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Rosco Diagnostica

Inserto para KPC/Metallo-B-Lactamasa Kit de Confirmación (98006) Inserto para KPC/MBL y OXA-48 Kit de Confirmación (98015) REVISIÒN: EMITIDO: IDIOMA:

DBV0034B 02-01-2013 Español

KPC/Metallo-β-Lactamasa Kit de Confirmación KPC/Metallo-beta-lactamasa y OXA-48 Kit de Confirmación Sólo para uso in Vitro GRUPO GE PRODUCTOS:

Kit para identificación de beta-lactamasas

FABRICANTE:

ROSCO Diagnostica A/S, Taastrupgaardsvej 30, DK-2630 Taastrup, Denmark.

INDICACIÓN DE USO:

Identificación cualitativa in vitro de mecanismos de resistencia microbiana por el método de difusión en agar tableta/disco, con el fin de confirmar el mecanismo por el cual los organismos han adquirido resistencia a los agentes antimicrobianos específicos.

USUARIOS POTENCIALES: Sólo para ser usado por profesionales y personal entrenado para trabajar con microorganismos y test de difusión en discos. PRINCIPIOS DEL TEST: Cuatro cartuchos de tabletas conteniendo 10 µg de Meropenem (cantidad difundible), tres cartuchos adicionales conteniendo inhibidores de diferentes β-lactamasas. Si un organismo presenta susceptibilidad reducida a Carbapenems puede deberse a: 1. El organismo hiper-produce AmpC. Debido a la baja hidrólisis de carbapenems por la enzima AmpC, la enzima AmpC está probablemente asociada a otro mecanismo de resistencia como bombas de eflujo, pérdidas de porinas u otras. La enzima AmpC es inhibida por Cloxacillin. Cloxacillin es utilizada para distinguir AmpC de KPC ya que ambas son inhibidas por el Ácido Phenylboronic. Esta diferencia (≥ 5mm) en las zonas entre Meropenem y Meropenem + Cloxacillin indica actividad de AmpC. 2. El organismo produce Metallo β-lactamasa que hidroliza eficientemente carbapenems. MBLs es inhibido por el Ácido Dipicolinic y una diferencia en la zona (≥ 5mm) entre Meropenem y Meropenem + DPA indica la presencia de MBL. DPA no tiene (contrariamente a EDTA) actividad antimicrobiana intrínseca y por lo tanto el resultado con este compuesto es más fácilmente interpretado. 3. El organismo produce la enzima KPC. Las enzimas KPC son inhibidas por el Ácido Phenylboronic. Sin embargo, el Ácido Borónico también inhibe AmpC con el fin de aumentar la especificidad del Kit, la combinación con Cloxacillin está incluida para distinguir entre los dos. Por lo tanto, una zona de diferencia (≥ 4mm) con Meropenem + Ácido Phenylboronic pero sin diferencia (<4mm) con Meropenem + Cloxacillin, indica la presencia de la enzima KPC. 4. Enterobacteriaceae producir oxacillinase (OXA-48 o similar). Resultados negativos de todos los test sinérgicos y, Temocillin 30 ug: sin zona de inhibición, es presuntivo de OXA-48 o similar. Además, el aislado es altamente resistente a Piperacillin + tazobactam. El test de Temocillin es solo valido para Enterobacteriaceae. INSTRUCCIONES DETALLADAS:

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Rosco Diagnostica Las instrucciones de uso ROSCO para la Detección de mecanismos de resistencia deben estar disponibles en los laboratorios que trabajen con los productos de ROSCO Diagnostica. La última edición de las instrucciones de uso están disponible y pueden ser impresas de la página www.rosco.dk. En la Guía de usuario DIATABS de ROSCO puede encontrarse información más detallada. Las instrucciones de uso y las guías de usuario pueden obtenerse gratuitamente en los distribuidores locales o solicitadas de ROSCO Diagnostica A/S: info@rosco.dk o E-mail: Fax: +45 43 52 73 74 CONTENIDO Y FORMULACIÓN: 4 cartuchos de tabletas, formulados para una máxima estabilidad, cada uno conteniendo aproximadamente 50 tabletas: 1. Meropenem 10 µg, código MRP10 2. Meropenem 10 µg + Ácido Phenylboronic (KPC y AmpC inhibidor), código MRPBO 3. Meropenem 10 µg + Cloxacillin (AmpC inhibidor), código MRPCX 4. Meropenem 10 µg + Ácido Dipicolinic (Metallo-β-Lactamase inhibitor), código MRPDP 5. Temocillin 30 ug (solo en el kit confirmatorio de OXA-48), código TEMOC ALMACENAMIENTO/MANIPULACIÓN: Almacenar a 2-8 °C en la caja provista o en los cartuchos sin abrir hasta la fecha de vencimiento impresa en la etiqueta. Dejar aclimatar hasta temperatura ambiente por 3060 minutos antes que la tapa sea removida del cartucho. Una vez que el cartucho ha sido abierto y particularmente cuando ha sido colocado en un dispensador, puede ser mantenido a temperatura ambiente por hasta 2 meses. Nunca coloque el dispensador en el refrigerador. PRECAUCIONES: Sólo para uso diagnóstico in vitro. Deben tomarse las medidas de seguridad y utilizarse técnicas asépticas cuando se trabaja con material con potencial riesgo biológico. Debe ser utilizado adecuadamente por personal de laboratorio entrenado y calificado. Esterilice todo los residuos con potencial riesgo biológico antes de ser descartado. Referenciar la Hoja de datos de Seguridad. MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS: Equipamiento microbiológico standard como anzas, medios de cultivo, incubadores, etc., y reactivos bioquímicos.. PROCEDIMIENTO: 1. 2. 3.

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Utilizando un cultivo fresco y puro, preparar una suspensión del organismo a ser testeado equivalente a 0.5 McFarland. Utilizando un hisopo estéril o una espátula Drigalski sembrar uniformemente la suspensión sobre toda la superficie de una placa de de agar Mueller Hinton. Utilizando un dispensador simple de tabletas, colocar una tableta de cada una en la placa incubada, asegurando espacio suficiente entre las tabletas individuales para permitir la medición de las zonas de inhibición. Notar que más de un Kit de Confirmación puede ser testeado en la misma placa. Incubar a 35 ± 1 °C por 18 ± 2 horas (toda la noche). Medir y registrar los diámetros de las zonas de inhibición. Ninguna zona alrededor de una tableta corresponde a una zona de inhibición de 9 mm.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS: Con Ps. aeruginosa y Acinetobacter baumannii solo debe interpretarse el resultado del test de MBL. Los resultados de los tests de AmpC y de KPC son invalidos con estas especies. Los resultados son interpretados comparando las zonas de inhibición de las diferentes tabletas. Riv7271

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Comparar la zona de inhibición de la tableta de Meropenem 10 µg con la zona de inhibición de cada tableta de Meropenem 10 µg + tablatea de inhibidor. Si todas las zonas están dentro de 3mm de las demás, registrar el organismo como no representante de actividad KPC ni MBL. Mida la zona de inhibición alrededor de Meropenem 10 µg (MRP10) y compare con la zona alrededor de Meropenem 10 µg + Cloxacillin (MRPCX). Si la zona para la tableta combinación es ≥ 5mm que la zona del disco simple y la zona alrededor de Meropenem + Boronic es >= 4mm, el organismo demuestra sólo actividad AmpC. AmpC es probablemente hiper-producida y/o asociada con pérdidad de porina y/o bombas de eflujo. Mida la zona de inhibición alrededor de Meropenem 10 µg (MRP10) y compare con la zona alrededor de Meropenem 10 µg + Ácido Borónico (MRPBO) y Meropenem 10 + Cloxacillin (MPRCX). Si la zona para MRPBO es ≥ 4mm y la zona alredeodor de MRPCX es <5mm que el disco simple y los valores de los pasos 2) y 4) son < 5 mm, el organismo demuestra sólo actividad KPC. Si la zona alrededor de MRPBO es ≥ 4mm que la zona alrededor de MRPCX el organismo es KPS positivo. Medir la zona de inhibición alrededor de Meropenem 10 µg (MRP10) con respecto de Meropenem 10 µg + DPA (MRPDP). Si MRPDP – MRP10 es ≥ 5 mm y los valores de los pasos 2) y 3) son < 5mm, el organismo es positiva para la actividad Metallo-β-Lactamasa solamente. Es posible que un organismo sea positivo para más de un mecanismo de resistencia. Si esto sucede, por ejemplo, si el valor del paso 4) es ≥ 5mm y en el paso 3) es también ≥ 4 mm, entonces el organismo es positivo para ambas actividades MBL y KPC. Sin embargo en la mayoría de los casos MBL puede enmascarar KPC dificultando la detección de la presencia de actividad MBL. Ninguna combinación de mecanismos de resistencia es imposible y más de un Kit de Confirmación puede ser testeado en la misma placa. Utilice la tabla 1 como asistente para la interpretación. Procedimientos aislados para KPC y MBL en el mismo aislamiento han sido descriptos en Grecia y Alemania. Rosco Diagnostica ha desarrollado una combinación triple de tabletas: Meropenem + Phenylboronic + Dipicolinic que permite la identificación de ambas enzymas (zonas de inhibición comparadas con Meropenem + DPA and Meropenem + Phenylboronic, respectivamente) El disco triple (68912) está disponible para la detección de KPC+MBL en el mismo aislado.

CONTROL DE CALIDAD: A pesar que ROSCO Diagnostica A/S produce, los discos de difusión (tabletas) más estables, es necesario realizar controles de calidad. Los mismos, deben ser realizados con un organismo como mínimo para demostrar la reacción positiva y un organismo como mínimo para demostrar la reacción negativa. Las zonas de inhibición obtenidas utilizando las tabletas de combinación más la tableta carbapenem sola contra el control negativo (i.e. E. coli ATCC 25922), debe estar entre los 3 mm. Como control de calidad positivo, deben utilizarse cepas de: Klebs. pneumoniae NCTC 13438, KPC positivo Klebs. pneumoniae NCTC 13439, MBL positivo Klebs. pneumoniae ATCC BAA-1705, KPC positivo Klebs. pneumoniae ATCC BAA-2146, MBL positivo

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Tabla 1: Meropenem + Phenylboronic MR+BO AmpC + porina pérdida

KPC

MβL OXA-48 y similares

Meropenem 10 µg MRP10 Meropenem 10 µg MRP10 Meropenem + Cloxacillin MRPCX Meropenem 10 µg MRP10 Meropenem 10 ug MRP10

Meropenem + DPA MRPDP

Meropenem + Cloxacillin MRPCX

Temocilin 30 µg

<= 3 mm

≥ 5mm

≥ 12mm

≥ 4mm

<= 3 mm

<= 3mm

≥ 12mm

≥ 4mm

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< 4mm

≥ 5mm

< =3mm

≥ 12mm

<= 3 mm

<= 3 mm

<= 3 mm

Sin zona de inhibición

≥ 4mm

Ni AmpC, KPC ni MβL: todas las zonas entre 3 mm de cada una. OXA-48 ( K. pneumoniae) muestra resultados negativos con KPC+MBL Kit de Confirmación, pero es Temocillin resistente. (No hay zona alrededor de Temocillin 30 ug Neo-Sensitabs). Solo en Enterobacteriaceae. REFERENCIAS

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