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INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN OVINOS

Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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INSEMINACION ARTIFICIAL EN OVINOS Definición: Se entiende por inseminación artificial a la técnica de reproducción que consiste en introducir el material fecundante masculino por medios artificiales, en las vías genitales femeninas. Los medios mecánicos sustituyen a los órganos, sin necesidad de poner en presencia y en contacto a los progenitores. La técnica de la fecundación artificial consta, por lo tanto, de las siguientes operaciones principales: a) Recolección y obtención del semen del macho. b) Valoración cuantitativa, cualitativa y sanitaria de dicho semen. c) Dilución del mismo en los valores adecuados. d) Conservación in vitro, y transporte del semen a distancia. e) Introducción del líquido seminal en el aparato genital femenino o siembra. En los últimos años, la inseminación artificial ha adquirido constante difusión, debido a que esta técnica se ha ido perfeccionando constantemente y su auge se debe, sin duda, al aprovechamiento integral que se puede lograr de un buen carnero padre, y obtener del mismo, muchas más crías que las que se conseguirían mediante la monta natural. Principales ventajas 

Mayor aprovechamiento de buenos carneros o de “calidad superior” al obtener considerablemente más crías que en la monta natural. En el servicio convencional de la majada, puede esperarse que un carnero cubra entre 50 y 100 ovejas por año; y cuando se emplea semen diluido pueden inseminarse más de 1000 ovejas en un período de dos a tres semanas.

Contribuye a formar familias numerosas de animales de calidad descendientes de carneros probados, extendiendo la acción de estos, y por lo tanto, puede determinar una mayor rapidez de la mejora zootécnica.

Prevención y control de enfermedades. Al no existir contacto macho – hembra, se controlan y previenen enfermedades, especialmente venéreas (de transmisión sexual).

Uso de machos incapacitados. A veces, reproductores particularmente valiosos, pueden sufrir lesiones o estar imposibilitados por edad. En estos casos, la inseminación artificial permite que el servicio con estos reproductores continúe.

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Desventajas 

La Inseminación Artificial requiere un manejo intensivo de la hacienda durante su aplicación. Estas tareas reclaman capacidad del personal de campo, insumiendo mayor mano de obra, y tiempo superior a la monta natural.

La aplicación del método requiere idoneidad y conocimiento por parte del inseminador, es decir, reclama presencia de gente con conocimientos y capacidad para evitar maltrato de animales y fracaso en las pariciones.

Disminución en los porcentajes de preñez. Esto ocurre cuando los métodos de detección de celo no son correctamente empleados, o cuando el operador no manipula el semen con propiedad.

Costos de implementación. Incluyen el empleo de mano de obra especializada, equipamiento, drogas, y la compra del semen o mantenimiento de los padres.

Anatomía y fisiología del aparato reproductor ovino Fase masculina En forma sintética se expondrán los principios anatómicos y fisiológicos del aparato reproductor del carnero. Para su estudio los ordenamos en: a) Testículos: Glándulas esenciales de la reproducción, con cubiertas y accesorios. b) Vías espermáticas: Epidídimos, conducto deferente, cordón espermático y pene. c) Glándulas anexas: Vesículas seminales, glándulas bulbouretrales o de Cowper, glándulas uretrales y próstata. a) Testículos: En número de dos, con forma ovoidea, se sitúan en la región inguinal, dentro de una bolsa denominada escroto. La función de ésta es proporcionar a los testículos una temperatura inferior (2º a 3º C menor) que la de la cavidad abdominal, lo que favorece el desarrollo normal de la espermatogénesis. El testículo puede medir de 10 a 15 cm de largo y pesar aproximadamente 300 gr. b) Vías espermáticas: Epidídimo: Conducto flexuoso adosado íntimamente al testículo. La primera parte, ubicada en el borde superior, es la cabeza, que recibe los conductos eferentes del testículo. Continúa el cuerpo, prolongación delgada que recorriendo la cara interna del testículo, desemboca en un ensanchamiento conocido como cola. Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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Conducto deferente: Largo tubo que transporta los espermatozoides de los testículos a la uretra, saliendo de la cara interna de la cola de los epidídimos. Constituye parte del cordón testicular o binza. El conocimiento anatómico del conducto deferente es de primordial importancia para la operación de la vasectomía, que consiste en la amputación de un trozo del mismo, y se logran así los carneros retajos, que identifican las ovejas en celo. Cordón espermático o binza: Está integrado por los siguientes elementos: Túnica vaginal: Está dividida en dos capas, la parietal que tapiza al escroto y la visceral, que se adosa al testículo y las demás formaciones del cordón. Músculo cremaster interno, que retrae el testículo. Conducto deferente y las arterias, venas, linfáticos y nervios del testículo. El cordón espermático comienza en el anillo inguinal y termina en el testículo. Pene: Está constituido por tejido eréctil y especialmente adaptado para depositar el semen dentro de la vagina de la hembra. Está recorrido por la uretra, que termina 3 ó 4 cm más allá del glande, formando una prolongación (prolongación uretral). c) Glándulas anexas: Son un conjunto de glándulas cuya secreción forma parte del eyaculado: la próstata, ubicada detrás de la vejiga; las bulbouretrales o de Cowper, por delante del músculo uretral; las uretrales y las vesículas seminales, que constituyen una dilatación del conducto deferente. Resumen de las funciones reproductoras masculinas El testículo, produce un número elevadísimo de espermatozoides, elaborando a su vez, la hormona de la masculinidad (testosterona) En el trayecto de los epidídimos se realiza la maduración y el almacenamiento de los espermatozoides, los que son suspendidos, nutridos y vehiculizados por las secreciones de los deferentes, glándulas anexas y epidídimos. El pene actúa como órgano copulatorio, depositando la dosis de espermatozoides dentro del tracto femenino, y por último, pero no menos importante, es fundamental el correcto funcionamiento del aparato locomotor.

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Organos genitales del carnero

Los espermatozoides El semen es el vehículo de los espermatozoides, emitido por el carnero en el momento de la eyaculación normal. Una vez que los espermatozoides progresan por los conductos en dirección al epidídimo, se realiza aquí la maduración de los mismos. Los espermatozoides constituyen aproximadamente el 25% del volumen del eyaculado (semen normal) y lo restante es secreción de tubos y glándulas. Físico-químicamente están integrados por un 86% de agua; sustancias inorgánicas: sodio, potasio, calcio, magnesio, fósforo y otras; sustancias

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orgánicas: proteínas, hidratos de carbono (fructosa), ácido láctico y cítrico, vitaminas y, otros, en menor cuantía. Los espermatozoides son pequeñas células, las únicas vivientes dotadas de una movilidad independiente, muy enérgica y capaces de mantenerse en actividad fuera del cuerpo durante un tiempo prolongado. En el ovino miden de 70 a 80 µ (micras). Constan básicamente de una porción globosa, la cabeza, la cual es aplanada y contiene el material cromosómico o ADN, responsable directo de la transmisión hereditaria y, de un apéndice fino y largo denominado cola, por cuyo interior pasa el filamento axial, constituido por nueve microfibrillas que son las encargadas de brindar forma y movimiento al espermatozoide.

Fisiología del espermatozoide Son funciones del espermatozoide: 1) Aportar la dotación paterna de cromosomas. 2) Iniciar la división celular del óvulo. El logro de estos objetivos se realiza en varias fases: a) Inseminación: colocación de los espermatozoides en el aparato genital de la hembra. b) Movimiento o traslación de los espermatozoides a los oviductos. c) Penetración de la pared celular del óvulo por un espermatozoide. d) Pérdida del cuerpo y cola del espermatozoide. e) Unión de los gametos masculino y femenino, formando el huevo o cigota. La supervivencia de los espermatozoides dentro del aparato genital del ovino, probablemente no pase de las 36 a 48 hs., existiendo variaciones considerables en los diversos tramos del mismo. Parece probable que las contracciones uterinas, mediante la ocitocina secretada por la hipófisis, influyan notablemente en el transporte de los espermatozoides a través del tracto genital femenino, tardando escasos minutos ( 10 a 20 aproximadamente) a alcanzar los oviductos, lugar donde se llevará a cabo la fertilización, que es la fusión entre un óvulo y un espermatozoide, resultando en una célula denominada embrión o cigota. Fase femenina Podemos agrupar los órganos genitales femeninos en:

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a) Ovarios o gónadas femeninas b) Vías o conductos genitales: oviductos, útero, cuello uterino, vagina y vulva c) Glándulas mamarias.

a) Ovarios: Son las gónadas femeninas y están ubicadas en la región sublumbar, en la cavidad abdominal. Son aplanados y pequeños (1,5 cm.), similares a una almendra. En número de dos, mantienen su posición por un ligamento corto que los suspende al techo de la cavidad pelviana y se encuentran en la extremidad libre de los oviductos. En el ovario se produce la formación de los óvulos, conocida como ovogénesis. El óvulo se encuentra encerrado en una estructura denominada folículo de Graaf; es de forma esférica y está cubierta por el protoplasma, el vitelo, una membrana fina (membrana vitelina) y otra más fuerte (zona pelúcida). Su tamaño es superior al del espermatozoide (100 a 130 micras).

b) Vías o conductos genitales: Oviductos o trompas de Falopio: Son dos tubos finos, que se abren en forma de embudo cerca de los ovarios. Se conectan con los cuernos uterinos, y su función es recoger el óvulo en el momento de la rotura del folículo y, conducirlo hasta el útero. En el oviducto se realiza el proceso de la fecundación, por los espermatozoides que han ascendido a través de la vagina y el útero. Útero: Comprende el cuerpo y cuernos hasta el cuello uterino. Los cuernos miden de 10 a 12 cm. de longitud, y se adelgazan en la punta, de tal manera, que su unión con los oviductos se hace casi imperceptible. Los cuernos son ondulados, formando una espiral cerrada, y al unirse constituyen el cuerpo, de aproximadamente 3 cm. de largo. Cuello uterino u Hocico de Tenca: El útero desemboca en la vagina, mediante una porción posterior alargada, más o menos cónica, de unos 5 cm. de largo, conocida como cuello. Este órgano es de significativa importancia para la Inseminación Artificial, dado que en este lugar se realizan las siembras de espermatozoides. Resulta difícil localizar rápidamente el conducto del cuello uterino (conducto cervical), porque puede presentar diversas localizaciones, estando cubierta en su desembocadura por las papilas cervicales (lengüetas de la mucosa del útero). Vagina: El cuello uterino desemboca en la vagina, órgano más o menos cilíndrico, y que en la oveja alcanza unos 8 a 10 cm. de largo.

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Anatómicamente este órgano está destinado a alojar al pene del carnero durante el acto sexual y es aquí donde quedan depositados los espermatozoides durante la Inseminación artificial. Vulva: La vagina se continúa sin línea de demarcación con la vulva, que mide de 3,5 a 4 cm. en la oveja adulta.

c) Glándulas mamarias:

En número de dos, están ubicadas en la región inguinal. Cuando el animal está “seco”, o sin cría al pie, no muestran desarrollo, el que sólo se alcanza en los últimos días de gestación y durante toda la lactancia. Pubertad - Resumen de las funciones reproductoras La espermatogénesis en el macho y la ovogénesis en la hembra se alcanzan luego de la madurez sexual, conocida como pubertad. Los órganos sexuales llegan a su completo desarrollo y al estado funcional en edades que varían según la especie, raza y nutrición individual. Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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El desarrollo de esos órganos es un proceso gradual, regulado por una secreción de la hipófisis, que es un glándula que regula también el crecimiento del cuerpo. Generalmente el desarrollo sexual es más rápido que el crecimiento del cuerpo, y si esa aptitud funcional es inmediatamente utilizada, puede producirse un efecto desfavorable en el desarrollo corporal. Estación sexual La ovulación en el ovino se produce solamente en un determinado período del año (estación sexual), por lo que se ha dado en denominar a la especie como poliéstrico estacional. La estación sexual se presenta en forma muy marcada y regular en nuestra zona en los meses de otoño, hasta el mes de julio, hasta tanto la relación luz-oscuridad siga estimulando la hipófisis. Es en estos meses cuando se realiza la monta natural o encarnerada y la Inseminación Artificial. Pasado ese momento, la oveja entrará en anestro (fin de invierno, primavera y verano) y, aunque en el ovario muchos folículos sigan creciendo y desapareciendo, la ovulación y el celo permanecerán suspendidos hasta la llegada de una nueva temporada (otoño). Ciclo Estral La estación sexual en la oveja está caracterizada por la periodicidad con que se van repitiendo una serie de acontecimientos, los que conocemos como ciclo estral. El ciclo estral dura aproximadamente 17 días y se ha dividido en cuatro etapas o períodos que son: proestro, estro, metaestro y diestro. Proestro: Es el período que antecede al estro, presentándose 12 hs antes aproximadamente y está caracterizado por el desarrollo folicular y aumento de la actividad reproductiva. Estro: También conocido como “celo” o “calor” y, debido a que en los ovinos no hay una característica externa notoria, se recurre a los retajos. Dura alrededor de 24 a 48 hs. Y su importancia radica en que en el transcurso del mismo se produce la ovulación. El celo se caracteriza por ser el único período de receptibilidad sexual de la oveja, o sea, que tiene buena disposición para aceptar al macho: permanece tranquila, en pie y no ofrece resistencia cuando el carnero salta. Además trata de seguir al carnero o lo busca. Otra particularidad del celo es la secreción del mucus vaginal. El mismo se aprecia en el interior de la vagina, dando clara idea al inseminador del momento del celo del animal. Por ej: el mucus claro (parecido a la clara de huevo) en poca cantidad, indica un celo Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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incipiente. Al aumentar la cantidad, va aumentando el celo hasta decaer cuando el mucus toma una consistencia cremosa. Metaestro: Dura aproximadamente desde el segundo día al décimoprimero. En este lapso se forma el cuerpo lúteo o amarillo que, al secretar la progesterona, determina el desarrollo final del útero para la preñez. Diestro: Comprende el período que abarca desde el décimoprimer día hasta el comienzo del proestro. En caso de no haber preñez, el cuerpo amarillo no se desarrolla al máximo y se produce un breve período de descanso genital, hasta la reaparición del estro.

ESQUEMA DEL CICLO ESTRAL

Una vez conocida la fisiología de los órganos genitales del carnero y de la oveja y, del momento óptimo para inseminar, comenzaremos a hablar, en forma resumida, de una serie de elementos, imprescindibles para llevar a cabo, con éxito, la Inseminación Artificial. Como nombramos anteriormente, debido a que el celo de la oveja no es caracterizado por ninguna manifestación externa que se pueda apreciar a simple vista, se utilizan los machos marcadores denominados “retajos” cuya función es detectar a las ovejas que van entrando en celo. Retajos Podemos definirlos como aquellos machos que poseen instinto sexual o líbido, pero que, de alguna manera, se lo ha incapacitado en su capacidad para fecundar, es decir, que no deben emitir o introducir espermatozoides en el aparato genital de las ovejas. En la mayoría de los casos se utilizan machos vasectomizados, que a través de una operación quirúrgica se le anula la capacidad fecundante, pero no así, su deseo sexual. Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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El número de retajos que se necesitan está relacionado directamente con la cantidad de ovejas a inseminar, normalmente se trabaja con el 1,5 a 2 % Como medida de seguridad y para un mayor éxito, se prefiere ir rotando los retajos, en su trabajo, es decir, que si mantenemos esa proporción, será necesario duplicar el número de retajos. Pintura de los retajos Como mencionamos anteriormente estos animales los utilizamos para detectar las ovejas en celo y, para ello, se les pinta la zona del pecho y la panza, para que al montar a las ovejas, éstas queden marcadas en la zona de la grupa. Para obtener buenos resultados se pintan los retajos antes de largarlos con las ovejas. El único inconveniente que podría aparecer es que, en inviernos muy fríos se les forme una pequeña película superficial de escarcha, siendo esto de menor importancia. A modo de comentario, nombraremos otras técnicas utilizadas, pero menos difundidas, para detectar el celo: se pueden usar carneros enteros y funcionales con una especie de delantal de arpillera, como así también capones tratados con hormonas con cierta antelación a la Inseminación Artificial. Sin lugar a dudas otro tema de vital importancia es el de contar con potreros bien empastados y de instalaciones necesarias para llevar adelante el trabajo de Inseminación Artificial. Los potreros deben reunir algunas condiciones elementales, tales como buen pasto, estar cerca del lugar donde se realiza la Inseminación Artificial, buenos alambrados, aguadas abundantes y tranqueras en buenas condiciones y bien ubicadas. Instalaciones para inseminar En los ovinos la Inseminación Artificial se realiza bajo techo y para esto podemos utilizar alguna construcción del establecimiento o crear una móvil en caso de no contar con potreros en buenas condiciones cercanos al casco. Generalmente son necesarias dos habitaciones como mínimo: en una se montará el laboratorio, donde se realiza el procesado del semen y en la otra se insemina. En la mayoría de los establecimientos del sur se adapta el galpón de esquila o, como en nuestro caso, la cabaña para este fin. A continuación se detallan los lugares o divisiones necesarios:

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Sala de Laboratorio: Sin llegar a ser muy sofisticada, debe contar con luz y una calefacción adecuada, al igual que agua corriente (en lo posible caliente y fría) y alguna mesada y armario para procesar el material seminal y guardar el instrumental. Sala de Siembra: Se encuentra pegada al laboratorio y contará con las comodidades necesarias para inseminar los animales, según las diversas técnicas de sujeción de los mismos. Deberá tener además una fosa bajo nivel en la que se ubicará el operario para inseminar parado o sentado. Sala de extracción del semen: Para la correcta realización de este trabajo, se puede contar con una habitación especialmente destinada a esto y aislada del resto, para poder trabajar en las condiciones de tranquilidad que requiere esta operación. En el caso de la Escuela, contamos con una rampa elevada que tiene un cepo para sujetar a la oveja en celo en uno de los extremos y del otro lado una rampa para que suba el carnero. Sala de sujeción: Puede estar separada de la sala de siembra a través de una pared, o no, y es aquí donde se sujeta a la oveja para que el inseminador pueda trabajar con comodidad. Para ello el operador puede valerse de algún dispositivo móvil, llamado carrito, que es donde introduce a la oveja y la sujeta o directamente apretarla contra alguna pared. Es importante que el operario que trabaja aquí mantenga al animal lo más quieto y tranquilo posible. Corrales y manga: Generalmente se utilizan los ya existentes en el establecimiento y es aquí donde se apartan los retajos y las ovejas en celo del resto del lote. En caso de hacer la Inseminación Artificial en el campo con alguna casilla se pueden armar corrales portátiles y para su construcción se utilizan tablones de madera sujetados al piso con piquetes de hierro. Una vez nombradas las instalaciones mínimas necesarias para hacer la Inseminación Artificial nombraremos los materiales o instrumentos que se necesitan en el laboratorio. Vagina artificial: La utilizamos para obtener el semen del carnero y, como su nombre indica, semeja la vagina de la oveja, porque provee estimulación térmica (temperatura) y mecánica (presión) para producir la eyaculación. Está constituida por un tubo rígido, de tipo manguera de Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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VAGINA ARTIFICIAL ARMADA


radiador, que cuanto más gruesa es, mantiene más el calor. Puede medir de 20 a 30 cm de largo y de 6 a 8 cm de diámetro. Dentro de este tubo pasa otro de látex cuyos extremos se reinvierten en los extremos de la manguera formando de esta manera una cámara hermética que se llena con agua caliente a través de un grifo ubicado en uno de sus laterales. Además cuenta con una válvula que utilizamos para soplar y colocar aire a la vagina artificial y darle de esta manera la presión deseada. Por último, en uno de sus extremos lleva un cono de látex más grueso, que lleva adosado en su extremo un tubo colector y graduado. Vaginoscopio: Se utiliza para realizar el examen de la vagina y para ubicar el cuello uterino al momento de llevar a cabo la Inseminación Artificial. Por su interior se introduce la cánula de la pistola dosificadora de semen. El vaginoscopio consta de un tubo cónico, que mide entre 10 y 20 cm de largo aproximadamente, pudiendo ser de metal cromado o plástico. En ángulo de 90 º, este tubo tiene un mango por donde se sujeta y, en el interior del mismo van las pilas que serán la fuente de energía para la lamparita de 3 voltios ubicada en el interior y cuya luz es suficiente para visualizar los detalles del interior de la vagina. Pistola dosificadora del semen: También llamada pistola inseminadora, consta de una cánula de vidrio larga que va adosada a una jeringa protegida con una armazón metálica. El émbolo es movido por una varilla dentada que se acciona por un gatillo, o sea que, al gatillar, se va moviendo el émbolo y saliendo el material contenido en el interior de la jeringa. Tubo colector graduado: Utilizado para recoger el semen. Es de vidrio y trae una graduación, para que, en el momento de obtener el salto del carnero se pueda hacer una valoración cuantitativa del semen.

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Baño de María: Es de vital importancia para poder mantener en buenas condiciones el material seminal cuando se hace la Inseminación Artificial con semen fresco. En el mercado se venden unos recipientes que calientan el agua a la temperatura adecuada y la mantienen a través de un termómetro que tiene incorporado. Otro método más práctico es fabricarla con un recipiente de telgopor con tapa a la cual se le hace unos orificios para colocar ahí los vasitos recolectores. Vaselina neutra: Se utiliza en poca cantidad para lubricar la vagina artificial al momento de obtener el salto. Termómetro: Se utiliza para saber la temperatura de la vagina artificial al momento de la extracción del semen y, evitar así exceso de temperatura, que podría quemar al carnero, o falta de temperatura, provocando que el carnero no eyacule. Microscopio: Sirve para realizar los exámenes del semen obtenido, tales como: recuento de espermatozoides, movilidad individual, etc. Tubos de ensayos graduados: Se pueden utilizar para preparar el diluyente y realizar las diluciones del semen de manera correcta. Portaobjetos, cubreobjetos: Se utilizan para observar los espermatozoides al microscopio. Detergente neutro, agua destilada, cepillos de cerda redondos: Para el lavado del instrumental. Planteo de la Inseminación Artificial Este párrafo se referirá a todo lo relacionado con el marcado de la hacienda lanar. Se describirá el manejo de los retajos, pintura, recambio, manejo del carnero para la recolección del semen, preparación de la vagina artificial, etc. Época de inicio de los trabajos El ciclo sexual del ovino se repite durante varios meses, generalmente en abril, mayo, junio, y julio, o sea, que se realizará la Inseminación Artificial en el transcurso de los mismos. Duración de la Inseminación Artificial

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Muchos factores regulan el tiempo que se dedicará a Inseminación Artificial, siendo uno de los más importantes la calidad y cantidad de potreros que dispone el establecimiento. El tiempo de duración se divide en períodos, que corresponden al del celo o estro del ovino, cuyo promedio de duración es de 17 días. Es difícil precisar con exactitud el promedio de duración de la Inseminación Artificial en el sur, pero a modo de guía, se observa que varía entre 1 y 3 celos. Alimentación de las madres Como dijimos anteriormente, la importancia de tener buenos campos es un factor de éxito en el logro de la Inseminación Artificial. Si bien, el ingreso de alimentos es importante tanto en carneros, como en ovejas, son éstas últimas las que como madres deben responder a un doble objetivo: producir crías normales y proteger y reparar sus propios tejidos. Si la alimentación no cubre estas exigencias, la madre debe recurrir a otras fuentes de nutrientes. Debido a lo intensivo del trabajo de Inseminación Artificial, se observa que las madres decaen en forma notoria y, es por esto que, en algunos casos hay que recurrir a la suplementación de la disponibilidad forrajera, ya sea a través de fardos de alfalfa, pellets o cualquier otro pasto que se consiga. Como contrapartida a este punto tenemos el valor que implica la compra de estos productos, debido a que aquí, en el sur, el flete de los mismos encarece considerablemente los costos. Pintura de los retajos Una vez que las ovejas están cerca de los potreros de la estancia, se procede a organizar el trabajo con los retajos. Se dividen los mismos en dos lotes y la mitad comenzará a trabajar inmediatamente y el resto quedará para recambio. Se pintan los retajos en el pecho o vientre, a fin de que la marca que impriman en la oveja en celo sea perfectamente legible al momento de la “mangueada”. Trabajo de los retajos El primer día que se largan los retajos aparecerá un alto porcentaje de animales marcados, que se debe a la gran cantidad de ovejas en celo y al exceso de líbido de los retajos. En lo posible, nunca se largan los retajos con las ovejas en los corrales, ya que éstos podrían marcar las ovejas por el solo hecho de amontonarse. Entonces se largan una vez que las ovejas ya se encuentran en el potrero destinado a este fin. El lote de retajos trabajando se repone por el otro en descanso, diariamente, por regla general, aunque se puede hacer cada tantos días.

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Organización de los movimientos y aparte de las ovejas marcadas Generalmente el aparte de las ovejas en celo se realiza en los corrales de la estancia. El rodeo se realiza lo más temprano posible, calculando el horario en que aclara para no tener los animales encerrados en el corral; en invierno recién a partir de las 9,30 hs se comienza a ver algo. Mediante la manga se clasifican tres grupos de animales: el primero, que está formado por la mayoría, y sale generalmente derecho, es el de las ovejas que no están en celo; en el segundo se apartan las que están en celo (marcadas) y, en el último, los retajos. El hombre encargado de separar los animales en la manga debe tener práctica, para realizar una buena labor y apartar solamente las ovejas que están bien marcadas en la zona de la grupa. Cuando la Inseminación Artificial se plantea para hacer dos siembras diarias, el trabajo de aparte se realiza también dos veces al día. Pero la experiencia en nuestra zona sugiere que los resultados finales son muy similares, con una siembra o dos, debido a que un solo aparte diario nos representa más ventajas, no sólo desde un punto de vista práctico, sino que además los animales no están tan “corraleados”. Una vez terminado el trabajo en la manga las ovejas marcadas se llevan a la sala de la “siembra” y las que no fueron montadas se devuelven al potrero para después “echarles” los retajos. Recolección del semen Habiéndose organizado los trabajos con la hacienda, describimos a continuación las técnicas empleadas para la recolección del semen. Prácticamente todos los inseminadores utilizan la vagina artificial, pudiéndose recurrir a la electroeyaculación en circunstancias apremiantes.

La recolección del semen se realiza momentos antes de la inseminación, debido a que la experiencia indica que la utilización del semen fresco o recién extraído es de mayor fertilidad. Esta razón hace que en general siempre se trabaje con el semen del día, o a lo sumo, de la tarde anterior.

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Técnica de la vagina artificial La vagina artificial es una imitación de la vagina de la oveja y provee una estimulación térmica (temperatura) y mecánica (presión) necesarias para producir la eyaculación del carnero. La vagina artificial se carga con agua a 48 ºC a 50 ºC y, luego se le coloca aire a través de una válvula alojada al costado del tubo hasta lograr la presión adecuada. Por último se lubrica el interior de la misma con algún lubricante neutro, que no tenga acción nociva sobre los espermatozoides, por ej: vaselina neutra. La temperatura de la vagina justo antes de la recolección no debe superar los 45 ºC, variando según el carnero. Una temperatura muy baja provocará que el animal salte pero no eyacule, por falta de excitación sobre los centros nerviosos y, una temperatura muy alta, puede acobardar al animal de tal manera que se corre el riesgo de que ese carnero no vuelva a saltar. ESTIMULACIÓN MECÁNICA La recolección del semen se hará en un lugar (PRESIÓN) limpio y libre de polvo. La hembra que se utilizará deberá estar en celo, para provocar el interés del macho. Se la asegura mediante un cepo y puede estar directamente en el piso o tener una rampa para que el operador trabaje más cómodo. Una vez preparado para sacar el salto, se trae al carnero hacia el lugar donde está la oveja y se espera al costado de éste, para que luego de unos minutos, salte. El operador debe estar preparado para una monta y eyaculación veloz. Cuando el macho salta, se desvía el pene para introducirlo dentro de la vagina artificial. Un “golpe” hacia arriba y hacia delante indica que la eyaculación ha ocurrido. Inmediatamente después del salto, el tubo de recolección se coloca en un Baño de María a 35 ºC – 37 ºC. Análisis del semen El análisis del semen es un elemento primordial para comprobar la capacidad funcional del mismo. Luego de su recolección es importante que, en todo momento, el semen se mantenga protegido de los cambios bruscos de temperatura, del contacto con el agua y metales, de la radiación solar directa, e impurezas. Por lo tanto, todo el material que entre en

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contacto con el eyaculado, deberá ser de vidrio o plástico, estar esterilizado y seco, y a la misma temperatura que el semen. El volumen y concentración espermática deben ser estimadas antes de su utilización, para realizar una correcta dilución según el volumen y número de espermatozoides totales a inseminar por dosis. El volumen promedio del eyaculado del carnero es de 1 ml (0,7 ml a 3 ml) y su concentración varía entre 2.000 y 6.000 millones de espermatozoides/ml. Podemos dividir al análisis que realizamos sobre el material seminal en dos: A- Inspección visual macroscópica B- Observación microscópica A- Se realiza inmediatamente después de la recolección, percibiéndose en líneas generales, las condiciones físicas tales como volumen, color, densidad, olor y movilidad en masa. Volumen: es la cantidad de semen de un eyaculado y está condicionado por diferentes factores como:  Edad del animal (los adultos producen eyaculados más voluminosos);  Alimentación adecuada y abundante durante todo el año;  Ritmo sexual, que es el régimen por el que el animal habituado a saltar diariamente, eyaculará más que otro que lo hace solo de vez en cuando;  La excitación, condicionada por una serie de factores nerviosos y externos que influyen directamente sobre el volumen, y que el operario puede regular en gran medida.  Estado general del animal: aparte de los factores ya mencionados, una buena sanidad, dosificación periódica, vacunación en caso de ser necesario, etc., pero fundamentalmente, un buen manejo. Color: Salvo contaminaciones con pus o sangre, el color está condicionado por la concentración espermática. Un semen de alta concentración, 3.000 a 4.000 millones de espermatozoides por mm³ será por lo general de un color blanco cremoso. Cuando la concentración es de 2.000 a 2.500 millones espermatozoides por mm³, tendrá un color blanco mate. Cuando la concentración está por debajo de los 2.000 millones, el color característico es blanco lechoso y, cuando está por debajo de estos valores, es transparente (incoloro). Olor: El semen normal del carnero es inodoro.

Movilidad en masa: Es la apreciación visual de los movimientos en ondas en el mismo tubo colector, donde se recogió el eyaculado.

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Entre otras cosas la movilidad está condicionada por la concentración espermática, la intensidad de movimientos, y la proporción de células vivas y muertas. B- Observación microscópica: Manteniendo el semen a una temperatura fisiológica, 37 ºC, observando al microscopio obtendremos los datos referentes a la movilidad de los espermatozoides. 1- Con pequeño aumento, muestra la movilidad en masa. 2- Con gran aumento, nos permite observar la movilidad individual. En cuanto a la observación de la actividad propia de los espermatozoides, los podemos clasificar de la siguiente manera: 1) Movimiento rectilíneo: Por la energía que poseen los espermatozoides, consiguen el máximo de proyección hacia adelante. Este movimiento se observa en un semen de alta viabilidad y elevado índice de fertilidad.

2) Movimiento zigzagueante: el avance hacia delante se efectúa siguiendo un recorrido vacilante, con frecuentes curvas y tanteos a ambos lados.

3) Movimientos circulares: Con velocidad reducida, el espermatozoide describe círculos en forma de espirales, como si hubiese perdido el rumbo de su recorrido.

4) Movimiento oscilatorio: Las células germinales prácticamente no cambian de sitio, pero hacen movimientos reducidos hacia ambos lados. Colean sin avanzar, siendo esta la forma de movimiento que antecede a la inmovilización completa.

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Conviene tener presente que el movimiento rectilíneo es fundamental para la fecundación, ya que es el único progresivo. Este movimiento, con las contracciones de los cuernos y oviductos, permite a los espermatozoides llegar en pocos minutos a las trompas uterinas. Estimación de la concentración espermática Analizada la movilidad de la muestra de semen, interesa conocer la cantidad de espermatozoides con respecto a la unidad. Esta cifra relacionada con el valor conocido del volumen eyaculado del carnero nos permite calcular el número total de espermatozoides, de gran utilidad en la determinación de la capacidad fecundante del macho. Dos de las técnicas más difundidas para este fin son: Método de apreciación visual: Aplicando la siguiente escala puede hacerse una evaluación cuyo margen de error no afectaría las dosis espermáticas necesarias por dosis inseminante: Puntaje

Consistencia

Cant.Espermat./cm³

5 4 3 2 1 1

Espeso-cremoso Cremoso Cremoso liviano Lechoso Nuboso Aguachento

5.000.000.000 4.000.000.000 3.000.000.000 2.000.000.000 700.000.000 Insignificante

Recuento Espermático Microscópico Para hacer este análisis se necesitan los siguientes elementos: cámara cuentaglóbulos y pipeta; solución alcohólica de azul de metileno y microscopio. Después de asegurarse de que los espermatozoides se hallan uniformemente distribuidos en la masa total de la muestra de semen, se aspiran 0,5 ml con la pipeta. Se completa la carga de la pipeta con diluyente hasta la marca de 1,01 ml y, con esto se obtiene una dilución del semen al 1/200. Se agita suavemente la pipeta para asegurarse de que los espermatozoides se mezclen en el bulbo. Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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Entre tanto, se ha preparado la cámara cuentaglóbulos colocando el cubreobjetos especial sobre el centro de la misma. A continuación se vierte la parte del líquido que ha quedado en la columna capilar por estar mal mezclado y, se deja caer una gota correcta en el borde del cubreobjeto, con lo cual, el líquido se extiende uniformemente en toda la superficie de la cámara. Con el microscopio se cuentan los espermatozoides contenidos en cinco de los cuadrados grandes del retículo, y el total se multiplica por 10.000, obteniendo de esta manera la cantidad de espermatozoides por mm². Para conocer la cantidad total del eyaculado, se multiplica por la cantidad de mm obtenidos del mismo. A pesar de que la realización de todas estas pruebas o exámenes para obtener una información cabal sobre las aptitudes de una muestra de semen, su realización no siempre es factible en los laboratorios de campaña, ya sea por exigir equipos completos y que requieren personal entrenado. Por razones de practicidad, con una buena apreciación visual y utilizando la escala que vimos anteriormente, se puede realizar un buen trabajo. Dilución del semen y siembra La dilución del semen se lleva a cabo por razones técnicas y biológicas: Razones técnicas: Incrementar el volumen de eyaculado para inseminar un gran número de hembras (uso intensivo del padre). Razones biológicas: Proveer a los espermatozoides nutrientes y protección contra el enfriamiento y congelamiento. Un diluyente adecuado debe reunir estas características principales: a- Mantener la capacidad fertilizante de los espermatozoides durante el mayor tiempo posible, lo que se consigue: - ofreciendo un medio físico-químico satisfactorio - Conteniendo un agente amortiguador (buffer), que mantenga el pH normal (6,8) - Proveyendo principios nutritivos b- Debe prepararse fácilmente, con sustancias que se encuentren en el mercado c- Que sean de bajo costo. Los diluyentes que se utilizan para semen fresco pueden ser sintéticos o naturales (leche de vaca).

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Diluyentes sintéticos Los diluyentes sintéticos comúnmente utilizados en la dilución del semen del carnero para Inseminación Artificial contienen tris o citrato de sodio como buffers, glucosa o fructosa como fuente de energía, y yema de huevo como protector de las membranas de las células espermáticas contra eventuales golpes de frío. Se recomiendan los siguientes diluyentes sintéticos: Diluyente yema de huevo, tris, glucosa Tris Glucosa Ácido Cítrico Agua destilada hasta

3,630 gr. 0,500 gr. 1,900 gr. 80 cc

Diluyente yema de huevo, glucosa, citrato Citrato de sodio Glucosa Yema de huevo Agua destilada hasta

2,37 gr. 0,80 gr. 20 ml 100 ml

Para la preparación de los diluyentes se deben pesar los químicos en primera instancia y disolverlos en 75-80 ml de agua destilada. Luego del agregado de la yema de huevo que complete el volumen final (100 ml), se mezcla el diluyente invirtiendo la probeta varias veces. La yema debe ser fresca, proveniente de un huevo del día. Se lava cuidadosamente la cáscara, se esteriliza con un paño mojado con alcohol y se deja secar. Luego de separar la clara, se coloca la yema en un papel absorbente, cuidando que no se rompa la membrana. Luego con una jeringa se extrae desde el interior de la yema la cantidad necesaria de la misma. La dilución se hace en base a: a- La cantidad de ovejas en celo para inseminar b- Cantidad de semen obtenido Un buen carnero puede dar una media de 1,2 cm³ de semen en uno o dos saltos diarios, habiendo animales que pasan ampliamente esta cantidad. Si el semen es bueno, contendrá por lo menos 3.000 millones de espermatozoides, pero frecuentemente contienen más. Con una simple dilución de uno:uno (también se pueden hacer diluciones mayores) se consiguen 2,4 cm³ de material seminal, utilizando 0,2 cm³ por oveja, teóricamente se Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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fecundan 12 animales por carnero y por salto. En cada oveja se introducirán por lo menos 200 millones, cantidad necesaria para lograr una buena fecundidad. Para el proceso de dilución del semen propiamente dicho, conviene verter el diluyente en el recipiente que contenga el semen. Inseminación de las ovejas Manejo de los animales en celo Una vez apartadas las ovejas marcadas por los retajos, se arrean hasta las instalaciones para inseminar. Se presta especial atención a que todos los animales apartados estén bien marcados, caso contrario, se apartan los dudosos, seguramente producto de un roce en el corral. Sujeción del animal Anteriormente se mencionaron elementos tales como plataformas o carros, que fueron ideados para realizar una mejor y más rápida labor. Lo principal de este trabajo es que el animal se presente al inseminador lo más quieto y tranquilo posible para facilitar de esta manera el proceso de siembra. Momento de la inseminación Analizando la fisiología de la reproducción, vemos que el celo en la oveja dura aproximadamente de 24 a 48 hs. En ese interín se produce la maduración folicular, presumiblemente de la mitad en adelante del estro, siendo, por lo tanto el momento indicado para inseminar. En la práctica, es difícil hacer coincidir la siembra con el momento ideal del celo especialmente, cuando ésta se realiza una sola vez por animal y por día. En nuestra zona se acostumbra hacer dos siembras, una por la mañana y otra por la tarde, pero en distintos animales, es decir, que se inseminan una sola vez. En la práctica, hacer un aparte diario e inseminar o hacer dos apartes y siembras por día, no muestra diferencias significativas en los porcentajes de pariciones. Preparación de la pistola inseminadora El armado se hace fácilmente montando en primer lugar el portaémbolo y agregándole luego la cánula de vidrio. Antes de esto, se puede lubricar el émbolo con el semen para que se deslice más fácilmente la cánula. Apunte de Inseminación Artificial en Ovinos

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Inseminación Presentado el animal por los ayudantes el inseminador introduce el vaginoscopio en la vagina de la oveja. En caso de lubricar el vaginoscopio se cuenta con un recipiente para lubricante y un trozo de algodón o papel absorbente. Mediante el vaginoscopio se localizan el cuello uterino y el conducto cervical (orificio externo), generalmente cubiertos por las lengüetas de la mucosa y la secreción del estro. Con la mano derecha se introduce la pistola dosificadora y con la ayuda de la cánula se hace correr el flujo hacia el exterior. Localizado el cuello se llega con la cánula hasta el orificio del conducto. Antes de gatillar la pistola, se extrae el vaginoscopio algunos mm y se realiza la siembra o inseminación. La extracción previa del vaginoscopio es indispensable para evitar que, por contacto con el animal, el material seminal refluya a la vagina. Queda terminada la operación cuando el inseminador retira la pistola y consecutivamente el vaginoscopio.

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Acondicionamiento del material utilizado. Todo el instrumental utilizado deberá ser limpiado y esterilizado. Será importante remojar el material en agua con detergente neutro inmediatamente después de ser utilizado. Para el lavado de pipetas, se recomienda dejarlas en remojo cambiando varias veces el agua. Luego se lavará teniendo especial cuidado con el enjuague, primero con agua común y a continuación varias veces con agua destilada. El material así tratado se dejará secar en estufa.

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El material de vidrio, previamente envuelto en papel de aluminio, se esterilizará en autoclave, llevándolo a una temperatura máxima de 165 ºC, por lo menos durante una hora. El material de plástico se esterilizará con alcohol al 70%, dejándolo escurrir aproximadamente una hora. La parte externa de la vagina artificial no necesita esterilización después de lavada. La parte interna se esterilizará con alcohol al 70% antes de ser utilizada.

COMENTARIO FINAL El trabajo de Inseminación artificial es de fundamental importancia cuando se busca lograr un mejoramiento genético. Como vimos anteriormente, la técnica de siembra o inseminación propiamente dicha es lo que menos espacio nos ocupó, pues al ser algo sistemático, con el hecho de inseminar un número bajo de ovejas, ya nos queda grabada la forma correcta de llevar a cabo esta técnica. Para lograr buenos resultados, debemos hacer especial hincapié en el manejo de los corrales, apartando solamente las ovejas que estén bien marcadas por los retajos, por más que sean un número bajo. Otro tema de vital importancia es el del manipuleo del semen, con materiales perfectamente limpios y esterilizados.

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