表达丰度如图 4 所示 。岭南黄肉鸡和 AA 肉鸡空肠 y + L A T2 mRNA 表达的发育模式比较接 近 ,且与十二指肠 y + L A T2 mRNA 表达的发育模 式类似 ; AA 肉鸡 y + L A T2 mRNA 的表达丰度在 30 d 时最高 ,44 d 时最低 ,分别显著低于 2 、 16 和 30 + d ( P < 01 05 ) ; 岭南黄肉鸡不同时期 y L A T2 mR2 NA 的表达丰度变化幅度较小 ,16 d 时最高 ,在 44 d 时表达丰度有所下降 。不同品种肉鸡间 , AA 肉鸡 y + L A T2 mRNA 的表达丰度在 2 和 30 d 时显著高 于岭南黄肉鸡 ( P < 01 05) 。

图 5  不同品种肉鸡回肠 rBAT mRNA 表达的发育性变 化 Fig1 5  Ontogenetic expression of rBAT mRNA in ileum of different broiler breeds

  AA 肉鸡和岭南黄肉鸡回肠不同时期 y + L A T2 mRNA 的表达丰度如图 6 所示 。AA 肉鸡回肠 y + L A T2 mRNA 的发育模式与岭南黄肉鸡有较大差

图 4  不同品种肉鸡空肠 y + LAT2 mRNA 表达的发育 性变化 Fig1 4  Ontogenetic expression of y + LAT2 mRNA in je2 junum of different broiler breeds

21 3  不同品种肉鸡回肠 rBAT 和 y + LAT2 mRNA

表达的发育性变化

别 ,且不同于十二指肠和空肠 y + L A T2 mRNA 的 发育模式 ; AA 肉鸡回肠 16 d 时 y + L A T2 mRNA 的表达 丰 度 最 低 , 显 著 低 于 其 它 各 个 时 期 ( P < 01 05 ) ,而 58 d 显著高于其它各个时期 ( P < 01 05 ) ; 岭南黄肉鸡回肠 y + L A T2 mRNA 的表达丰度 ,从 2 ~58 d 逐渐升高 , 其中 30 和 44 d 显著高于 2 d 时 ( P < 01 05 ) ,与 16 d 差异不显著 。58 d 时与 30 和 44 d 时接近 , 且显著高于 2 和 16 d ( P < 01 05 ) 。不 同品种肉鸡间 ,AA 肉鸡回肠 2 d 时 y + L A T2 mR2 NA 的表达丰度显著高于岭南黄肉鸡 ( P < 01 05 ) , 其它时期差异不显著 ( P > 01 05) 。

  AA 肉鸡和岭南黄肉鸡回肠不同时期 rBA T mRNA 的表 达 丰 度 如 图 5 所 示 。AA 肉 鸡 回 肠

3  讨  论

rBA T mRNA 的发育模式与岭南黄肉鸡有较大差

  肉仔鸡生长速度快 , 在性成熟前的生长发育过


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冯定远等 : 不同品种肉鸡肠道 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 表达的发育性变化

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NA 的表达受到发育阶段 、 品种和肠段的调控 。在 肠道后端 ( 回肠 ) 碱性氨基酸转运载体 rBA T ( 系统 b0 , + ) 、 y + L A T2 mRNA ( 系统 y + L ) 表达的发育性变

化在 2 个品种肉鸡间的显著差异可能与肉鸡的生 长、 肉产品品质的差异存在一些关系 ,值得进一步研

图 6  不同品种肉鸡回肠 y + LAT2 mRNA 表达的发 育性变化 Fig1 6  Ontogenetic expression of y + LAT2 mRNA in ileum of different broiler breeds

程中 , 体质量的增长 、 器官的功能 、 营养物质的消化 利用率等都发生很大的变化 , 其中包括氨基酸利用 率的变化 ; 但肠道中氨基酸转运载体在动物不同发 育阶段表达丰度的研究至今还鲜见报道 , 研究发现 肉鸡肠道碱性氨基酸转运载体 mRNA 的表达丰度 在不同时期发生显著变化 。谭会泽等的研究结果表 明 [ 14 ] ,肉鸡碱性氨基酸转运载体 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 在肠道中的肠段特异性为十二指肠 、 空肠和 回肠高于结直肠 ( P < 01 01 ) , 而十二指肠 、 空肠和回

肠的表达丰度没有显著差异 ( P > 01 05 ) ; 并且位于 肠上皮黏膜细胞碱性氨基酸转运载体刷状缘的系统 b0 , + ( rBA T) 和基底膜的系统 y + L ( y + L A T2 ) mR2 NA 在肠道中有类似的肠段特异性 , 显著区别于系 统 y + ( CA T1 和 CA T4) 。作者对肉鸡十二指肠 、 空

肠和回肠 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 的发育性变化 进行了研究 , 结果表明 , 十二指肠与空肠 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 的表达分别具有类似的发育性变 化 ,而在回肠中表达的发育性变化与十二指肠和空 肠有着较大的差异 , 这表明肠道近端和远端在碱性 氨基酸吸收的功能上可能有所差异 。   由于肠道氨基酸转运系统 b0 , + 和 y + L 分别分 布于肠黏膜细胞的刷状缘和基底膜 [ 3 ,6 ,15 ] ,分别负责 从肠腔面转运碱性氨基酸到上皮细胞内和从上皮细 胞内转出碱性氨基酸到血液中 , 两系统相互对应 。 研究发现 ,不同品种肉鸡十二指肠和空肠 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 的表达丰度具有相似的发育性变 化 ,这二者在转运碱性氨基酸的功能上有无直接联 系 ,尚需进一步研究 。回肠 rBA T 和 y + L A T2 mR2 NA 表达的发育性变化在岭南黄肉鸡和 AA 肉鸡间 有显著差别 ,且不同于十二指肠和空肠 ,这表明肉鸡 肠道碱性氨基酸转运载体 rBA T 和 y + L A T2 mR2

究。   Hump hrey 等指出[ 16 ] , 动物组织对于饲料成分 以及营养水平变化的适应性反应主要表现在这些营 养物质转运载体类型和数量的变化 , 日粮的化学组 成可以直接或间接影响基因表达 。肉鸡肠道 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 发育表达的变化趋势与生产性 能指标 ADFI 和 AD G 的变化曲线相吻合 ,30 d 以 前 rBA T 和 y + L A T2 mRNA 的表达显著增加 , 与 生产性能的直线上升相一致 ; 这与先前对 AA 肉鸡 十二指肠和空肠钠葡萄糖转运载体 ( S GL T1 ) [ 17 ] 、 钠 氢交换载体 ( N H E2 ) [ 12 ] 、 寡肽转运载体 ( Pep T1 ) [ 18 ] mRNA 表达的研究结果较为一致 , 表明 rBA T 、 y+ L A T2 和 S GL T1 、 N H E2 、Pep T1 一样作为肠道营

养物质吸收转运的主要功能载体 , 其对日粮营养水 平及换料应激有着相似的反应 。 参考文献 : [ 1 ]  D EV ∗ S R , BO YD C A R. Transporters for catio nic amino acids in animal cells : discovery , st ruct ure , and f unctio n [J ] . Physiol Rev , 1998 , 78 : 4872539. [ 2 ]  HA TANA KA T , HUAN G W , NA KAN ISH I T , et al. Transpo rt of D2serine via t he amino acid t rans2 porter A TB ( 0 , + ) exp ressed in t he colo n [J ] . B io2 chem B iop hys Res Com m un , 2002 , 291 : 2912295.

[ 3 ]  DAN IEL H. Molecular p hysiology of plasma mem2 brane t ransporters for o rganic nut rient s [ M ] ∥ZEM2 PL EN I J , DAN IEL H , ed. Molecular nut rition. Cambridge , M A : CAB I Publishing , 2003 :21290. [ 4 ]  KANA I Y , SEGAWA H , C HA IROUN GDUA A , et al. Amino acid t ranspo rters : molecular st ruct ure and p hysiological roles [ J ] . N e p hrol Di al T rans p l ant , 2000 , 15 ( S6) : 9210. [ 5 ]  V ERR E Y F , CLOSS E I , WA GN ER C A , et al. CA Ts and HA Ts : t he SL C7 family of amino acid t ransporters [ J ] . P f l u gers A rch , 2004 , 447 : 5322 542. [ 6 ]  FU RRIOL S M , C H ILL A RON J , MORA C , et al. rBA T related to L2cysteine t ransport is localized to t he microvilli of p ro ximal st raight t ubules and it s ex2 p ressio n is regulated in kidney by develop ment [J ] . J


58

畜  牧  兽  医  学  报 B iol Chem , 1993 , 268 : 27060227068.

[ 7 ]  PIC KEL V M , N IR ENB ER G M J , C HAN J , et al.

40 卷  

Manual ( 2 nd edition ) [ M ] . New York : Cold Sp ring Harbor Labo ratory Press , 2003.

Ult rast ruct ural localization of a neut ral and basic ami2

[ 14 ]  谭会泽 , 王修启 , 苏海林 , 等 . 鸡不同肠段碱性氨基

no acid t ransporter in rat kidney and intestine [ J ] .

酸转运载体 mRNA 表达的差异性研究 [J ]. 畜牧兽

Proc N atl A ca d S ci , 1993 , 90 : 777927783.

医学报 , 2007 , 38 (3) : 2472252.

[ 8 ]  BRO ER S , WA GN ER C A. St ruct ure2f unction rela2

[ 15 ]  KANA I Y , SEGAWA H , C HA IROUN GDUA A , et

tio nship s of heterodimeric amino acid t ranspo rters

al. Amino acid t ranspo rters : molecular st ruct ure and

[J ] . Cel l B iochem B iop hys , 2002 , 36 : 1552168.

p hysiological roles[J ] . N e p h rolog y Di al ysis T rans 2

[ 9 ]  WA GN ER C A , L AN G F , BRO ER S. Functio n and st ruct ure of heterodimeric amino acid t ranspo rters

pl ant ation , 2000 , 15 ( Suppl 6) : 9210.

[ 16 ]   HU MP HR E Y B D , STEP H ENSEN C B , CAL 2

[J ] . A m J Physiol l ,2001 , 281 : C10772C1093.

V ER T C C , et al. Gluco se and catio nic amino acid

[ 10 ]  BRO ER S. Adaptatio n of plasma membrane amino

t ransporter exp ressio n in growing chickens ( Gallus

acid t ranspo rt mechanisms to hysiological demands

gallus domestics) [J ] . Com p arati ve B iochemist ry an d

[J ] . P f l u gers A rch , 2002 , 444 : 4572466.

Physiolog y.

[ 11 ]  STEIN W D. Channels , carriers , and p ump s : An in2 t roduction to membrane t ranspo rt [ M ] . Academic Press , San Diego , CA , 1990. [ 12 ]  王修启 , 邹仕庚 , 左建军 , 等 . 肉鸡肠道 N H E2 mR2 NA 表达的组织特异性与发育性变化 [J ] . 畜牧兽医

学报 , 2008 , 39 ( 1) : 42247. [ 13 ]  DIEFFENBAC H C W. PCR Primer : A Laborato ry

Part A ,

M olecul a r

& I nte g rati ve

Physiolog y , 2004 , 138 : 5152525.

[ 17 ]  王修启 , 谭会泽 , 束  刚 , 等 . 不同基因型肉鸡十二

指肠 S GL T1 和 GL U T2 mRNA 表达的发育性变化 [J ] . 农业生物技术学报 , 2006 , 14 ( 3) : 3342340. [ 18 ]  王修启 , 邹仕庚 , 左建军 , 等 . 肉鸡肠道 Pep T1 mR2 NA 表达的组织特异性与发育性变化 [J ] . 畜牧兽医

学报 , 2007 , 38 ( 3) : 8142821.

不同品种肉鸡肠道rBAT和y_LAT2mRNA表达的发育性变化  

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