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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO CÁTEDRA: UROANÁLISI I DOCENTE: Lic. Iván Peñafiel SEMESTRE: Tercero ESTUDIANTE: Joseline Frías

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN TEMA: Principios y Fundamentos de Equipos Automatizados utilizados en Análisis de Orina y cada uno de los Parámetros que se Reportan

Riobamba-Ecuador


.OBJETIVO GENERAL: Determinar principios y fundamentos de Equipos Automatizados Utilizados en Análisis de Orina y cada uno de los Parámetros que se reportan. OBJETIVOS ESPECÍFICOS: •

Conocer cuáles son los equipos automatizados utilizados en el análisis de orina.

Conocer cuáles son los parámetros a reportar dentro del análisis de orina.

Determinar las ventajas y desventajas del uso equipos automatizados en el análisis de orina.

Identificar la confiabilidad de los resultados emitidos por los equipos en el análisis de orina.

CONTENIDO La automatización cabe resaltar, no es de carácter universal. En nuestro país la mano humana Aun es el principal instrumento de trabajo en los diferentes procesos de laboratorio. El uso combinado y conjunto de la informática, la robótica y los analizadores para manipular las muestras antes, durante y después de las mediciones. Se utilizan

combinaciones de aparatos mecánicos o instrumentos para mejorar,

extender, o suplementar los esfuerzos y capacidades humanas en la realización de un proceso dado, en el que al menos una operación mayor está controlada, sin intervención humana VENTAJAS •

Optimiza tiempo

Mayor rendimiento Laboral.

Facilita la estandarización (elimina fases de preparación de la muestra)


Disminuye la subjetividad

DESVENTAJAS •

Costo proporcional a las bondades.

Muestras Turbias se deben analizar manualmente.

Las muestras de orina se han descrito como una biopsia líquida de los tejidos de las vías urinarias, obtenida en forma indolora; se trata de un material que permite obtener información de forma rápida y económica, lo que no impide que los análisis de orina se efectúen de forma cuidadosa y controlada. El análisis de orina de rutina incluye pruebas químicas para pH, gravedad específica,

proteínas,

glucosa,

cetonas,

sangre,

leucocitos,

bilirrubinas,

urobilinógeno y nitritos. Desde la introducción de las tiras reactivas múltiples, el examen de orina se ha convertido en un procedimiento sensible y más rápido; actualmente es posible analizar hasta diez pruebas diferentes en menos de sesenta segundos. Por otra parte los equipos de lectura automatizada de tiras reactivas, para uroanálisis, diseñados para medir la intensidad de las reacciones y eliminar las variaciones dadas por el observador, proporcionan resultados más confiables por la incorporación de circuitos específicos para la lectura de la reacción química de cada elemento.

TIRAS REACTIVAS:


Los resultados obtenidos con las tiras reactivas proporcionan información referente al metabolismo de carbohidratos, función hepática y renal, balance ácido-base e infecciones de las vías urinarias. La medición de cada uno de los parámetros en las tiras, varía de acuerdo al objetivo de cada uno de los sitios de reacción. Combur 10 Test ® M (Roche, Alemania) En estas tiras reactivas, el papel reactivo y el absorbente están sujetos a un soporte de plástico blanco, con una fina malla de nylon laminada. Las áreas reactivas están protegidas contra contacto, contaminación y abrasión. Los campos de prueba que son susceptibles a interferencias (glucosa y sangre), contienen una malla impregnada de yodo para prevenir la fuerte oxidación por ácido ascórbico o vitamina C. Estas tiras tienen una sensibilidad del 98.0% y una reproducibilidad del 99.0%. Multistix ®10 SG(Bayer, México) Estas tiras reactivas son de base de plástico en las que hay adheridas diversas áreas reactivas para determinar glucosa, bilirrubina, cetona, gravedad específica, sangre, pH, proteínas, urobilinógeno, nitritos y leucocitos en orina. Las tiras reactivas tienen una sensibilidad del 93.6 %y una reproducibilidad del 95.0 %. Aunque se ha probado la eficacia, sensibilidad y reproducibilidad de las tiras reactivas para orina en los equipos Miditrón Jr II y

Clinitek 50, se observan diferencias en las lecturas de los

resultados obtenidos al procesar muestras recientes de orina, duplicadas. Esto tiene implicaciones clínicas importantes, ya que en ello se basa el médico para tomar decisiones diagnósticas o terapéuticas. PARAMETROS A REPORTAR LAS TIRAS REACTIVAS pH En las tiras reactivas utilizan dos indicadores, el rojo de metilo y el azul de bromotimol, que cubren la escala de pH entre 5 y 8,5 o 9. Los colores van del


anaranjado al amarillo y del verde al azul. Los resultados pueden informarse en unidades enteras o bien valores intermedios (media unidad). Si se necesita una lectura más precisa, pueden hacerse las mediciones utilizando un potenciómetro con electrodo de vidrio. El momento de lectura del pH no es un elemento crítico; sin embargo, es recomendable que el pH sea leído en forma inmediata ya que de este modo se evitarán lecturas erróneas por rebosamiento. Proteínas Este método colorimétrico se basa en el concepto conocido como "error proteico de los indicadores", un fenómeno que se caracteriza por que el punto de cambio de color de algunos indicadores de pH es diferente en presencia de proteínas. Por lo general el indicador cambia del amarillo al azul (o verde) entre pH 3 y pH 4, pero en presencia de proteína el cambio de color se produce entre el pH 2 y el pH 3. en consecuencia, en presencia de proteína se produce un "error" en el comportamiento del indicador. El indicador que se utiliza en el Multistix es el azul de tetrabromofenol 3’, 3’’, 5’, 5’’-tetrabromofenolsulfonftaleína, y el indicador del Combur-10 es el 3’, 3’’, 5’ 5’’-tetraclorofenol-3, 4, 5, 6-tetrabromo-fenolsulfonftaleína. En el área reactiva se agrega un amortiguador ácido para mantener un pH constante de 3, que en ausencia de proteinuria de un color amarillo. La aparición de color verde o azul indica la presencia de proteína con el Multistix; en el Combur-10, el color cambia al verde, la intensidad del color es proporcional a la cantidad de proteína presente. El tiempo de lectura en el Multistix no es un factor crítico, y puede leerse en forma inmediata. Para obtener una lectura semicuantitativa en el Combur-10, efectuar la lectura a los 60 segundos (seguir las últimas indicaciones del fabricante) el color del área reactiva debe compararse cuidadosamente con la carta de colores proporcionada. Los resultados por lo general pueden informarse como negativos o hasta 3+ o 4+.


Las dos marcas de tiras reactivas poseen diferentes áreas blanco, de modo que no son clínicamente intercambiables. Los valores de las diferentes lecturas se muestran en la tabla 2. Tabla.- Valores de proteínas en diferentes tiras reactivas Multistix

Combur-10

Trazas

5-20 mg/dL

6-20 mg/dL

1+

30 mg/dL

30 mg/dL

2+

100 mg/dL

100 mg/dL

3+

300 mg/dL

500 mg/dL

4+

Más de 2,000 mg/dL

Glucosa Con tiras reactivas impregnadas con la enzima glucosa oxidasa puede detectarse sólo glucosa. Estas tiras utilizan las dos reacciones enzimáticas secuenciales siguientes: Glucosa + O2 GLUCOSA OXIDASA ácido glucónico H2O2 + cromógeno PEROXODASA cromógeno oxidado + H2O El cromógeno que se utiliza varía con las diferentes tiras reactivas. Cetonas El Multistix contiene reactivos el nitroprusiato de sodio y un amortiguador alcalino. La reacción con el ácido diacético de la orina forma un color castaño. Esta tira no reacciona con acetona ni con el b -hidroxibutírico. El Multistix se lee a los 15 segundos y permite detectar niveles de ácido diacético hasta de 5-10 mg/dL. El cambio de color es de rosado ante a castaño, y la reacción se informa como:


negativa, trazas, cantidad moderada, gran cantidad, o como 5, 15, 40, 80 o 160 mg/dL. Con el Multistix pueden ocurrir resultados positivos falsos (trazas o menos) en los casos en que la muestra de orina sea muy pigmentada o cuando posee grandes cantidades de metabolitos de la levodopa. Algunas muestras con elevada densidad y pH pueden dar reacciones positivas falsas (trazas, 5 mg/dL). Debido a la especificidad del nuevo Multistix para determinación del ácido diacético, el reactivo para cetonas no da resultados positivos con controles que tienen acetona. El Cumbur-10 contiene los siguientes reactivos: nitroferrocianuro sódico, glicina y un amortiguador alcalino. El nitroferrocianuro de sodio y glicina reaccionan con el ácido diacético y con la acetona en medio alcalino formando un complejo color violeta. Esta tira reactiva es más sensible al ácido acético que la acetona; no permite detectar ácido b -hidroxibutírico. El Combur-10 se lee a los 60 segundos y permite detectar niveles de ácido diacético de 5-10 mg/dL y de acetona de 40-70 mg/dL. El color cambia desde el beige al violeta, y la reacción se gradúa de la siguiente forma: negativa, 1+ (5-40 mg/dL), 2+ (40-100 mg/dL), o 3+ (>100 mg/dL). Sangre oculta El procedimiento de detección de sangre oculta con tiras se basa en la actividad tipo peroxidasa de la hemoglobina y de la mioglobina, que catalizan la oxidación de un indicador por la acción de un peróxido orgánico. En el Multistix el indicador es el 3, 3’, 5, 5’-tetrametilbencidina y el peróxido orgánico. En el Multistix el indicador es el 3, 3’, 5, 5’-tetrametilbencidina y el peróxido de hidroperóxido de cumeno. El Combur-10 utiliza el indicador tetrametilbencidina y el peróxido es el 2,5-dimetil-2, 5-dihidro-peroxihexano. Ambas marcas de tiras reactivas permiten la detección de eritrocitos intactos, así como la hemoglobina libre y mioglobina. Los hematíes intactos de la orina se hemolizan al contactar con el taco reactivo. La hemoglobina liberada reacciona


con el reactivo dando puntos verdes sobre un fondo amarillo o anaranjado. Entonces, la presencia de hematíes intactos da una reacción de color verde punteado, mientras que la de hemoglobina libre y la mioglobina dan una coloración uniforma de color verde o del verde al azul oscuro. El Multistix se lee a los 25 segundos, y el color cambia del anaranjado al azul oscuro pasando por el verde. Por lo general permite detectar 5 a 15 hematíes intactos por microlitro o bien 0,0015 a 0,0060 mg/dL de hemoglobina libre. Los resultados se informan en una escala que va desde trazas hasta 3+ o gran cantidad. El Combur-10 se lee a los 60 segundos y el color cambia del amarillo al verde. La concentración más baja que puede detectarse es de unos 5 hematíes intactos/m L, o la cantidad de hemoglobina libre equivalente a 20 hematíes/m L. Bilirrubina y Urobilinógeno Las tiras reactivas se basan en la reacción de acoplamiento de una sal de diazonio con la bilirrubina en un medio ácido. Difieren, sin embargo, en la sal de diazonio utilizada y en el color que aparece. El Multistix contiene la sal 2, 4-dicloro-anilina diazonio, se lee a los 20 segundos y el color varía del ocre a diferentes tonos de canela (tostado) o púrpura. Se miden así 0,2- 0,5 mg/dL de bilirrubina. El Combur-10 contiene 2,6-dicloro-benceno-diazonio-tetrafluorborato, se lee a los 30-60 segundos, y el color cambia del rosado al rojo-violeta según la concentración de bilirrubina. La prueba permite detectar concentraciones de 0,5 mg/dL de bilirrubina. Los resultados con ambos tipos de tiras pueden informarse como 1+, 2+, 3+ o cantidad pequeña (débil), moderada o grande (fuerte). Para obtener resultados exactos el color de la tira debe ser comparado cuidadosamente con el de la carta de colores.


Nitrito En el Multistix, en el medio ácido del área reactiva el nitrito reacciona con el ácido p-arsanílico formando un compuesto de diazonio. Este compuesto se une luego con la 1, 2, 3, 4-tetrahidro-benzo (h) quinolina-3-ol produciendo un color rosado. La tira se lee a los 40 segundos. Cualquier grado de color rosa uniforme debe interpretarse como prueba de nitrito positiva y sugiere la presencia de 105 o más organismos por mL. de orina. El desarrollo de color rosa no debe considerarse como prueba positiva. Si el color rosado uniforme es débil es mejor verlo colocando la tira sobre el fondo blanco. En el Combur-10, una amina aromática, la sulfanilamida, reacciona con nitrito en presencia de un amortiguador ácido produciendo una sal de diazonio. Esta sal de diazonio se une luego con la 3-hidroxi-1, 2, 3, 4-tetrahidroxibenzo-(h)-quinolina, formando un colorante azóico. La intensidad del color rojo refleja la concentración del nitrito presente, pero no constituye un índice de la gravedad de la infección. La prueba se lee a los 30 segundos, y el color cambia del blanco al rojo pasando por el rosa pálido. El Uro-dip 10e Estas tiras de diagnóstico son convenientes para los análisis semicuantitativos. Ayudan en la determinación de hasta 10 analítos con significado clínico (Glucosa, pH, bilirrubina, urobilinogeno, proteínas, nitritos, sedimentación, glóbulos blancos, cetonas y presencia de sangre) con la base de un procedimiento objetivo y visual.


EQUIPOS SEMI-AUTOMATIZADOS

Son equipos lectores de orinas, en los que el operador pone los tubos de ensayo con las muestras de orina en el equipo, identificados con códigos de barras o con una identificación que determine el profesional de la sección. Este equipo dispensa automáticamente cantidades estandarizadas de la muestra de orina en cada segmento de una cinta correspondiente a cada uno de los parámetros. El equipo entrega un informe con la lectura de cada muestra. EQUIPOS AUTOMATIZADOS Centrífuga


Principios generales La centrifugación es una técnica de separación que se basa en el movimiento de las partículas impulsadas por la fuerza llamada “centrifuga”, que tiende a desplazarse lejos del centro de rotación. Esta técnica separa las partículas de un espécimen, de acuerdo fundamentalmente con su masa y su forma. No obstante, a fuerza centrífuga que actúa sobre una partícula depende también de la velocidad y del radio de giro (x), que es la distancia desde el centro de rotación hasta el extremo del recipiente donde está contenido el espécimen que se centrifuga. En la centrifugación, el valor de la aceleración centrifuga (G), en función de la velocidad de giro w es dado por la ecuación: G=(w)2.x= 4π2(rpm)2/3.600.x=0.01097(rpm)2.x Con el fin de reproducir las condiciones de centrifugación. La aceleración centrifuga suele expresarse como una aceleración relativa, o sea múltiplos de la aceleración de la gravedad g (981 cm/s). De esta forma, en cualquier centrifuga pueden reproducirse con exactitud las condiciones de centrifugación, pero de esta forma también si se desea centrifugar a 10.000g, en una centrifuga con un cabezal que tenga un radio de giro de 6 cm, la velocidad en rpm será distinta que en otra con un radio de 10cm. Centrífugas complejas Las centrifugas más complejas disponen de sistemas de control de temperatura para ajustarla a lo que se centrifugue. Estas centrifugas se denominan en general refrigeradas ya que normalmente cuando se produce calor a consecuencia del rozamiento durante la centrifugación lo que se requieren son temperaturas más bajas para conservar las bunas condiciones del espécimen. Para evitar el rozamiento, las centrifugas de gran velocidad de giro (ultracentrífugas) tienen sistemas al vacío del compartimento donde se aloja el rotor. En los laboratorios clínicos las centrífugas se usan principalmente para separar las células sanguíneas del plasma, obtener sedimentos urinarios para su estudio en el microscopio. La ultracentrífuga se emplea poco, debido al alto coste de las ultracentrífugas y a lo complicado de su metodología. Con este sistema se


consiguen grandes aceleraciones que y la separación rápida del plasma o de los elementos contenidos en un líquido. Otras tecnologías son los equipos automatizados de química clínica en los que se pueden hacer determinaciones cuantitativas de glucosuria, fosfaturia, calciuria, proteinuria, creatinina y clearence de creatinina, etc. Urisys 2400 es un sistema completamente automatizado de Uroanálisis

Características Sistema para Uroanálisis completamente automatizado para la lectura de las tiras reactivas URISYS 2400, con las siguientes características: •

Cassette de 400 tiras reactivas listas para usar, con estabilidad de dos semanas a bordo y protegidas de la humedad

Velocidad de proceso de 240 muestras por hora

Estabilidad de la calibración un mes

Auto muestreado con capacidad de carga continua

20 minutos de capacidad de operación totalmente desatendida (con carga de 75 muestras)

Posición para proceso de muestras urgentes

Manejo de muestras pediátricas (1.5 ml de muestra de orina)

Mínima exposición del usuario a los reactivos

Guía para manejo amigable y operación del software a través de una pantalla sensible al tacto a color (Touch screen)

Detección de la muestra a través de un sensor de detección de líquido


Resultados seguros garantizados por la adición de un volumen preciso en cada área de test

Medición cuantitativa de la gravedad especifica por Refractómetro

12 Parámetros: 9 Químicos, color, aspecto y S.G

Ventajas •

Totalmente automatizado

Mayor confiabilidad de los resultados;

Menor riesgo biológico;

Menor participación del operador

Mayor velocidad.

Tiras reactivos en cassettes de 400 tiras –

Sistema innovador;

Conveniencia y rapidez en el cambio de reactivos.

Estabilidad de las tiras "on board " de dos semanas –

Reducción de costos pues evita pérdidas de tiras debido a la humedad;

– •

Optimización de la rutina.

Calibración 1 vez por mes –

Reducción de costos

Mejor aprovechamiento del tiempo.

Rack de 5 posiciones –

Integración de laboratorio;

Disminución de errores por manipulación de muestras individuales.


Carga continua con capacidad simultánea de 75 muestras –

Reducción del TAT;

Facilidad de operación.

Muestras de emergencia –

Pantalla "touch screen" –

Liberación inmediata de los resultados urgentes.

Facilidad de operación.

Utilización de tubos primarios –

Disminución del riesgo biológico;

Evita errores de cambios de muestras.

Volumen de 1,5 mL

Principio o fundamento El examen físico-químico de orinas se realiza por medio del equipo URISYS 2400 con tiras reactivas Combur test- Chemstrip, las cuales se leen por fotometría de reflectancia. Las tiras reactivas vienen en un cassette para la determinación semicuantitativa de: pH, leucocitos, nitritos, proteínas, glucosa, cuerpos cetónicos, urobilinógeno, color, bilirrubinas y sangre en orina. Adicionalmente, el equipo determina la densidad y turbidez, por medio de medición del índice de refracción de la muestra dentro de una célula de flujo. Modular Analytics Equipo modular de química y hormonas, se realizan en este equipo diversos parámetros en muestras de suero y/o plasma, sin embargo, también procesa muestras de orina para parámetros como glucosa, urea, calcio, creatinina, fósforo, clearence de creatinina, etc


PRESENTACIÓN Componentes del sistema: •

Unidad Core: CA 300 + IPM (Intelligent Process Manager)

Sistema común deentrada, transporte, acumulación y salida de muestras

Módulo analítico E 170: Módulo de inmunoanálisis heterogéneo basado en tecnología ECLIA

Ordenador, Impresora, Mesa auxiliar para ordenador e impresora

Especificaciones del equipo •

Tipo de analizador

Módulo electroquimioluminescencia multicanal, selectivo para la realización de determinaciones de inmunoanálisis heterogéneo (hormonas – función tiroidea y fertilidad- marcadores tumorales, perfil cardíaco y óseo, anemias, diabetes y hepatitis).

Modo de medida Electroquimioluminescencia.

Rendimiento •

170 tests/hora por módulo.

Configurable hasta cuatro módulos: 680 test/hora.

Urgencias

Dispone de una entrada de muestras dedicada a urgencias. Las muestras de urgencia se analizan con prioridad absoluta sin interrumpir la rutina.


TAT •

Tiempo de respuesta 20 minutos (Desde Start hasta la aparición del primero resultado)

Resultados en urgencia 18 minutos.

Puesta en marcha / cierre: Tiempo de puesta en marcha:( inicialización + mantenimiento previo):12 minutos

Tiempo de cierre: no procede.

Muestras •

Tipos de muestra: suero, plasma, orina.

Tipo de tubos: Tubo primario o secundario de 5 a 10 ml ( 16x100, 16x75, 13x100,

13x75 mm); cubiletes (50 μl. volumen muerto) y microcubiletes pediátricos (20 μl. volumen muerto).

Medición •

Módulo con tecnología ECLIA (electroquimioluminiscencia)

Software •

Interface de usuario en entorno Windows NT

Operación a través de pantalla táctil y Mouse.

Diagnóstico por acceso remoto.

Funciones básica: •

Configuración y control del sistema

Gestión flujo de muestras

Gestión calibraciones y QC

Alarmas y mensajes

Almacén datos y archivo

Idiomas: •

Castellano

Precisión / Exactitud

Módulo analítico E 170: •

Módulo de inmunoanálisis heterogéneo multicanal, selectivo para la realización de determinaciones de inmunanálisis heterogéneo (hormonas – función tiroidea


y fertilidad- marcadores tumorales, perfil cardíaco y óseo, anemias, diabetes y hepatitis). Módulos comunes: •

Unidad Core CA 300: Módulo para la recepción y transporte de muestras con sistema de carga continua por medio de racks Hitachi de 5 tubos (5 RD).

Dotado de un “buffer” de entrada de racks, un “buffer” de rerun y un “buffer” de salida.

Tres vías de transporte: una vía general, una vía de entrada a cada módulo y una vía de retorno, que permite la repetición automática de pruebas, la realización de tests reflejos y diluciones y concentraciones de muestras.

Módulo analítico ISE 900/1800: •

Módulo para la determinación de electrolitos (Na,K,Cl) por el método de potenciometría indirecta. Existen dos versiones, la ISE 900 con velocidad de 300 iono gramas/hora y la ISE 1800 con un rendimiento de 600 iono gramas/hora.

CONCLUSIONES •

Dentro del área de

Uroanálisis existen equipos que junto a avances

tecnológicos sean diseñados equipos que facilitan la lectura y detección de los parámetros a reportar como son los equipos lectores de las tirillas reactivas, las tirillas reactivas como tal, la centrifuga para sedimento urinario. •

En el área de Uroanálisis existen varios parámetros analizar en la orina constituyendo en pruebas rápidas muy sensibles que determinan el pH, cetonas, sangre oculta, nitritos, bilirrubina, urobilinogeno, proteínas, glucosa, además hay equipos que ayudan al reporte de los componentes del sedimento urinario.

El uso de los equipos automatizados dentro del análisis de orina ayudan a optimizar el tiempo analizando en menor tiempo más muestras , ayudando a un rápido reporte, pero la automatización también atribuye a que el profesional no sean indispensable y no se necesite una preparación más allá de saber manejar el equipo.


La tecnología con la que trabajan los equipos automatizados constituyen un margen de error mínimo, con la calibración y uso correcto.

El profesional es el que confirma los resultados dados por el equipo por ello considero que somos vitales para obtener resultados de calidad, los equipos automatizados no podrán superar al criterio y análisis manual dado por nuestro raciocinio fundamentado por la ciencia.

RECOMENDACIONES •

Leer siempre las instrucciones de los equipos a utilizar, esto garantizara una correcta calibración del equipo y resultados confiables.

Aplicar las normas de seguridad al trabajar tanto con los equipos como con los otros instrumentos.

Aplicar las precauciones dadas por los manuales de manejos de equipos así se evitaran accidentes o mal funcionamiento del equipo.

Conservar los equipos en un lugar limpio y fresco.

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Buitrago José Manuel, Técnicas y Métodos de Laboratorio Clínico, Disponible en: Biblioteca de la Universidad Nacional de Chimborazo.

Manual de Técnicas Básicas para un Laboratorio de Salud, Serie Paltex para Técnicos medio y Auxiliares, Disponible en: Biblioteca de la Universidad Nacional de Chimborazo.


Uronalisis equipos y parametros