Microscopia y técnicas complementarias
Figura 10--12. Observación al microscopio de luz compuesto. Este complejo microscopio Carl Zeiss con sistema confocal LSM 5 PascalR y micromanipulación fue donado a la Escuela Médico Militar por la Fundación Gonzalo Río Arronte. Laboratorio de microscopia confocal de la Escuela Médico Militar, Universidad del Ejército y Fuerza Aérea (UDEFA).
3. Colocar en alcohol de 100_ durante 3 min. 4. Colocar en alcohol de 100_ durante 3 min. 5. Sumergir en xilol 1 durante 3 min. 6. Sumergir en xilol 2 durante 5 min. d. Montaje con resina EntellanR: 1. Limpiar el portaobjetos alrededor del corte. 2. Depositar sobre el mismo una gota de resina EntellanR disuelta en xilol. 3. Cubrir con un cubreobjeto. 4. Dejar secar entre 10 y 30 min antes de su observación al microscopio (figura 10--12). Observación esperada: núcleos de color morado. Tejido conectivo y citoplasma de color rosa.
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Coloraciones tricrómicas Este grupo de métodos de tinción emplea diversos colorantes sobre un esquema general de tratamiento previo o simultáneo con ácidos fosfotúngstico y fosfomolíbdico, ya que las fibras del tejido conectivo tienen afinidad por estas sustancias. Posteriormente se fijan los colorantes sulfonados de aminotrifenilo a través de sus grupos amino. Estos métodos incluyen técnicas en las que se emplea una secuencia de ácidos y colorantes, y otras en las que ambos componentes se usan juntos. Los fijadores que se recomiendan para este tipo de tinciones son la solución saturada acuosa de cloruro mercúrico, el ácido pícrico saturado alcohólico y el fijador de Bouin. Entre las tinciones tricrómicas más frecuentes están:
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1. Tricrómica de Masson. Observación esperada: núcleos de color morado, colágeno de color verde o azul según el colorante utilizado, citoplasma de color rosa. 2. Tricrómica de Gomori. Observación esperada: núcleos de color azul a negro, colágeno de color azul, citoplasma y fibras musculares de color rojo. 3. Tricrómica de Mallory. Observación esperada: núcleos de color rojo, colágeno de color azul, citoplasma de color rosa violáceo, hematíes (eritrocitos) de color naranja. 4. Tricrómica de Gallego. Observación esperada: núcleos de color rojo, colágeno y citoplasma de color verde, hematíes de color amarillo. 5. Tricrómica de Cajal. Observación esperada: núcleos de color rojo, colágeno de color azul, citoplasma de color amarillo o rosa, moco de color naranja.
Métodos basados en la reacción de Schiff para grupos aldehído El reactivo de Schiff es la leucofucsina o bisulfato de fucsina que se forma de la reacción entre bisulfito y rojo fucsina. En su estado natural es incoloro, pero puede formar un color rojo estable por la adición de grupos aldehído. Este compuesto se utiliza en combinación con otros productos químicos para las técnicas de tinción de: 1. Método del ácido peryódico de Schiff (PAS). Se utiliza para determinar la presencia de moléculas como el glucógeno, glicoproteínas y glicosaminoglicanos. También sirve para identificar membranas basales y fibras reticulares. Actúa rompiendo la unión de los anillos de las hexosas y formando grupos aldehído. También rompe los enlaces de las hexoaminas de los glicosaminoglicanos y forma grupos aldehído para hacerlos reaccionar con el reactivo de Schiff. Su mecanismo de acción se debe a que el ácido peryódico (HIO4) oxida los grupos hidroxilo de dos átomos de carbono adyacentes y los transforma en grupos aldehído. También rompe la unión entre los átomos de carbono deteniendo la oxidación (figuras 10--13 y 10--14). Para microscopia electrónica se emplea una modificación de la reacción de PAS denominada método PAS--plata. Después de la oxidación con ácido peryódico se emplea el reactivo metenamina--plata, para obtener un contraste electrodenso. 2. Método de Feulgen. Es un método de tinción específico para la determinación histoquímica del