Page 1

维普资讯 http://www.cqvip.com

农 业 生 物 技术 学 报

J o u ma l   ofAg r i c ul t u r a l   Bi ot e c hn ol o g y  2 006 , 1 4 ( 3) :   3 3 4 ̄3 40   ・

研究论文 ・  

不同基 因型肉鸡十二指肠 SGLT1和 GLUT2  mRNA表达 的发育性变化 半   王修 启,谭 会泽 ,束

刚,苏海 林,代 发 文,冯定远 

( 华南 农 业 大 学 动 物 科 学 学 院 , 广州 5   1   06 4 2)  

摘要 :选用遗传背景相同的 l   d父母代雄性 Ar bo rAc r e( AA) 和岭南黄 肉雏鸡各 1 20羽 , 饲养 58   d, 统计 其生 产性 能并 在不  同 时 间采 集 十 二 指 肠 样 品 , 采 用 相 对 定 量 RT— PCR方 法 研 究 不 同 基 因 型 肉 鸡 在 不 同 时 期 十 二 指 肠 钠 葡 萄 糖 共 转 运 载 体 1 ( s o di —   um/ gl u c os e   c ot r a ns po r t e r 1 , SGLTI )和 葡 萄糖 转 运 载 体 2( g l uc o s e   t r a ns p or t e r 2,GLUT2 )mRNA 的 表达 丰度 。结 果 显 示 :① AA 鸡  每周 平 均 日采 食 量 ( ADFI ) 和 平 均 日增 重 ( ADG) 均 显 著 高 于 黄 羽 肉鸡 ( P<O. 05 ) 。 ② AA鸡 和黄 羽 肉鸡 SGLTI   mRNA 表 达 , 从 2-  30   d不 断 升 高 , 4 4  d下 降 , 55   d回升 ; 不 同 基 因型 之 间 SGLTI   mRNA 丰 度 比较 , AA 鸡 均 高 于 黄 羽 肉鸡 , 且在 l 6和 30   d差 异 显  著( P<O. o 5) 。 ③AA 鸡 和 黄 羽 肉 鸡 GLUT2mRNA 的表 达 在 2~3 O  d呈 现 升 高 的趋 势 , 且 l 6和 3 0   d均 显 著 高 于 2   d ( P< 0 . O5 ) ;  

AA鸡 44和 58   d   GLUT 2  mRNA的表达 显著低于 l 6和 3 0   d( P<0 . 05 ) ,而黄羽 肉鸡 GLUT2mRNA的表达 , 58   d显著 高于 2、 l 6   和 30   d ( P<0. 05 ) ; 不 同基 因 型 之 间 GLUT2   mRNA 丰 度 比 较 ,l 6和 30   d   AA 鸡 显 著 高 于 黄 羽 肉 鸡 ( P<O. 05 ) , 5 8   d时 黄 羽 肉鸡  

GLUT 2mRNA的表达显著 高于 AA鸡( P<O. 0 5) 。以上结果说明 , AA鸡生产性能显著高于黄羽肉鸡 , 营养水平的改变对动物生  产性 能有 较 大 影 响 , AA 鸡 的反 应 比黄 羽 肉鸡 更 敏感 ; 不 同基 因型 肉鸡 十 二 指 肠 SGLTI   mRNA 的表 达具 有 相 同的 发 育 模 式 , 且  与 生 产性 能 的 表 现 相 一 致 ; 更 换 饲 料下 调 SGLTI   mRNA 的表 达 , 提示调控 S GLT1的 表 达 , 可 以 改 善 生 产 性 能 ;生 长 发 育 后 期 

黄羽肉鸡 GLUT2mRNA的表 达模式 , 是其有别 于 AA肉鸡的重要特征 。   关键 词 : 肉鸡 ; 十二指肠 ; SGL丁JmRNA; GL【 , 丁2mRNA; 发 育 性 表 达  中 图 分类 号 :Sl88  文 献 标 识 码 :A

文章 编 号 :l 006一l304( 2006) 03— 0334— 07 

Ont ogenet i c  Expressi on  of  SGL  T1  and GL  UT2  m RNA  i n  Duodenum   of  Di fer ent   Genot ype  Broi l er   Chi cken  W AN G  Xi u— qi ,TAN Hui —ze,SHU  G ang,SU  Hai —l i n,DA I   Fa—wen,FEN G  Di ng— yuan 

( Col l e ge   ofAni malSci ence,Sout hChi naAgr i cul t ur alUni ve r si t y,Gua ngzhou510642,Chi na )  

^h掀

I n or der   t o i nve s t i gat e  t he  ont ogenet i c  e xpr es s i on  of  s odi um/ gl ucos e  cot r ans port e r1 ( SGLTI) and gl uc os e I r a ns por t e r 2 

( GLUT2)mRNA  i n   d u o de n u m  o fdi fe r e n t   g e no t y pe   b r oi l e r   c hi c ke ns ,1 2 0   l 蛳

l d   pa r e n t al   ma l e   Ar b o r   Ac r e( AA)b r oi l e r   c h i c k e n s   nd a  

1 20pa r ent almal e   yel l ow  cover   ch i c ̄ wer e  r a ndoml ydi vi dedi nt o  4  r epl i cat es, r es pect ive l y. The  pr oduct i vep er for ma ncewasr ec or de d  f r om  a y 1 d  t o  58   d.   On  2, 1 6, 30, 44 a n d  58  d, duo d enu m  s a mpl es   wer e   col l ect ed. T h e  mRNA  e xpr es s i on  abunda nces   ofSGLTI   n d  a

GLUT2atdi fer entde vel opme nt al   s agewer t e det er mi nedbyr el at ive  qua nt it at iveRT- PCR.I twa sf ou n dt hat :(1)T h e  a ve r age  dai l yf ee di n-   t a ke( ADFI )a n d  aver age   da i l y  gai n( ADG)ofever y  wee k  ofAA  ch icke n  we e  r igher h   t ha n  ha t t   ofye l l ow  cover   chi cke n( P<o. 05),t he   cha nge  cur ve  ofeve r y  week  ADFI   n d  a ADG  wer e  s i mi l a r   bet ween  he  t w o  t ge not ypes .( 2)Ont ogenet ic   expr es s i on  mo d el   of   SGLTI  mRNA  wer e   cons i s entb t et w e en  AA  br oi l r  e n d  a yel l ow  c ove r  ch icken. T h e  SGLTI   m RNA  abu n dance   n  i he t   w o  t ge not ypes   we e  r ncr i ea s ed f rom 

day  2  o  t day  30,t he n  de cr ea se d  on  ay  d 44  nd  a nc i r ea sed  a gai n  on  ay 58.T d he  SGLTI   mRNA  e xpr es s i on  l e ve l   ofAA  ch icke n  was   ig h he r  ha t nt hatofyel l ow  c overchi cken  n dt a he   di fe ences r   wer e  si gni ica f n tond a y  16   n d  a 30( 阳 O. 05) .( 3)GLUT2  mRNA  expr es si on  oft he   w o  t

ge not ypes   t r endedt o  ncr i eas e  f rom d ay2  t o  day  30,  a ndt he   a bu n danc e  ofd ay 1 6  nd  a 30  we e  r ig h he rt ha nt hat   ofd ay  2  t  a s i gni ica f nt   l e ve l   ( P<o. 05) .Ond a y44a n dd a y  58,t heGLUT2mRNA  e xpr es s i onofAA br oi l r wer e el owe rt ha nt ha t  ond a y  16a nd  30( P<o. 05) ,wh il et he   expr es si on  ofyel l ow   COVe r  chi cke n  wa s  goi n g  on  nc i r ea si ng f i' om   day  4  o  t day  58  a n d  GLUT2  m RNA   e xpr e ss i on  a bu n dance  ofday  58  

wa s  ig h he rt ha n  ha t t  on  ay  d 2, 1 6  nd  a 30;Compa r ed  GLUT2  mRNA  expr es s i on、 vi m  ye l l ow  cover   chi c ke n,AA  br oi l r  e wa s  hi he g r   on  ay  d

蟊 

r. 国家重点基础研究发展规划( 9 7 3 )  ̄ 目( - No. 2 0 0 4 CB1   1 7 5 0 1 ) / F l I   J  ̄ - 东省 自然科学基金项 目( No . 0 5 3 0 08 3 6 ) 资助 。  

作 者 简 介 :王修 启 (1 968 ~), 男 ,在 站 博 士 后 , 副研究员。  

” 通讯作 者。Aut horf or   c or r es pon de nce .教授 , 博导 , 主要研究方 向: 动物分子营养与营养修化生理。E- ma i l :<f e ngdy@s ca u. ed u- c D  ;   <qi di 2936@1 26. c om>.   收稿 日期 : 2005. 0 9.1 9 接受 日期 : 2005-ll - 24 


维普资讯 http://www.cqvip.com

第 3期 

王修启等: 不同基因型肉鸡十二指肠 SGLTI和 GLUT2  mRNA表达的发育性变化 

1 6  a nd  30( P如 . 05) ,whi l e  on  day  58  yclow  COVe"c hi cke n  GLUT2mRNA  c ̄

33 5  

i on  was   b _ i ghcrt han  t ha t   ofAA  c hi cken.Thes e  es r ul s  t

demons t r at et hat : I 1  Pr oduct i ve  per f or mance  ofAA bmi I c r   chi cken  exc .  ̄l l syclow  cove I ' "c hi cken. The  a l mmt i onofnut r i t i onall evelhas   gr e atefec tont he   per f or mance   andt heAA bm' derchi c keni smor e  s ensi ivet t hanyel l ow  cove ' I " chi cken. 21   SGLTImRNA  e xpr e s si onof   t het wo  ge not ype  hast he   sa me  ont ogcnct i cmodeli n  duodenum a n dpa r al l el d wi e t ht h e  pr oduc ive  t per for manc e. To  cha nge  di et   c an  de—   cr eaS e  he t   expr es si on  ofSGLT1  mRNA. i ndi c at i ngt hatt he   pr oduct ive  per f or mance  c an  bc   i mpr ove d by  up- egul r a  ̄ g  ofSGLTI   expr es -  

s i on.3)GLUT2  mRNA  expr es si on  ont ogenet ic  model   ofl a t e— ini f s hi ng  yel l ow  cove . 1 "chi c ke n  s  i di s t i nct   it w h AA  chi cken,a nd  i t s   me cha-   ni s ma n d  efectonpr oduct ionneededf urt he r  s t udy.  

K哆  

br oi l er   chi cken;duode num ;SGLTI  mRNA;GLUT2  mRNA;ont ogenet i c   expr es si on 

动物 的生 长源 于营养 物质 的 吸收和 利用 ,其 中 

萄糖 、 半 乳糖 和果 糖 , 其 中葡 萄 糖 占 80% ( 翁梅倩 ,  

学院畜牧研究所祖代种鸡场 , 快大型 , 8周龄上市体  重 1. 5   k 肉雏鸡 各 1 20羽 , 按 照平 均 体重 一 致 的原  则分 为 4个重 复 , 每个重 复 30只鸡 。试验 初 始 , AA 

1 999), 禽 类循 环 中 的葡萄糖 占各种 单糖 的 比例超 过 

鸡 和黄羽 肉鸡 平均 重量接 近 , 分别 为 40. 7和 40. 1   g。  

98% ( Whi t t ow, 1   999)。  

1. 1. 2 日粮 组成 及 营养 水 平

养 分 吸收是 基础 。动 物通 过肠 粘膜 吸收 的单糖 为葡 

参 照 NRC (1 994) 和 

肠 道负 责 吸收转运 葡 萄糖 的载体 主要 是钠 葡萄 

国 家标 准 (1 986)0~8周 龄 肉鸡 营 养 需 要 设 计 饲料 

糖 共转运 载体 1 ( s odi um/ gl ucos e  cot r ans por t e r1.  

配方 ,日粮 组成 和 营养水 平见 表 1。于试验 31   d开始 

SGLT1 )和 葡萄糖 转运 载体 2 ( gl ucos e   t r a ns por t e r 2.  

采用 逐 步换料 的方 法 , 至 34  d结 束 全部 更换 为后期 

GLUT2) 。在 葡萄糖 的 吸收转 运过 程 中 , 起 主导作 用 

日粮 。  

的是 SGLT1,其 转 运 葡 萄 糖 是 一 个 间接 消 耗 ATP 

1. 1. 3 饲 养 管 理 与免 疫

试 验 在 华 南农 业 大 学 动 

的逆浓 度梯 度 主动运输 过程 ,同时 SGLT1还 可 以通  物科学 学 院种鸡 场进 行 , 粉 料饲 喂 。红外 取 暖 ,自由  过 激活 蛋 白激酶 C ( PKC)依赖 性 通路 调 节 GLUT2  饮 水 和采食 , 人工 持续 光 照 , 育雏 温 度按 照生产 程序 

对 葡 萄糖 的转 运 ( Wr i ght ,2001 ;Re us s , 2000;Kel l e t.  

进行 , 常规 免疫 。  

2001 ) 。Gar r i ga   et   a 1 . ( 2000) 研 究表 明 , 鸡 小肠 对 甲基 

1. 1. 4 生产 性 能统 计

每天 记 录鸡 只死 亡 情 况 , 每 

D.葡 萄糖 苷 的最 大转 运 速 度 与 SGLT1蛋 白的 密 

周 按重 复称 重和 记 录饲料 消耗 ,称 重前夜 开 始禁食 

度 具 有 良好 的 相 关 性 ,葡 萄糖 吸 收增 加 的原 因 是 

1 2  h,次 日早 晨 空腹称 重 ,计 算 每周 平 均 日采食 量 

SGLT1载体 数量 的增加 。Khan  et   a1 . ( 2000) 报道 , 哺 

( a ve r a ge   dai l y  f e ed  i nt a ke,ADFD和平 均 日增 重 ( aver .   乳 期 、 断 奶 和 成 年 期 不 同 发 育 阶 段 的 大 鼠 ,其  age   ai d l y  gai n, ADG) 。   SGLTI的表达 不 同。Bar f ul l   et   a 1 .( 2002) 研究 了 白色  1. 1. 5 组 织 采样 分别 于 2、1 6、 30、 44和 58日龄 .  

来航 鸡 SGLT1的发育 性表 达 。有关 肉鸡 SGLT1和 

每组 取接 近平 均体 重 的鸡 ,每重 复 2只共 80只 , 断 

GLUT2发 育模式 的研 究 ,尚未 见到 相关 的报道 。  

颈 宰杀 , 宰前 不禁 食 。 分 离肠 道 , 沿 纵 向剖 开 , 用 4℃ 

Ar bor   Ac r e( AA)肉鸡 以生 长速 度 快 , 饲 料 转 化 

预 冷 的 PBS缓 冲液 冲洗 , 吸水 纸 吸干 。分 别 从 十二 

率 高著称 。 黄 羽 肉鸡 因其 肉质鲜 美 , 适 应性 和 抗逆 

指肠 u 状弯 曲的起 始 处 向下取 3   c m 肠 段 ,作为 十 

性强 具有 广 阔的市场前 景 。本 研究 选用 遗传 背景 相 

二指 肠样 品 。放人 1. 5   mL离 心 管 中 ,置 液 氮速 冻 ,  

同的 1   d父 母代 雄 性 AA 和 岭南 黄 肉雏 鸡 ,进 行两 

70℃冷冻 保存 。  

阶段饲 养 , 观察不 同基 因型 肉鸡 的生产 性 能 。 分 别 于 

1. 2 十二 指肠 SGLT1和 GLUT2mRNA的 相对 定 

2、1 6、 30、 44和 58   d采 集两种 肉鸡 十二 指肠 样 品 , 运 

量 RT. PCR 

用 相 对定量 RT. PCR方 法研 究不 同基 因 型 肉鸡 十二 

1_ 2. 1   样 品 总 RNA 提 取 和 RNA 电 泳

采 用 Tr i .  

指 肠 SGL丁J和 GLUT2mRNA 表达 的发育 模 式 , 及  z o l( 北京赛百盛基因技术有限公 司)一步抽提法提  其 与 动物生 产性 能的关 系 ,为进 一步 调控 肉鸡 生产  取 组织 样 的总 RNA,紫外 比色法 测定 总 RNA的浓  提 供理 论依 据 。  

度 和纯 度 ( Eppe ndor f  Bi oPhot omet e r   260  nm) 。 用 

1 材 料 和 方 法 

1 . 4%甲醛 变性琼 脂 糖凝 胶 电泳 ,根 据 28Sr RNA 和  18Sr RNA 的灰度 比评 价 RNA 的质量 。  

1. 1   实验 动物 与样 品采 集 

1_ 2. 2 反转录

1. 1. 1 实验 动物

选 用 遗传 背 景相 同 、同批 次 、 发 

RNA进 行反 转 录 。建 立 各 样 品 RNA 的 cDNA ( RT 

分别 准确量取 2   g各 样 品 的总 

育 正常 的 1   d雄 性 AA父 母代 ( 购 自广 东穗屏 科宝 种 

pr oduc t ) 。反 转 录反 应 体 积为 20 L,其 中含 Ol i go 

鸡 场) 和 1   d雄 性 岭南 黄 父母 代 ( 购 自广 东省 农 业科 

dT(1 8) 5   I . t moUL引 物 ,1   mmol / L  dNTP( J ̄京 赛 百 盛 


维普资讯 http://www.cqvip.com

33 6  

农 业 生 物 技 术 学 报 

2 00 6 正 

表 1日粮 组成 和营 养 水 平 

基 因技 术 有 限公 司), 20   u  RNA 酶 抑制 剂 ( RNas e  i n—  

Tabl e  1  Di e t   composi t i on  and  cal cul at ed  nut r i ent s   l evel  

hi bi t or 。 Takar a,大 连), 200   U反转录酶 ( MMLV  RT,  

组分 I ng r edi e nt s  

含量 / % Cont ent   0~30  d 

31-58  d 

Pr ome ga), 4  I x L  5xRT  Buf f er( 含 250  mol / L  Tr i s — HCI   ( pH  8_ 3) ,50   mol / L  MgCI 2 ,250   mol / L KCI ,50  mol / L 

DTT.2. 5   mol / L  Sper mi di ne )。样 品总 RNA、 Ol i g o  dT 

(1 8) 和 dNTP在 反转 录前 70℃变性 5   mi n, 冰上 放置 

5   mi n,再 加 入 其 余 试 剂 ,   昆匀 后 于 42℃反 应 60  mi n, 95℃变 性 5   mi n。反转 录 产物 一20℃保 存备 用 。   1_ 2. 3  目的 基 因引 物设 计 和 PCR反 应 条件

PCR 

引 物采 用 Pr imer软 件设 计 ,由北 京赛 百盛 基 因技 术  有 限公 司合 成 ,引物 序列及 参数 见 表 2。 以 / 3 一 act i n  管 家基 因作 为 内标 ,对 SGLT1和 GLUT2进 行相 对  定 量分 析 。 PCR反 应 在 MJR  PTC一 200   PCR仪 上 进  行。  

内标 基 因 / 3一 act i npr ime r s( 10  I xmol / L)和 Com—  

pet i me r s(1 0  i xmol / L)参 照 Di e f f enbac h( 2003)的 方 

法, 将/ 3一 act i n  Pr ime r s的 3’端 进 行修 饰 ( 北 京赛 百 盛  基 因技 术 有 限公 司),使其 在 PCR 过程 中只 能 与模  板结 合 而 不 能 延伸 ,得 到 / 3. a ct i n  Compet i mer s。将  3一 / act / n  Pr imer s和 Compet i me r s均 稀 释 至 l   0 ̄mol / L 

备用 。   PCR反应 条件 :采用 单 管法 进 行 PCR扩 增 ,以  混 合样 ( 待 测样 品等 比例混 合 ) 对 PCR反应 条 件 、 循  提 供 至 每 千 克全 价 料 : 铜, 5. 00mg;铁 , 69. 0 0mg;锌 , 8 4. 00mg;  

环 圈 数 以 及 目的 基 因 SGLT1、 GLUT2和 内标 基 因 

锰, 98. 6mg;碘 , 1. 1 4mg;硒 , 0. 30mg;维 生 素 A,1 5000I U;维 生 素 

3一 / act i n的引 物浓 度 等 进行 优 化 。SGLT1和 GLUT2 

D  , 3000   I U;维 生 素 E, 25. 5   mg;维 生 素 K1 , 2. 1   mg;维 生 素 B_ ’ 2. 4  

RT— PCR 优 化 条 件 : 25   L的反 应 体 系 中含 有 2   L 

mg;维 生 素 B  , 9   mg;维 生 素 B , 5  1  mg;维 生 素 Bt 2 , 0. 02  mg;泛 酸 

反转 录产 物 , 2. 5   L 1 0×PCR  Buf f er , 1. 5  mmol / L 

钙 ,1 2mg;烟 酸 , 48mg;叶酸 ,1. 2mg;生 物 素 , 0. 06mg; 洛 克 沙胂 ,  

MgCI , . 0. 2  mmol / L  dNTP, 0. 8 ̄mol / L 目 的 基 因 的 

5 0  mg; 盐霉素 , 90  mg。  

上、 下游引物 , 1. 2 L/ 3一 a c湘 Pr imer s( GLUT2为 1. 0 

Suppl i ed  per  kg f eed:Cu,5. 00  mg;Fe,69. 00  m g;Zn,84. 00 mg;I Vl n,  

i xL) ,0. 8  i xL( GLUT2为 1 . 0  i xL)Compe t i me r s ,0. 5U 

98. 6 mg;I.1. 14  mg;Se,0 30 mg;VA,15000  I U;VD3,3000  I U ;VE,  

Ta g  DNA聚合 酶 ( Fer ment as ,Li et uva)。PCR反应 条 

25. 5  m g;VK3 ,2.1  m g;VBI ,2. 4  mg;VB2 ,9 mg;VB6 ,5. 1  mg;vBI 2 ,0. 02 

件: 94℃预变 性 5   mi n; 94℃变性 30   S ,57℃退 火 30 

mg;Cal pan.1   2  mg;Ni acin,48  mg;Fol i c aci d,1. 2 mg;Bi ot in,O. 06  mg;  

S 。72℃延 伸 50  S ,共 25( GLUT2为 26) 循环 ; 72℃延 

Roxarsone,50  mg;Sal inomyci n,90 mg 

伸 1 0  mi n。  

表2  SGLT1、 GLUT2目的 基 因 和 f 3. a ct i n内标 基 因引 物 参 数  Tabl e   2 Par a me t er s   ofpr i me r   pai rs   f or   SGLT1,GLUT2  n d  - a act i n  genes  

46^   5 

Sense 

( AJ 236903   Ge nBa nk)  

534~515 

Ant i sense 5' - CAGTGACAGCATCTCGGAAG一3 

GL 

ll 26~l1 43 

Sense 

( Z22932   GenBa nk)  

1567-1548 

Ant i sense 5' - CCTTCGTTTCGGGTACT丌 G一3’  

口一 a cOn  

83~1 01  

Sense 

(L08I65Ge nBan k)  

373~355 

Ant i sense 5’  

SGLTJ  

5' - TGGTTGTTCTAGGATGGGTG 一3’  

5乙ACCATTGGCGTTGGAGTG一 3’  

5’ . ]  

GTTGAC一 3’  

GGGGCTA一3  

489 

442 

29l  


维普资讯 http://www.cqvip.com

第 3期 

王修启等: 不同基因型肉鸡十二指肠 SGLT1和 GLUT2mRNA表达的发育性变化 

电泳 及 灰 度 分 析 取 l 0  L  PCR产 物 在 2. 0% 

3 37  

异显著 ( P<0. 05) 。  

Et Br  ̄ 色 的琼 脂糖 凝胶 上 电泳 。 图象处 理及 灰度 分  析 用 Lab  Wor ks   I mage   Ac qui s i t i on  a nd  Ana l ys i s   Sof l-   war e   4. 0( Ul t r a- Vi ol et   Pr oduc B  Lt d. ,Cambr idge,UK)  

进行 , 根 据 目的基 因 和 』 B. a ct i nPCR产 物 的灰 度 比 ,   确 定 样 品 中 SGLTI和 GLUT2mRNA 基 因表 达 的  相 对含量 。每 一基 因的检 测 , 其 RT. PCR过程 至少 重  复 2次 。   1. 3 数据 分析 

实验 数 据 以平 均 数 ±标 准 误 (  

表示 , 用 

SPSS1   1 . 5统 计 ,差异显 著性 检验 用独 立样 本 t检验 

和单 因子 方差分 析( one. wa y  ANOVA),以 Dunca n方 

90 

法进行 多重 比较 。  

董 

2 结 果 

60  、 45  1 -l  

2. 1   不 同基 因型 肉鸡每 周 ADFI和 ADG 

誉3 0  

不 同基 因型 肉鸡 各周 ADFI结果 见 图 1 ,a。AA  鸡 和黄 羽 肉鸡 ADFI的变 化 曲线 具 有 相 同 的趋 势 ,  

l5 

从 第 1周 到 第 4周 呈 直线 上升 ; 第 5~6周 与第 4周 

0  O 

相 比差 异 不 大 , 呈 现 为 平 台期 ; 第 7~8周 与第 6周 

l  

2  

4 

5 

6 

7  

8 

9 

周龄 W ee k s  

相 比 ,表现 为快 速增 加 的趋势 。从 整 个生 长发 育 过 

程 来看 ,AA鸡 各周 ADFI均高 于 黄羽 肉鸡 , 不 同基 

3 

图 1 .AA鸡 和黄 羽肉鸡( Y) 每周平均 日采食量 (ADH )( a ) 和 

因型之 间差 异极显 著( P<0. 01 ) 。  

日增 重( ADG) ( b) 变化 曲线  

不 同基 因型 肉鸡 各 周 ADG 结果 见 图 1, b。AA  Fi g. 1.The  cur ve  of   aver age   dai l y  f eed  i nt ake( ADF1 )(a)and  dai -  

鸡 和 黄 羽 肉鸡 ADG 的 变化 曲线 具 有 相 同 的趋 势 ,  

l y  gai n( ADG) ( b)ofever y  week  ofAA  chi cken  and  yel l ow 

从 第 1周 到第 3周 呈 直 线 上升 ,第 4周 速度 减 缓 ;  

cover( Y)c hi cke n 

AA 鸡第 6周 ADG 为 58. 6  g,比第 5周 的 62. 1   g降  低 5. 64% ,直到 第 7周才 恢 复到 略高 于第 5周 的水 

2. 3 不 同 基 因 型 肉鸡 十 二 指 肠 G£ - U丁2  mRNA表 

平( 63. 7   g1; 第 7~8周 与第 6周相 比 , 表现 为快 速 增 

达 的发 育性 变化 

不 同基 因型 肉鸡 十二 指肠 GLUT2  mRNA表 达 

加 的趋 势 ;黄羽 肉鸡 4周 以后 各 周 ADG呈 缓 慢 上  升趋 势 。就整 个生 长发 育过 程 而言 , AA 鸡 各 周 

的发 育性 变化 结果 见 图 3。  

ADG均高 于黄 羽 肉鸡 , 不 同基 因型之 间差 异极 显 著 

AA 鸡 和 黄 羽 肉 鸡 GLUT2  mRNA 的 表 达 在 

f P<0. 01 ) 。  

2~30  d都呈 现 不 断升高 的趋 势 , 且 l6和 30  d均 显 

2. 2 不 同基 因 型 肉鸡 十 二 指 肠 SGLT1  mRNA 表 

著 高于 2  d( P<0. 05)。30  d以后两 者 的发 育 模式 完 

达 的发育 性变 化 

全不 同 , AA鸡 44和 58  d显 著低 于 l 6和 30  d( P< 

不 同基 因型 肉鸡 十 二指 肠 SGLTI   mRNA表 达 

的发 育性 变化结 果见 图 2。  

0. 05) ,而 黄羽 肉鸡 GLUT2mRNA 的 表达 则 随 E t龄  增 加继 续 提 高 , 直 至 58   d表达 量 达 到 最 高 , 显 著 高 

和 黄羽 肉鸡 SGLTI   mRNA表 达具有 相 同 

于 2、 l 6和 30   d( P<O. 05)。不 同基 因型之 间 GLUT2 

的发 育趋 势 ,从 2到 30   d不 断升 高 , 44  d下 降 , 55   d 

mRNA 丰 度 比较 , 2、l 6和 30  d  AA 鸡 高 于 黄 羽 肉 

回升 ; 两 品种 2  d的 SGLTI   mRNA 丰度 均显 著 低 于 

鸡, 其 中 2  d差异 有 接 近显 著 的趋 势 ( P- -O. 07), 16和 

l6和 30  d  f P<0. 05) 。AA鸡 44  d的 SGLTI   mRNA 

30  d差 异 显 著 ( P<0. 05); 44  d两 品 种 间 GLUT2 

丰度 显 著低 于 l 6 和 30   d( P<0. 05) ,58   d的 SGLTI  

mRNA 表 达 差 异 不 大 , 55  d时 黄 羽 肉 鸡 GLUT2 

mRNA表达 水 平显著 低于 30  d( P<O. 05)。黄羽 肉鸡  mRNA表达显著高于 AA鸡( P<0 . 05 ) 。   l 6、 30、 4  4和 58   d之 间 SGLTI   mRNA 的表 达 差异 

讨论  

不显 著 ( P>0. 05) 。不 同基 因 型之 间 SGLTI   mRNA 

丰度 比较 , AA鸡 均 高于黄 羽 肉鸡 ,且 l 6和 30  d差 

动 物 生 长是 遗传 ( 基 因 型)、营养 和环 境 相互 作 


维普资讯 http://www.cqvip.com

3 38  

农 业 生 物 技 术 学 报 

M A2 

Y2 

A16  Y 16  A30 

2 00 6 钽 

Y30  A44  Y44 

A58  Y58  M . X 

bp  2000  1000  500 

SGLTi 

250 

口-acti n  A 

Z西墨  口8。磕   Z晤茸 r h, 工0∞  1 

1 

1 

O 

O 

O 

O 

4 

2 

O 

8 

6 

4 

2 

2 

O  

16  Age /d 

3O 

44 

58 

B 

图 2.AA 鸡 和 黄 羽 肉鸡 十 二指 肠 SGLTI   mRNA 表 达 的发 育 性 变 化  Fi g.2.Ont ogenet i c  expr ess i on  of  SGLTJ  mRNA  i n  duodenum  ofAA  and  yel l ow  cover   c hi ckens  

A. 目的基 因和 / 3 一 a ct i nmRNART— PCR产物代表性琼 脂糖凝胶 电泳 图。M, mar ke r ( DL20 00) ;Mi x,混合样 。A2、 A1 6、 A30、 A44和 A58分别代  表 2、 l 6、 30、 44和 58   d从 鸡样品。Y2、 Yl 6、 Y30、 Y44和 Y58分别代表 2、 l 6、 30、 44和 58   d黄羽肉鸡样品。   B.不 同基 因型 肉鸡不同 日龄十二指肠 目的基 因 mRNA表达的相对丰度统计结果 。AA, AA肉鸡 , Y,黄羽 肉鸡 。   无相 同字母者( 大写字母 , AA肉鸡 ; 小写字母 , 黄羽 肉鸡), 表示 同一基 因型不 同 日龄之间差异显著( P<0. 05) 。+同一 日龄不 同品种间差异显著  f P<O. 05)n=8。  

A. Repr es e nt at i ve   a gar os e   ge l s   el e ct r o pho r es i s   phot o  oft ar ge t   ge ne   a nd/ 3- ac t i n  mRNA  RT— PCR  pr oduc t s .M , ma r ke r( DL2000) ; Mi x, mi xt ur e.A2,   A1 6,A30,A44a n dA58 r epr e sent  2,16,30,44 a n d  58  d  sam pl es   ofAA  chi cken,respect i vel y.Y2,Y16,Y30,Y44a n dY58r e pres ent   2,16,30,4  

a nd  58 d  s ampl es   of   yel l ow  cov er   chi cke n,r es pec t i ve l y.B.St at i s t i c al   r e s ul t   of   SGLTI   mRNA  l evel   expr e s s ed   a s   rbi a t r ar y  uni t s   t o/ 3一 ac t i n  mRNA .AA,   AA  c hi c ken,Y,yel l ow  cove r   chi cke n W i t hout   t he   s ame   l e t t e r s( c api t al   l e te r s   f or   AA  nd a   l owe r   c as e  l eter s  f or   Y)i ndi c at e   s i g ni ic f nt a   di fer enc e   bet we e n  days   i n   t he   s ame   g enot ype   f  k0. 05) .  i ndi ca t i ng   di fe r en ce   bet we en  AA  a nd  Y  a t   t he   s ame   age   <0. 05) .n=8.  

bp 

M  A2 

Y2 

A16 

Y16 

A30  Y30  A44 

Y44 

A58 

Y58  M i x 

2000  1000  500 

GLUT2 

250 

口- act in 

1OO  A  1, 4  1. 2  1  O  O 8  O. 6  O 4  O 2  O 

2 

16 

30 

44 

58 

B 

Age/d 

图 3. AA 鸡 和 黄 羽 肉 鸡 十二 指 肠 GLUT2   mRNA表 达 的发 育 性 变 化  Fi g.3.Ont ogenet i c  e xpr ess i on  of  GLUT2  mRNA  i n  duodenum  ofAA  and  yel l ow  c over   chi cke ns  

A 和 B注 释 同 图 2。Not esofAa n dBs eeFi g. 2.  


维普资讯 http://www.cqvip.com

第 3期 

王修 启 等 : 不 同基 因型 肉鸡 十二 指肠 S GLT1和 GLUT2mRNA 表达 的 发育 性 变化 

33 9  

用 的结果 ,其 中遗传 表现 出来 的生 长潜力 具 有决定 

和 无 乳 糖 配 方 乳 喂 养 , 与 母 兔 乳 喂 养 组 相 比 对 

性作用 , 尤 其在 营养 和环境 条件 相 同时 , 这 种潜 力 的 

SGLTI  mRNA 的表达 没有调 节作 用 。我 们 的研究 结 

表 现更 为 明显 。本 实验 中 AA 鸡 和 黄 羽 肉鸡 ADFI  

果 支 持 Fe r r a r i s的 观 点 ,但 提 示 肠 腔 日粮 信 号 对 

和 ADG 的变 化 曲 线 为 上 述 理 论 提 供 了有 力 的 佐 

SGLTI  mRNA 表 达调 控 及 生 产性 能 的 影 响 可 能 存 

证。 营养 水平 的改 变和换 料 应激 , 会对 动物 生产性 能 

在滞 后效应 。 本 研究 表 明 , 不 同基 因型 肉鸡 十二指 肠 

带来 负效 应 ,本实 验 中从 31   d开 始进 行 逐 步换 料 ,  

SGLTI  mRNA 的表 达具 有相 同 的发育 模式 , 且与 动 

至 34   d完全 更换 为后 期 日粮 , 结 果导 致两 种 基 因型 

物生 产性 能 的表 现相 一 致 ; 换 料下 调 SGLT1  mRNA 

肉鸡 在第 5~6周 ADFI和 ADG均 呈 现 为 平 台期 ,  

的表 达 , 提 示 调 控 SGLT1的表 达 , 可 以 改善 生 产性 

AA鸡 在第 6周 的 ADG 甚 至 比第 5周 降低 5. 64% ,  

能。  

说 明其 对这种 应 激 的反 应更 为强 烈 。 本 研究 表 明 , 相 

Bar f ul l   et   a J .( 2002) 报 道 ,采用 同一 日粮 饲 喂 的 

同营养 水平 下 , AA鸡 生 产性 能 显著 高 于黄 羽 肉鸡 ,  

白色来 航公 鸡 , 其 2  d和 5周 SGLTI   mRNA 的表 达 

营养 水 平 的改 变 对动 物 生 产 性 能 有 较 大 影 响 , AA  量 非常 接 近 , 差 异不显 著 。我们 的研 究结 果 表明 , 饲  鸡 的反 应 比黄羽 肉鸡更 敏感 。  

喂前 期 日粮 的 AA 鸡 和 黄 羽 肉鸡 ,两 品种 2  d的 

葡 萄糖是 真 核生物 主要 的能量 来源 ,其 在肠 道 

SGLTI  mRNA 丰 度 均 显 著 低 于 1 6和 30  d f P< 

的吸收 是机体 细胞 利用 的前提 。葡萄糖 在肠 道 的吸 

0. 05)。推测 肉鸡 和蛋 鸡( 来航 鸡),由于基 因型 和生长 

收 由 SGLT1和 GLUT2共 同完 成 ,其 中 SGLT1起 

速 度不 同 ,其 SGLTI   mRNA丰 度 达 到差 异 显著 水 

着决 定性 的作用 。Cher buy  eta 1 .( 1 997) 曾报 道 , 新 生 

平 的时程 也不 相 同 。不 同基 因型之 间 SGLTI   mRNA 

仔 猪 哺乳 期 , 刺 激 空 肠 前段 而 非 后 段 GLUT2, 导致 

丰 度 比较 ,虽 然 只 有 16和 30   d时差 异 显 著 ( P< 

葡 萄糖 吸收 的增 加 ,认 为肠道 葡萄 糖 吸收具 有位 置 

0. 05), 但 生长 发育 的全 过程 AA 鸡均 高 于黄羽 肉鸡 ,  

特异性 , 即主要 在空 肠前 段被 吸收 。王 修启 等( 2005)  

这 与 AA鸡 各 周 的生 产性 能 指 标 ADFI和 ADG均 

报道 ,日粮 添加 木 聚糖酶 , 可 以上调 30  d  AA鸡 十二 

显 著高 于黄 羽 肉鸡 相一 致 。  

指肠 而 非 空肠 后段 SGLT1   mRNA 的表达 ,增 加葡 

AA 鸡 和 黄 羽 肉 鸡 十 二指 肠 GLUT2mRNA 表 

萄糖 吸 收, 从 而 提高 其 生产性 能 。上 述研 究 表 明 , 小 

达 的发育模 式 并不 相 同 ,在 2~3O  d两种 肉鸡都 呈 

肠 前段 SGLT1和 GLUT2的表 达 与 葡 萄 糖 吸 收 和 

现 不 断 升高 的趋 势 ,且 1 6和 30  d均 显 著 高 于 2  d 

生产 性能 之间 具有 密切关 系 。  

f P<O. 05),这 与 同时 期 SGLTI   mRNA 表达 和生 产 

本 实 验结 果发 现 , AA鸡 和黄 羽 肉鸡 十二 指 肠 

性 能的表 现具 有一 致性 。30  d以后 两 者 的发育模 式 

SGLT1  mRNA 表 达具 有 相 同的 发育 模 式 ,从 2到 

完全 不 同 , AA 鸡 44和 58   d显 著 低 于 1 6和 30  d 

30  d不 断 升高 , 44   d下 降 , 55   d回升 ,这种 变化 趋势 

( P<0. 05) , 其 趋 势 与 AA鸡 SGLTI  mRNA 的发 育 规 

与生产 性能 指标 ADFI和 ADG的 变化 曲线 相 吻合 ,  

律相 一致 ;而黄 羽 肉鸡 GLUT2  mRNA 的表达 则 随 

30   d以前 SGLT1  mRNA 的表 达 显 著增 加 ,与生 产 

日龄增 加继 续提 高 , 换料 应激 几乎 对此 没有影 响 , 直 

性能 的直线 上 升相一 致 。Ka put   et   a1 .f 2004) 指 出 ,日 

至 58d表 达量 达到最 高 , 显 著高 于 2、1 6和 30df P< 

粮 的化学组 成可 以直 接或 间接影 响基 因表 达 。5~6  O. 05), 黄 羽 肉鸡后期 GLUT2mRNA 的发育 模式 , 不  周生产 性能 的平 台期表 现 ,可能 是 日粮营 养水平 改  但 与 AA鸡 GLUT2  mRNA发 育规 律 不 同 ,而 且 与  变和换 料应 激 , 导致 SGLT1表 达显 著下 调 的直接 结  其 自身 SGLTI   mRNA 的 发 育性 变 化 也不 一 致 。不 

果 。有 研究 表 明 , 大 鼠断奶 时 SGLT1的活性 显著 降 

同基 因型之 间 GLUT2  mRNA丰 度也 有 差异 。以 上 

低f O’ Connor   a nd  Di a mond,1   999) 。 本 实验 中 AA 鸡 

结 果说 明 ,黄 羽 肉鸡 GLUT2mRNA 表 达 的发 育规 

和黄 羽 肉鸡 SGLTI的表 达 44  d时突然 下 降 ,其 中 

律, 有 别于 AA 肉鸡 , 但其 生理 功能 与作 用 机制 以及 

AA鸡 SGLT1   mRNA 丰度 显著 低 于 30  d, 推 测 肉鸡 

对 黄鸡 生产 的重 要意 义 , 尚有待 于进 一步 研究 。  

生产 中换料 与 哺乳 动 物断 奶类 似 , 可 以下 调 SGLT1   mRNA 的表 达 , 生 长 速 度快 的 AA鸡 对 应 激 的反 应 

更 敏感 。Fe r r ar i s( 2001 ) 指 出, 肠 腔 内 日粮 信 号 的 改 

参 考

文 献 

变 ,可 以影 响 SGLT1的转 录 , 24   h以后就 会增 加或 

降低葡 萄糖 的吸 收。Cui   et   a J .( 2003) 报道 , 人 和大 鼠 

Ba r f ul l   A,Ga r r i ga   C,Mi t j a n s   M  a n d   Pl a na s   J   M.Ont og e n et i c  

离体 的小肠 分别灌 注 1 00  mmol / L葡 萄糖 或果 糖 , 对 

e xpr ess i on  and  r egul at i on  of  Na +- - D- - gl ucos e  cot r ans por t er   i n 

SGLTI   mRNA 的丰度 没有 影响 。翁梅 倩 等( 2001 ) 的 

j e j un u m o f   d ome s t i c  c hi c ke n( J ) .   Ame r i c a n  J o u r na l  of  

研究 结果 显示 , 新 生兔 分别 给予 5%果糖 、 5%葡萄糖 

Phys i ol ogy,2002,282:G559-564 


维普资讯 http://www.cqvip.com

农 业 生 物 技 术 学 报  Cher buy  C,Dar cy- Vf il l on  B,Pos ho  L,Vaugel ade   P,M orel   M  T,  

2 0 06矩 

f act or s: Lact ase   capa ci t i es   nd  a l a ct ose   l oads ( J) . Amer i can 

Ber nar d F,Let ur que  A,Peni caud  L  and  Duee  P  H.GLUT2 

Jou r nal   Physi ol og y   Regul at or y  I nt e gr at i ve  Compar e 

and hexoki nase  cont rol  pr oxi modi s t al  gr adi ent  of  i nt es t i nal  

Phys i ol og y, 1 999,276:753~ 765  

gl ucos e   met abol i s m  i n  t he   newbor n  pi g( J ).Ame  ̄can  Jour nal   ofPhys i ol ogy,1 997, 272( 6  Pt  1 ) : G1 530-539  Cui   X  L, J i n g  a L  n d  a Fer r ar i s   R  P. Regul at i on  of   r at   nt i est i nal  

Reus s  L. One- hu n dre d  yea rs   of  n qui i r y: The mecha ni s m of 

gl ucos e a bsor pt i on i n t he  i nt es ine (J t ) .   Annual  Revi ew  Phys i ol og y ,2000, 62: 939-946 

GLU T2 mRN A abunda n ce  by l um i nal  a n d s ys t em i c  f act or s  

Wa ng   X  Q( 王 修启 ) ,Zha ngZ  M( 张兆敏) , Zha ng   L( 张磊) , Ch e n 

( J) .Bi oche mi st r yBi o phys i ol ogyAct a,2003, 1612( 2) : 1 78-85  

J(陈 杰 ) a nd  Zh a o  R  Q (赵 茹 茜 ) . Di e t a r y   x yl na a s e  

Di efenba ch  C  W

( chi ef - edi t or ) . PCR  Pr i mer: A  Labor at or y 

s uppl ement at i on 

afect s 

gl ucos e 

abs or pt i on 

n d  a

Ma nual( 2nd  edi t i on)( M) .Col d  Spr i ng  Ha rbor,New  Yor k:  

SGLT  1   mRNA  expr ess i on  i n  nt i es t ne i  of  br oi l e r  chi cke ns  f ed 

Col d  Spnng  H ar bor   Labor at or y  Pr es s,2003.  

wheat - bas ed  di et( J) . Jour nal   ofAgr i cul t ur al   Bi ot cchnol og y 

Fer r ar i s   R  P. Di et ar y  n d  a devel opment al   r eg ul a t i on  of  i nt es t nal i  

s uga r t r ans por t( J) . Bi oche mi st r y  Jour n  aJ , 2001 , 360:   265-276 

Gar r i ga  C,M ore t o  M  n d  a Pl a nas   J   M .Efect s   ofres al n at i i on  on 

( 农 业生物 技术学 报) ,20 05 , 1   3( 4 ) 49 7 ~50 2. ( I n   Chi ne s e   wi h  t Engl i sh  abs t ra ct )  

We n g   M  Q( 翁 梅倩 ) ,Wu   S   M( 吴圣 楣)a nd   Zha ng   W  L( 张伟  利1 .T h e  efectofdi fe re ntf e edi ngsi n newbor nr abbi s  t ont he 

i nt es t i nal  gl ucos e  t ra ns por t  i n chi cke ns  ada pt ed t o l ow Na 

r e u l g at i on  of  SGLT1, GLUT5, LPH a n d SI  expr es si on i n t h e 

i nt akes( J ).Exper i ment alPhysi ol ogy,2000,85( 4) :371 -378 

s ma l l   nt i e s t i ne( J ) .S ha ng h ̄ Me di c i ne (  ̄海 医学 ) ,20 01 ,24  

Ka put  J  and Rodri u ez g  R L.   Nut r i t i onal  genomi cs: The next  

ront f i er   i n t he  pos t genomi c  er a( J) .Physi ol ogi cal  Genomi cs ,   2004,1 6:166 ̄ 1 77  

(11) :659- - 663( n  i Chi nese   wi h  t Engl i s h  abs t ract )  

We ng   M  Q( 翁梅倩 ) .T he   r e s e a r c h  a d va nc e s   o n  mo l e c ul a r   ie f l d  of t h e de vel opm ent  of  i nt es t ne i  a n d s uga r  di ges t i on a n d 

Kel l er G L. The f aci l i t at ed component  of  i nt es t i nal  gl ucos e 

a bsor pt i on( J) .Paedi at r i cs ,t he  Medi c i ne  n Vor i ei u  g Count ies r  

abs or pt i on( J ). Jour nal   ofPhysi ol og y, 200  1 ,53  1( 3): 585-595 

( 国外 医 学 科 学 分 册 ) , 1 99 9,2 6( 3 ) : 1 5 5 ~1 57 ( n  i Ch ne i s e   wi h  t

Kha n  J   M ,W i nger t zahn  M  A,Tei chber g  S,Va n cur ova  I ,Ha r per   R  G  and  W apnk  R  A. De vel opment   oft he  i nt es t nal i  SGLT1  

t r ans por t eri nr at s( J) . Mol ecul arGenet i cs   andMet abol i s m,   2000,69:233-239 

O’ Connor  T  P a n d  Di amond J.   Ont ogeny of  nt i es t n al i  s af et y 

Engl i sh  a bs t ra ct )   Whi t t ow  G C. St urki e’ S   Avi n  a Physi ol ogy, 5t h Edi t i on ( M) .   Ac adem i c  Pr ess ,1   999.  

Wr i ght   E  M. Renal   Na+ - gl ucose   cot r anspor ter s( J) . Ame r / ca n  Jour nalofPhy si ol o y ,2001,280:F1 g 0 ̄F18 


鸡肠道SGLT1和GLUT2mRNA表达的组织特异性研究 (2)  

http://www.cqvip.com http://www.cqvip.com http://www.cqvip.com http://www.cqvip.com http://www.cqvip.com http://www.cqvip.com

Read more
Read more
Similar to
Popular now
Just for you