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INFORME DE RESULTADOS DEL EXAMEN PRÁCTICO Ciclo Superior de Análisis y Control de Calidad Módulo:Ensayos Microbiológicos FECHA: Del 4/06/2012 al 8/06/2012

Pruebas realizadas: 1.Análise de agua. a)Muestra A.Recuento de Esporas Clostridium Sulfito Reductores. b)Muestra B.Recuento de Coliformes Fecales(FM) 2.Con cepa de alumno c)Prubeas bioquímicas 3.Reducción de nitratos. 4.KIA d)Estudio de la movilidad mediante preparación en gota pendiente. 3)Antibiograma 3.Análisis de ambientes.


PROGRAMACIÓN

LUNES(4/06)

MARTES(5/06) MÉRCORES(6/06)

Programación de exames.

JUEVES(7/06)

Filtración de membrana

Observación de resultados y expresión

Prueba bioquímica KIA

Observación de resultados y expresión

VIERNES(8/06)

Prueba Expresión de bioquímica.Reducción resultados de nitratos An.de agua: Recuento de esporas de Clostridium Sultito Reductoras

Observación a 24h

Expresión de resultados

Preparación gota pendiente Preparación en caldo M-H

Realización de antibiograma

Expresión de resultados

Preparación de AG

Análisis de ambiente

Expresión de resultados

INFORME 1.a)Muestra A.Recuento de Esporas de Clostridium Sulfito Reductoras. -FECHA DE ANÁLISIS: Del 06/06/2012 al 08/06/2012 -MUESTRA: Muestra de agua del canal de riego cruzando una explotación ganadera de vacuno debajo de una granja de porcino.La muestra se toma en el centro del canal a unos 50cm de profundidad sin que interfiera el sustrato.Fecha de recogida: día 06/06/2012 a las 07:45am.El transporte al laboratorio se ha realizado dentro de la primera hora desde la recogida y fue mantida refrigerada a 4ºC hasta realización de los ensayos. -OBJETIVO: Determinar la ausencia o no de esporas de Clostridium Sulfito Reductoras en un agua.


-MEDIO DE CULTIVO: Agar SPS -REACTIVOS: No se utilizan en este análisis -PROCEDIMIENTO: -Día 1: Someter la muestra de agua de 20mL a un choque térmico en un baño a 80ºC durante 10minutos(tubos boca ancha de 20x25).Añadir el medio agar SPS que mantenemos a 60ºC en un baño. Incubación: 37ºC durante 24h -Día 2: Observación de resultados a 24h. -Día 3: Expresión de resultados. -EXPRESIÓN DE RESULTADOS: Presencia de gas Ausencia de esporas de Clostridium Sulfito Reductoras: Menos de 1UFC/20mL de muestra -OBSERVACIONES: No utilicé Agar Blanco porque me olvidé de pedirlo en la ficha de medios.En lugar de AB utilicé aceite de uso alimentario.


1.b) Muestra B. Recuento de Coliformes Fecales(FM). -FECHA: Del 06/06/12 al 07/06/2012 -MUESTRA: Agua embotellada destinada a consumo humano -OBJETIVO: Determinar si la muestra contiene microorganismos contaminantes mediante la técnica filtración por membrana.De existir, hacer un recuento de colonias desarrollada Coliformes Fecales: Subgrupo de los Coliformes Totales.Fermentan la lactosa con producción de ácido y gas en 24-48h en temperaturas entre 44 y 45ºC. -MEDIOS DE CULTIVO: Agar FC( se añade el aditivo ácido rosólico) -REACTIVOS: No se utilizan -PROCEDIMIENTO: Referencia al tema 8 del moodle -Día 1(6/06/12): Filtramos 100mL de la muestra utilizando un disco de filtro de membrana estéril. Depositamos el filtro en la placa de EMB Incubación: 44,5ºC ± 0,22 º C 24h. -Día 2(07/06/2012): Observación de colonias azules.Recuento de colonias -EXPRESIÓN DE RESULTADOS: Menos de 1 UFC/100ml de muestra -OBSERVACIONES: En lugar de Agar FC utilizamos EMB El error de que haya tantas colonias puede ser que la muestra no fuera previamente diluída.


2.Pruebas con cepa de alumno 3.Reducción de nitratos -FECHA: Del 6/06 al 7/06/2012 -CEPA: 3009,Mycobacterium phlei -OBJETIVO: Determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos -MEDIOS DE CULTIVO: Caldo nitrato -REACTIVOS: Reactivo de Griess A y B Zinc -PROCEDIMIENTO: -Día 1: Inocular el caldo nitrato(tubo de 10x15 con campana Durham) con nuestra cepa con una asa curva.Incubar 37ºC 24h. -Día 2: Añadir al caldo nitrato inoculado 1mL aproximadamente de Reactivo A y luego de Reactivo B.Cambia a color rojo dentro de los 30primeros segundos. -OBSERVACIONES: Deberíamos utilizar zinc para determinar si realmente es positivo. -EXPRESIÓN DE RESULTADOS: No hay presencia de gas Reacción positiva. 4.KIA -FECHA: Del 6/06 al 7/06/2012 -CEPA:3009,Mycobacterium phlei -OBJETIVO: Determinar la capacidad de un microorganismo para atacar un carbohidrato específico empleando un medio de crecimiento básico,con producción o no de gases junto con la producción de ácido sulfhídrico. -MEDIO DE CULTIVO: Agar hierro de Kliger -REACTIVOS: No se emplean en esta prueba


-PROCEDIMIENTO: -Día 1: Inocular el medio con asa recta por el método de siembra por picadura en el fondo del tubo y siembra por estría en la superficie inclinada. Incubación a 37ºC durante 24h -Día 2:Observación de resultados. -EXPRESIÓN DE RESULTADOS: Ácido/ácido,gas → Utilización de lactosa y glucosa.Producción de gas.

d)Estudio de la movilidad mediante preparación en gota pendiente. -FECHA: 7/06/2012 -CEPA: 3009,Mycobacterium Phlei -OBJETIVO: Determinar la movilidad característica de la bacteria viva -PROCEDIMIENTO: Echar vaselina por los cuatro bordes del cubreobjetos en un solo lado.Quemar el asa y poner unha gota de agua en el porta.Descargar el cultivo sobre la gota.Se coloca la concavidad hacia abajo y despositar en el cubreobjetos.


-EXPRESIÓN DE RESULTADOS: La bacteria Mycobacterium phlei tiene movimiento vital.

e).ANTIBIOGRAMA (Técnica de difusión de Agar o de Kirby-Bauer) -FECHA: Jueves,7/06/2012 -DEFINICIÓN: Es una prueba en la que se enfrenta la bacteria,inoculada sobre la superficie de un medio sólido a una soluión antibiótica absorbida en discos de papel de filtro o en pastillas.La ausencia de crecimiento en las inmediaciones del disco crea un halo de inhibición a su alrededor. -CEPA: Mycobacterium phlei, 3009 -MEDIOS DE CULTIVO: -Caldo de cultivo Mueller-Hinton(M-H) -Agar Mueller-Hinton -REACTIVOS: Discos de celulosa impregnados en diferentes antibióticos. Antibiótico

[μg,U]

Ø(mm)

Diagnóstico

Tetraciclina

30μg

20

R

I

S

Penicilina

10U

No definido

R

I

S

Ampicilina

10μg

11

R

I

S

3.Análisis de ambiente.Investigación de hongos y levaduras en ambiente de laboratorio -FECHA: Del 7/06 al 8/06/12 -MUESTRA: Ambiente del laboratorio de Microbiología del instituto. -OBJETIVO: Determinar la presencia de hongos y levaduras en ambiente de laboratorio mediante la técnica de sedimentación -MEDIO DE CULTIVO: Agar Saboreaud. -REACTIVOS: No se utilizan en este análisis. -PROCEDIMIENTO: -Día 1:Fundir el medio(tubo 10x15 ½) y emplacar.Dejar la placa en el punto del laboratorio donde se desea realizar la muestra una media hora. Incubación: 28ºC durante 24h


-Día 2: Observación de resultados. -OBSERVACIONES: El medio utilizado fue caldo glucosado. La temperatura de incubación no era exacta y no se mantuvo el tiempo necesario,unos cuatro o cinco días, de incubación.El motivo es por falta de tiempo dado que el examen se empezó el miércoles y terminó el viernes. -EXPRESIÓN DE RESULTADOS: Para expresar los resultados utilizamos la ecuación: nºUFC/m3=NCx 1000/30x UN Según da ecuación el resultados es: nºUFC/m3=1x1000/30x 30 =1,1 UFC/m3


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