Issuu on Google+

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTA CIENCIAS DE LA SALUD LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO TÉCNICAS HISTOLÓGICAS LIC.IVAN PEÑAFIEL TEMA: Procesamiento de muestras REALIZADO POR: Joselin Abarca Septiembre 2013- Febrero 2014


Introducción • En estas páginas dedicadas a las técnicas histológicas realizadas en los centros de anatomía patológica, vamos a describir los procesos experimentales necesarios para obtener secciones teñidas y listas para observar al microscopio partiendo de tejidos obtenidos por biopsia o autopsia. Por tanto, dedicaremos espacios a la obtención, fijación, inclusión, corte y tinción de los tejidos.


Esquema del proceso completo


Obtención del tejido • Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas: – Biopsia – Autopsia


Fijación • En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem. • Unos de los fijadores mas usado es el Formol al 10% (Formaldehido)

formol


Propiedades de los fijadores: • - Producen una rápida muerte celular, evitando la autólisis • - Preservan la morfología celular y tisular • - Preservan la composición química • - Penetran a los tejidos con relativa rapidez • - Facilitan la coloración posterior • - Inhiben el crecimiento microbiano y por lo tanto la putrefacción • - Aumentan la consistencia de los tejidos • - Algunos de ellos colorean sustancias de los tejidos


Efectos indeseables de algunos fijadores: - Retraen los tejidos - Precipitan en forma de cristales - Endurecen demasiado las muestras - Poseen olor desagradable e irritan la piel y las mucosas • - Producen alteraciones importantes a nivel molecular • - Producen alteraciones importantes a nivel ultraestructural • • • •


Inclusión • Se debe lavar el tejido para quitar exceso de fijador, luego se deshidrata y se pasa por un líquido intermediario que es miscible con la parafina. • Infiltración En este paso la muestra se coloca en parafina liquida, de manera que se impregne con ella. • Inclusión Aquí se forman bloques de parafina y dentro de estos bloques están las muestras a estudiar. Se deja enfriar para que adquiera dureza.


Corte • Tallado Previo al corte, se debe tallar el bloque para el obtener secciones adecuadas en el micrótomo. • El micrótomo es un instrumento que permite obtener cortes muy delgados de muestra (5μm).

micrótomo


• Corte Los cortes se obtienen seriados, uno tras otro, obteniendo una cinta. • Luego se echan a un baño de flotación para que se estiren y se rescatan con un portaobjetos, que luego se calienta para evaporar el agua y que los cortes queden adheridos.


Tinción • Las placas se tiñen con la técnica de hematoxilina/eosina u otra especial. • La muestra debe desparafinarse y pasar por una serie de soluciones. • Finalmente, las muestras se deshidratan y se montan para ser vistas al microscopio.


Dividiremos el conjunto de técnicas histológicas en cuatro categorías. • a) Tinciones generales. Aquellas que usan sustancias coloreadas que se unen a componentes tisulares por afinidad química. • b) Histoquímica. Son aquellas técnicas de tinción que implican la modificación química de algunas moléculas tisulares para posteriormente ponerlas de manifiesto con colorantes. En este apartado incluiremos también a los métodos de tinción basados en la capacidad catalítica de algunas enzimas presentes en los tejidos que queremos estudiar.


c) Lectinas. Las lectinas son dominios de proteínas, como las selectinas, que son capaces de reconocer glúcidos que forman parte de polisacáridos. Tienen una gran especificidad y se usan para determinar el tipo de glúcido que aparece en las glucoproteínas de la membrana plasmática o de la matriz extracelular de los diferentes tejidos. d) Inmunocitoquímica. Son técnicas histológicas muy potentes basadas en la alta especificidad de unión de los anticuerpos a los antígenos contra los que se produjeron. Estos antígenos pueden ser cualquier molécula tisular que, purificada en inyectada en un animal, sea capaz de desarrollar una respuesta inmune. Estos anticuerpos añadidos a una sección de tejido reconocerán y se unirán específicamente a dicha molécula.


• e) Hibridación. Son técnicas basadas en la unión complementaria de las bases de ácidos nucleicos (adenina con la timina, o con el uracilo, y de la guanina con al citosina). Esto hace que dos cadenas complementarias de ácidos nucleicos se unan entre sí de forma muy específica, es decir, hibriden. Siguiendo este principio se pueden sintetizar sondas marcadas, cadenas de ADN o ARN con una secuencia de bases determinada que llevan una molécula unida para poder detectarlas. La secuencia de bases de la sonda es complementaria a otra que está presente en la célula, normalmente en forma de ARNm. Con ello podemos observar qué células expresan un determinado gen.


MONTAJE • Consiste en colocar sobre el corte histológico ya coloreado una delgada lámina de vidrio llamada cubreobjetos, el cual se adhiere con algún adhesivo transparente conocidos como medios de montaje. Previamente, y dado que éstos son una sustancias hidrofóbicas los cortes se deshidratan en alcoholes de concentración creciente pasándolos después por solventes intermediarios como el xileno, el benceno o el tolueno. • El medio de montaje clásico es el Bálsamo del Canadá, el cual prácticamente se ha dejado de utilizar debido a que ha sido superado por los medios sintéticos como el DPX y otros.


โ€ข Observaciรณn. El patรณlogo observa la muestra al microscopio y consigna el diagnรณstico.


GRACIAS POR SU ATENCIÓN


Procesamiento de muestras joselin abarca