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Colegio Superior Agropecuario del Estado de Guerrero Centro de Estudios Profesionales “CSAEGRO”

Evaluación de la efectividad biologica del Induktor/ nemarosburg (Ácido Succínico) PARA EL CONTROL DE NEMATODOS ENDOPARASITOS y ECTOPARASITOS EN TOMATE

Abril, 2003


CONTENIDO a) Titulo b) Institución e Investigadores responsables c) Objetivo d) Ubicación y croquis de localización del experimento e) Plaguicida a evaluar f) Plaga contra la cual se evaluará el plaguicida g) Parámetros de efectividad biológica y fitotoxicidad h) cultivo i) Diseño del experimento j) Tratamientos (dosis, momento e intervalo entre aplicaciones) k) Método de evaluación 1)Tamaño de la muestra y método de muestreo m) Frecuencia de muestreo n) Calendario de actividades o) Bibliografía


a) Titulo:

EVALUACiÓN DE LA EFECTIVIDAD BIOLOGICA DEL NEMAROSBURG (Acido Succínico) PARA EL CONTROL DE NEMATODOS ENDOPARÁSITOS y ECTOPARASITOS EN TOMATE b) Institución e Investigadores responsables El Colegio Superior Agropecuario del Estado de Guerrero, a través del laboratorio de Fitopatología del Centro de Estudios Profesionales y los Drs. Alejandro C. Michel Aceves e Immer Aguilar Mariscal, serán los responsables del ensayo. c) Objetivo Evaluar la eficiencia biológica del NEMAROSBURG en el desarrollo y rendimiento del tomate. d) Ubicación y croquis de localización del experimento Campo experimental y Laboratorio de Fitopatología del Centro de Estudios Profesionales del Colegio Superior Agropecuario del Estado de Guerrero. Ubicado en el km 14.5 de la carretera Iguala-Cocula; la localización geográfica es de 18° 22' N y 99° 33' y una altura de 635 msnm. e) Plaguicida a evaluar: NEMAROSBURG El Nemarosburg es un nematicida orgánico, cuyos ingredientes activos son : Acido Succinico equivalente a 370 g i.a/Ly extractos vegetales. Modo de Acción: El Nemarosburg es producto orgánico totalmente biodegradable,con acción nematicida-microbicida de amplio espectro, sistémico y de contacto de origen orgánico-vegetal y con cierta acción estática (gas), efectiva para prevenir y controlar una gran gama de patógenos que se encuentran en el suelo y que afectan a los cultivos. Aplicando al suelo (drench, semidrench) y a las plantas (fumigación) como nematicida por su modo de acción permite controlar directamente al nematodo e indirectamente genera una reacción en la planta que le permite autodefenderse. Nemarosburg es un compuesto líquido que al ser aplicado genera un gas que en dosis moderada, al ser asimilado por ingestión, a los nematodos los hace explotar y por contacto permite el paso de los iónes de cloro (CI), lo que impide el movimiento normal, lo que posiblemente provoca la muerte por inanición y también por deshidratación. La acción del nemarosburg es de efecto lento, pero de largo período de protección. Al impedir su movimiento normal, el nematodo


detiene su reproducción y desarrollo lo que impide aumentar su población. Aplicaciones - Dosis: Se utiliza a dosis de 5 - 7 litros I hectárea, teniendo en cuenta que el suelo esté húmedo. Después de aplicado el nemarosburg, se recomienda hacer un riego. La evaluación se realiza a los 21 días después de la aplicación del producto, volviendo a realizar una nueva aplicación. En cultivos perennes se recomienda hacer aplicaciones cada 3 meses. Cultivos: Banano, piña, frijol, fresa, lechuga, naranja, mango, pimiento, sandía, tabaco, tomate. vid. pepino, chile. Tuna, nopal. calabaza, calabacita, mora, espárrago, cebolla, brócoli. Aspectos Generales: No es fitotóxico a las dosis recomendadas, la temperatura de aplicación no debe ser superior a los 25 °C y no aplicar a pleno sol, ni en cultivos que sufran estres hídrico. Es compatible con la mayoría de los plaguicidas comunes en el mercado y no mancha. Toxicidad: No es tóxico para humanos, ni para animales. Hay que evitar el contacto directo con la piel y los ojos. En caso de accidente lave bien con abundante agua las partes afectadas. No almacenar en viviendas y mantenerlo fuera del alcance de los niños. f). Plaga contra la cual se evaluará el plaguicida Será contra nematodos. Los nematodos presentan simetría bilateral; el tamaño de las especies fitopatógenas miden entre 0.5 y 3.0 mm de longitud y 0.01 Y 0.5 mm de ancho; de forma general, tanto el macho como la hembra son cilíndricos, adelgazándose hacia la cabeza y cola, excepto cuando existe dimorfismo sexual donde la hembra es hinchada y tiene forma de pera, riñón, limón, etc. Es común la reproducción partenogénica (sin la intervención del macho), y en algunas especies, las hembras son bisexuales, puesto que producen espermatozoides y óvulos. Poseen los sistemas fisiológicos de los animales superiores, excepto el circulatorio y respiratorio; viven generalmente en el suelo, son semitransparentes. Las especies fitopatógenas poseen un estilete largo, el cual les sirve para penetrar al hospedante y alimentarse de él; la mayoría pertenecen al orden TYLENCHIDA, que se caracteriza por tener el esófago en tres partes. Las especies transmisoras de virus pertenecen al orden DORYLAIMIDA, cuyo esófago esta formado de dos partes. Abundan en cualquier nicho biológico, incluyendo desiertos, fondo del mar, antártico y manantiales termales. Se han estudiado más de 150 especies de nematodos fitopatógenos y cada año se descubren más, afectando rendimiento y calidad de las cosechas, puesto que limitan la utilización de los nutrientes,


sensibilizando a las plantas perennes a los daños que llega a producir el invierno. La alimentación se inicia cuando el nematodo introduce su estilete, el cual es con pocas excepciones un tubo agudo como lanza, que lo utiliza para punzar la célula, secreta "saliva" que es una enzima pre-digestiva, que hace más fluido el contenido celular y facilita la ingestión y asimilación. Cuando se alimentan o atraviesan los tejidos del huésped, los nematodos producen una lesión mecánica. Para los que se alimentan externamente (ectoparásitos) la lesión es muy ligera, sin embargo, por la saliva que inyectan, los tejidos vegetales reaccionan de diferente manera. Cuando la alimentación es interna (endoparásitos) la lesión es mayor. Entre los síntomas externos que un nematodo puede causar tenemos: clorosis, marchites, manchas y lesiones en las hojas, etc. Los principales factores del medio ambiente que afectan a los nematodos son: Temperatura, humedad, textura, aireación y la química del suelo. g) Parámetros de efectividad biológica y fitotoxicidad El parámetro para medir la efectividad biológica del NEMAROSBURG será el porcentaje de infección que se presente en las plantas del tomate, así como también la población de nematodos presentes en el suelo. h) Cultivo El cultivo sobre el cual se llevará a cabo el experimento es tomate, variedad Río Fuego, transplantado a 30 cm entre plantas, con un total de 2000 plantas para el ensayo. i) Diseño del experimento El diseño experimental a utilizar es el de bloques completamente al azar, se tendrán cinco tratamientos con cuatro repeticiones cada uno. La unidad experimental es de 4 surcos de 1.60 m x 7.5 m de largo, lo que representa 40 m2, La parcela útil es de 16 m2,constituida de los 2 surcos centrales de 5 metros.

Bloque I 3 2 4 1 5

Bloque II 4 1 5 3 2

Bloque III 1 3 2 5 4

Bloque IV 2 5 1 4 3


Figura 1. Diseño experimental y distribución de los tratamientos j) Tratamientos (Dosis, momento, número e intervalo entre aplicaciones) Los tratamientos que se evaluarán se especifican en el cuadro 1. Se harán tres aplicaciones, las cuales iniciaran desde la etapa vegetativa al primer síntoma de infección. ' Cuadro 1. Tratamientos y dosis a utilizar en el estudio de efectividad biológica No. De Tratamiento 1 2 3 4 5

Plaguicida Nemarosburg Nemarosburg Nemarosburg Rugby (Cadufox) Testigo Absoluto

Dosis Lt / Ha. 4 5 6 10

La primera aplicación : entre 5 a 10 días después del transplante La segunda Aplicación : 25 días después de la primera aplicación La tercera Aplicación : 30 días después de la segunda aplicación k) Método de evaluación Antes de la primera aplicación : Muestreo de suelo A los 10 días : segundo muestreo de suelo + muestreo de raíz A los 25 días : tercer muestreo de suelo + muestreo de raíz A los 30 días : cuarto muestreo de suelo + muestreo de raíz Se contabilizarán las poblaciones iniciales de nematodos ecto y endoparásitos antes y después de cada aplicación. Adicionalmente se cuantificará la presencia de Fusarium En la cosecha se considerará: - Peso seco y fresco de raíz - Número de racimos I planta - Número de frutos I planta - Peso promedio de frutos A partir de los datos de la población de nematodos (P), se calcularán los


porcentajes de eficacia del producto según la fórmula de Abbott, con el objeto de conocer el porcentaje de efectividad en cada tratamiento. Fórmula de Abbott : (IT - it liT) * 100 Donde: IT = Población de nematodos en el testigo it = Población de nematodos en los tratamientos Con los valores recabados se realizará un análisis de varianza (ANOVA) y posteriormente la prueba de Tukey para la comparación múltiple de medias L) Tamaño de la muestra y método de muestreo En este caso, se tomarán dentro de la parcela útil en cada muestreo 250 gramos de suelo, el cual se procesará en laboratorio para determinar la población de nematodos en el suelo antes y después de la aplicación. Para determinar la población de nematodos en tejido vegetal se utilizarán 10 plantas localizadas en la parcela útil de cada unidad experimental, material que será evaluado de manera cualitativa de acuerdo con lo establecido con una escala diseñada para tal fin y se realizará la metodología para cuantificar el número de nematodos en el tejido vegetal. A.- Población de nemátodos en el suelo: Para la extracción de nematodos del suelo, se utilizará el método del embudo de Baermann. Para lo cual se colectarán aproximadamente 200 gr de suelo de cada uno de los tratamientos de acuerdo al calendario establecido, en cada uno de los 4 muestreos ( O dda, 10 dda, 25 dda y 30 dda). Preparación del suelo: Sobre un plástico se homogeniza el suelo, desbaratando terrones y sacando basuras y piedras. Se utilizarán submuestras de 30 g que serán representativas del terreno donde se tomaron. El conteo se realizará por cuadruplicado, para cada tratamiento. Preparación del embudo: Primero se coloca la manguera de látex al cuello del embudo, lavar ambos perfectamente; posteriormente, colocar la pinza de presión en el otro extremo de la manguera para cerrar el paso de agua. Se coloca el embudo en el soporte universal y se procede a llenar con agua hasta 2 cm abajo del borde del embudo, eliminando las burbujas de aire que nos pueden impedir que bajen los nematodos o bien que mueran por deshidratación. Una vez realizado lo anterior, se procede a preparar la malla de plástico que se debe amoldar al embudo y sobre ella se coloca el papel absorbente y luego la submuestra de suelo del que se han de extraer los nemátodos. Enseguida se coloca todo esto sobre el embudo y se etiqueta con los datos del tratamiento y repetición respectivos, así como la fecha. Si falta agua al embudo se le agrega con la pipeta hasta que una parte de la malla este dentro de ella, además, es


recomendable doblar las puntas del papel facial para evitar pérdidas de agua por capilaridad. Se deja el embudo en reposo durante 24 hrs. máximo; transcurrido este tiempo, se colectan en un vaso de precipitado aproximadamente unos 15 mi de agua del embudo, en los cuales van los nematodos, parásitos y saprófitos que pasaron por el papel facial y la malla. Se observarán y contarán directamente los nematodos al microscopio de disección, colocando 1 ml de la suspensión en una placa diseñada para tal fin. La información se tendrá por cuadruplicado. B.- Extracción de nematodos del suelo y del tejido vegetal Aparte de la extracción de nematodos por el embudo de Baermann, también se realizará mediante la técnica de flotación-centrífuga. Esta técnica considera básicamente separar los nematodos de las partículas del suelo, tejido vegetal y materia orgánica, usando soluciones de mayor densidad específica y acompañándolas de un proceso de centrifugación que efectúe la sedimentación de las partículas de mayor peso específico y permita la flotación de los nematodos. Se tiene la ventaja de la rapidez de esta técnica y además de que se extraen todo tipo de nematodos, ya sean móviles o poco móviles, extraídos tanto de tejido vegetal como de suelo y materia orgánica. Se utilizan 200 gramos de suelo para cada tratamiento, los cuales se vierten en 1 litro de agua y se pasan por una serie de tamices 30, 50, 100, 200 Y 325. Se colectan en vasos de precipitado los residuos de los tamices de 100, 200 Y 325; se vierte su contenido en los tubos de la centrífuga cuidando de que su peso sea el mismo, se le agrega 1 gramo de kaolín y se centrífuga durante 5 minutos a 2000 rpm. Se tira el sobre nadante que contiene sólo materia orgánica. Se le agrega una solución azucarada (cuidando de que sea una misma cantidad para no desequilibrar la centrífuga), se agita vigorosamente el tubo y nuevamente se centrífuga durante 3 minutos a 2000 rpm. Se vierte el sobre nadante en el tamiz de 325 el cual retendrá a los nematodos que flotan en la solución, se procede a lavar con agua destilada inmediatamente con todo cuidado para evitar que el azúcar distorsione a los nematodos por estar en contacto tanto tiempo. Se colectan los residuos del tamiz 325 en un vidrio siracuse y una vez ahí, se procederá a contarlos. m) Frecuencia de muestreo Los muestreos con el fin de evaluar la efectividad biológica serán cuatro, uno antes de realizar las aplicaciones del Nemarosburg y los otros tres a los 10, 25 y 30 dda


n) Calendario de actividades

Actividad

Fecha Aproximada

Siembra Transplante Muestreo 1 (antes de aplicación) Primera Aplicación (10 días después del transplante) Muestreo 2 (Después de la 1era. Aplicación) Segunda Aplicación (25 días después de la 1era Aplicación) Muestreo 3 (Después de la 2da. Aplicación) Tercera Aplicación (35 días después de la 2da Aplicación) Muestreo 4 (Después de la 3era. Aplicación)

15 de Marzo 10 de Abril 20 de Abril 20 de Abril 30 de Abril 15 de Mayo 25 de Mayo 20 de Junio 30 de Mayo

o) Bibliografia Christie, J.R. 1982. Nematodos de los vegetales. Su ecología y control. Editorial Limusa, México. Segunda Edición. 275 p. Jaco's, J.J. and Bezzoijen, 1977. A Manual fer practical work in Nematology. Wageningen, Holanda. Meredith, J.A 1973. Algunos métodos de campo y laboratorio para trabajar con nematodos. Facultad de Agronomía de la Universidad Central de Venezuela. Maracaibo, Venezuela. Taylor, AL, y Sasser, J.N. 1983. Biología, Identificación y Control de los nematodos de nódulo de la raíz. (Especies de Meloidogyne). Universidad de Carolina del Norte. Raleigh, Carolina del Norte, USA 111 p.


Resultados del Nemarosburg Cuadro 1.- Comportamiento de la población de nematodos en 400 grs. de suelo, antes y después de cada aplicación del Nemarosburg.

T/R

22 Abril 2 Mayo 17 Mayo 5 Junio PRIMERA SEGUNDA Antes Después Antes Después I 224 133 143

6 Junio 17 Junio Observación TERCERA Antes Después 171 158

II

252

258

250

276

247

III

476

156

283

291

232

IV

200

144

147

149

140

I

640

308

214

230

205

II

147

186

132

151

121

III

195

174

153

163

156

IV

672

74

102

121

130

I

120

94

126

130

67

II

378

92

90

86

52

III

123

60

111

121

96

IV

288

185

122

114

73

I

224

152

141

150

139

II

168

165

187

185

191

III

224

205

290

321

331

IV

328

96

172

193

170

I

243

236

338

385

428

II

328

300

238

345

390

III

301

320

282

307

320

1

2

3

4

5


IV

360

385

460

458

480

Cuadro 2 .- Géneros de Nematodos encontrados después de la aplicación de Nemarosburg

TRAT

1

2

3

4

5

REP I

No. DE NEMATODOS 17/ JUN. 158

GENEROS MAS COMUNES DE LA POBLACIÓN Rotylenchulus, Pratylenchus, Meloidogyne Meloidogyne(1), Pratylenchus Stemeinema*, Tylenchus, Meloidogyne Helicotylenchus, Nacobbus

II III IV

247 232 140

I II III IV

205 121 156 130

Heterhabditis*, Nacobbus, Pratylenchus Tylenchus, Meloidogyne Helicotylenchus, Rotylenchulus Stemeinema, Ditylenchus, Tylenchus

I II III IV

67 52 59 73

Tylenchus, Rotylenchulus Stemeinema, Pratylenchus, Tylenchus Meloidogyne, Stermeinema Heterhabditis, Tylenchus, Rotylenchulus

I II III IV

139 191 331 170

Meloidogyne, Tylenchus Meloidogyne, Tylenchus Meloidogyne, Nacobbus, Tylenchus Rotylenchulus, Tylenchus

I II

428 390

III IV

320 480

Meloidogyne, Tylenchus, Heterhabditis Rotylenchulus, Pratylenchus, Meloidogyne Aphelenchus, Nacobbus, Stemeinema Helicotylenchus, Meloidogyne

* Heterhabditis y Stemeinema: Géneros entomopatógeno (Benéfico) Meloidogyne(1)= Género fitopatógeno importante que causa agallas en las raíces de muchos cultivos y favorece la entrada a hongos del género Fusarium. Poblaciones relativamente altas las superiores 200 nematodos / 400 g Géneros fitopatógenos de importancia agrícola: Rotylenchulus ; Pratylenchus; Helicotylenchus; Nacobbus; Ditylenchus; Tylenchus; Aphelenchus. Sin embargo, las poblaciones encontradas son pequeñas.


Cuadro 3.- Peso seco y húmedo de raíz después de la aplicación del Nemarosburg.

I

05 / JUN

06 / JUN

D.S.A.

1

I II III IV

I 2 II III IV

1.0743 0.9275 0.8900 1.0435

0.4656 0.4766 0.4613 0.4898

02 / JUL

03 / JUL

D.T.A. 3.1114 3.4200 3.6369 2.8098

1.0295 1.1326 1.0221 0.9985

OBSERVACIONES

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