__MAIN_TEXT__

Page 42

ANALYSIS

Molecular Technique for Foodborne Pathogen Detection

Author info ดร. รุ่งนภา ลีละธนาวิทย์ Rungnapa Leelatanawit, Ph.D. Regional Molecular Food Safety Manager, Microbiology Division, Thermo Fisher Scientific (Thailand) rungnapa.leelatanawit@thermofisher.com ภาพที่ 1 SureTectTM Real-time PCR System ประกอบไปด้วยชุดตรวจสำ�เร็จรูปและเครื่อง Applied Biosystems (ABI) 7500 Fast Real-Time PCR สามารถวิเคราะห์ตว ั อย่างได้ครัง ้ ละ 96 ตัวอย่าง เหมาะสำ�หรับการทำ�งานกับตัวอย่างจำ�นวนมากในแต่ละวัน Figure 1 The SureTectTM Real-time PCR System with Applied Biosystems (ABI) 7500 Fast Real-Time PCR instrument, a versatile, 96-well platform ideal for batch processing several hundred samples a day. การตรวจเชือ ้ จุลน ิ ทรียท ์ ป ี่ นเปือ ้ นในอาหาร อาหารสัตว์ และกระบวนการผลิตในระดับโมเลกุลเป็นการยกระดับความปลอดภัยของ อาหารสำ�หรับอนาคต ในปัจจุบน ั นี้ นอกเหนือจากการตรวจสอบการปนเปือ ้ นด้วยการเพาะเลีย ้ งเชือ ้ ซึง ่ เป็นวิธม ี าตรฐานและวิธก ี าร ทดสอบทางชีวเคมีแล้ว ยังมีหลากหลายเทคนิคทางด้านอณูชีววิทยา (Molecular biology) ที่ถูกนำ�มาใช้ในการตรวจหาเชื้อปน เปื้อนในอาหาร เช่น LAMP, พีซีอาร์ (PCR), และ เรียลไทม์พีซีอาร์ (Real-time PCR) เทคนิคเหล่านี้ให้ผลตรวจที่รวดเร็วและแม่นยำ�

เทคโนโลยี Isothermal DNA amplification

เทคโนโลยี นี้ ถู ก พั ฒ นาขึ้ น บนหลั ก การของการใช้อุณหภูมิคงที่ในการเพิ่ม จำ � นวนดี เ อ็ น เอ (DNA) ซึ่ ง มี ห ลาก หลายเทคนิค เช่น Loop-mediated isothermal amplification (LAMP), Strand displacement amplification (SDA), และ Helicase-dependent amplification (HDA) ข้อดีของเทคนิค เหล่านีค้ อื รวดเร็วและไม่ตอ้ งใช้เครือ่ งเพิม่ ปริมาณสารพันธุกรรม (Thermal cyclers or PCR) โดยได้มกี ารพัฒนาเทคนิค LAMP สำ�หรับใช้ในงานด้านต่างๆ ทัง้ ทางการแพทย์ และเกษตร เทคนิค LAMP จะเพิม่ จำ�นวน DNA ที่อุณหภูมิคงที่ (60-65°C) โดยใช้ 42

www.innolabmagazine.com

4-6 ไพรเมอร์ ที่จำ�เพาะ 6-8 ตำ�แหน่ง ของยีนเป้าหมาย ร่วมกับการใช้ปฏิกิริยา Strand displacement ของเอนไซม์ Bst DNA Polymerase ในปฏิกิริยา LAMP จะมีการผลิตสาร Pyrophosphate (PPi) ซึง่ เป็นผลผลิตพลอยได้อย่างต่อเนือ่ ง และ เกิดการรวมกับแมกนีเซียมได้เป็นตะกอนสี ขาวของ Magnesium pyrophosphate ซึง่ สามารถมองเห็นได้ดว้ ยตาเปล่า หรือวัด ความขุน่ โดยการใช้ Spectrophotometer โดยถือเป็นการตรวจวัดผลโดยทางอ้อม ทำ�ให้ LAMP เหมาะกับการใช้ในภาค สนาม ในปั จ จุ บัน มี ก ารพั ฒ นาวิ ธี ก าร ตรวจวัด LAMP หลายๆ วิธี เช่น การใช้ ไบโอลูมิเนสเซนส์ (Luciferase), สาร เคมี (Hydroxynaphthol blue) และสาร

ฟลูออเรสเซนส์ (SYBR green and calcein) ในการตรวจวัด เทคนิค LAMP และ PCR เป็นเทคนิค ในระดับโมเลกุล (molecular technique) เหมือนกัน แต่ถูกพัฒนามาจากคนละ เทคโนโลยี โดย LAMP จะใช้อุณหภูมิคงที่ ในการเพิม่ จำ�นวน และตรวจวัดผลโดยทาง อ้อมจากปริมาณของ Pyrophosphate ที่ เกิดขึ้น ในขณะที่ PCR จะใช้ 3 อุณหภูมิ ที่แตกต่างกันในแต่ละรอบของ PCR และ ตรวจวัดผลจากปริมาณ DNA ที่ถูกเพิ่ม จำ�นวนโดยตรง LAMP เป็นเทคนิคทีม่ คี วาม จำ�เพาะและสะดวกในการทำ�งานถ้ามีการใช้ ไพรเมอร์ทเี่ หมาะสม และสามารถตรวจวัด ตัวอย่างที่มีเพียง 2-3 DNA copies ได้ เช่นเดียวกันกับ PCR อย่างไรก็ตาม ข้อเสีย

Profile for INNOLAB

INNOLAB magazine #10.59  

INNOLAB magazine #10.59  

Advertisement