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Guía obtención ADN Algunas consideraciones previas: El material biológico debe ser tan fresco como sea posible. Con la adecuada organización, todas las etapas pueden completarse en cerca de 55 minutos. Cuando se realiza extracto de ADN, podemos esperar tres resultados básicos. I.- Ningún ADN II.- El ADN parece una pelusa disgregada III.-El ADN aparece como hilos delgados. Aunque el ADN como hilos enrollados son los más impresionantes, el que está disgregado también permite mostrar que ADN está presente. Los aspectos básicos en la extracción de ADN son:  Para que la célula se abra se debe destruir la bicapa de fosfolípidos, esto se logra con el detergente, la sal y la acción de la batidora.  La célula se debe romper para soltar el núcleo y éste también debe abrirse para soltar el ADN. A estas alturas el ADN debe protegerse de enzimas que lo degradarán produciendo sólo pequeños fragmentos.  Una vez que se obtiene el ADN debe precipitarse con alcohol.  Las enzimas ADNasas disgregan (rompen) el ADN. Guardar las soluciones en refrigeración retarda la acción de esta enzima.  La papaína es una enzima que ayuda a degradar las proteínas asociadas al ADN y que pueden contaminar su extracción. El jugo de la papaya y el jugo de la piña contiene esta enzima.  El etanol es un alcohol que se usa para precipitar el ADN. En agua, el ADN es soluble, pero cuando está en etanol, se enrolla y precipita dejando atrás los otros componentes de la célula que no son solubles en él Materiales: 1 taza de flor coliflor – 2 papayas maduras – detergente líquido (lavaloza de uso doméstico) – solución de NaCl al 4% sin yodo – etanol – azul de metileno – indicador rojo fenol – 2 gotarios – 2 vasos de precipitado de 50 ml – colador – batidora – asa de alambre – sistema de refrigeración – 4 pipetas – 1 portaobjetos – 1 cubreobjetos – 1 microscopio óptico.


Procedimiento Corte y lleve a una batidora 1 taza de flor de coliflor cruda. Agregue 100 ml. de solución salina. Mezcle en la batidora por 1 minuto y a alta velocidad. Pase la mezcla a un vaso de precipitado, a través de un colador de malla muy fina. Agregue 5 ml. de detergente. Mezcle sin formar espuma. (Solución celular). Obtenga jugo filtrado de papaya madura y fresca. Debe ser molida con cáscara y pepas. (Solución enzimática). Ponga en un tubo de ensayo 5 ml. de solución celular más 5 ml. de solución de enzima. Mezcle suavemente, sin agitar. Deje reposar por 5 a 10 minutos. Agregue 6 ml. de etanol lentamente, derramándolo por la pared del tubo de ensayos, sin mezclar ni agitar. Permita que se forme una capa de alcohol (etanol) por sobre el filtrado. Repose la mezcla por 2 a 3 minutos. El ADN flotará en el alcohol. Pasee, como revolviendo lentamente, el asa de alambre por la interfase que se forma en la frontera entre el filtrado y el alcohol. Si ha llegado al resultado esperado, verá como unos muy delgados hilos blancos se enrollan en la varilla. ESOS HILOS SON ADN. Tome una muestra de las fibras de ADN y deposítelas sobre un porta objetos, de modo que quede dispersado y tan delgado como sea posible. Tiña durante unos minutos con azul de metileno. Cubra y observe al microscopio. Coloque una parte del ADN logrado sin teñir, en un tubo de ensayo limpio con 10 ml. de solución de cloruro de sodio al 4%. Agregue cinco gotas del indicador rojo fenol a la solución de ADN. El color rosa oscuro resultante se debe a la presencia de ADN. Todos los tejidos producen ADN, unos un poco más que otros. Un problema que constantemente persiste, ocurre al agregar el alcohol, normalmente se vierte demasiado rápido. En lugar de formar dos capas distintas, se mezclan ambas. Una vez que eso pasa, no hay mucho que pueda hacerse.


Guía obtención ADN