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CULTIVO DE BACTERIAS


Cultivo de bacterias Es toda sustancia o conjunto de sustancia que en condiciones apropiadas y est茅ril permite el transporte, desarrollo o propagaci贸n, el aislamiento y preservaci贸n de un microorganismo bacteriano


Los medios de cultivo tienen diferentes utilidades: - Aislamiento de bacterias presentes en una muestra - Para investigación e identificación de bacterias - Para análisis metabólicos y bioquímico de la bacterias - Estudios culturales para evaluar características de las colonias y poblaciones bacterianas, según el estado agregativo del medio - Para realización de estudios de sensibilidad a los antibióticos (antibiograma) - Para preservación de bacterias (Cepario) - Para producción de vacunas bacterianas - Para producción de toxinas bacterianas


MEDIOS DE CULTIVO Y REQUERIMIENTOS ENERGÉTICOS: - Fuentes de carbono - Fuentes de nitrógeno NO ENERGÉTICOS: - Fuentes de azufre - Fuentes de fósforo - Agua - Iones metálicos - Factores de crecimiento - Factores de arranque - Factores inhibidores - Factores solidificantes: agar, gelatina


Componentes del medio de cultivo 

Un medio de cultivo debe contener en forma asimilable un fuente nitrógenada (Proteínas – peptonas), fuente de carbono (Hidratos de carbono – lípidos), distintas sales minerales y agua

En algunos casos debe contener factores de crecimiento para microorganismos exigentes (Ej. vitaminas, sangre, extractos de carne o levadura, etc)

De acuerdo al estado agragativo se puede agregar agentes solidificantes (agar o gelatina).

Debe ser estéril, isotónico, poseer propiedades buffer, un pH óptimo y un potencial óxido reductor determinado.


MEDIOS DE CULTIVO CONDICIONES Las condiciones que ha de cumplir un medio de cultivo para que un microorganismo crezca son: * Composición de nutrientes adecuada a las necesidades del microorganismo * Condiciones físico-químicas apropiadas: - Temperatura óptima - pH -Grado de humedad adecuado - Presión osmótica - Presencia o ausencia de oxígeno


CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

SEGÚN SU COMPOSICIÓN Y ORIGEN: - Empíricos o naturales - Semisintéticos - Sintéticos - Complejos SEGÚN SU CARACTERÍSTICAS Y USO: - Comunes o básicos - Selectivos - Enriquecidos - De transporte - Diferenciales


MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIÓN SEGÚN SU ESTADO AGREGATIVO: - Líquidos - Semisólidos - Sólidos Los medios sólidos o semisólidos pueden contener los mismos ingredientes que los medios líquidos, pero poseen además agentes solidificantes como agar o gelatina.


MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIÓN Medio sintético: Son los medios que contienen una composición química definida cualitativamente y cuantitativamente.

Medio mínimo: Son los medios que presentan la minima cantidad de nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos. Medio complejo: Son medios con nutrientes de composición química variable o no establecida. Son mezclas complejas y poco definidas de sustancias. Se preparan a partir de extractos animales, vegetales, etc. .


MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIÓN SEGÚN SU PRESENTACIÓN: - Deshidratados o liofilizados - Medios preparados - Medios sólidos en placa de petri - Medios sólidos en tubo - Medios líquidos en tubo - Medios semisólidos en tubo - Medios de doble fase en frasco


MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIÓN Medio enriquecido: Medio que se enriquece con nutrientes y se utiliza para microorganismos exigentes. Agar sangre . Agar Suero. Medio selectivo: Medio que permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el desarrollo de otros. Agar sales-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos Staphylococcus). Medio diferencial: Permite revelar características metabólicas-fisiológicas de los microorganismos. Agar Mac conkey (permite visualizar la fermentación de lactosa por viraje de un indicador de pH). Medios de transporte: Se utilizan para el transporte de muestras biológicas, manteniendo la viabilidad del microorganismo. Medio de Stuart, Cary y Blair, Amies y Douglas, etc


MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo

Cuando se desean cultivar bacterias es necesario tomar en cuenta los componentes nutritivos, sales, humedad y las condiciones fĂ­sicas como son el pH, el oxĂ­geno, la luz y la temperatura.


MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo pH Una bacteria puede alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las degradación de sustancias producidas por la propia bacteria; por ejemplo: Utilización de carbohidratos ----> Producción de ácidos orgánicos ----> Acidificación Catabolismo de proteínas ----> Producción de materiales nitrogenados ----> Alcalinización Estos cambios pueden inhibir el crecimiento de la bacteria. Estos cambios se pueden controlar mediante sistemas tampón. Uno de los más utilizados en microbiología es la combinación de KH2PO4 y K2HPO4 tamponando el medio a un pH de próximo a 6,8.


MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo O2 Las bacterias en su conjunto presentan una respuesta variable al oxígeno libre clasificándose en cinco grupos: Aerobias: Bacterias que crecen en presencia de oxígeno libre. Anaerobias: Bacterias que crecen en ausencia de oxígeno libre. Anaerobias facultativas: Bacterias que crecen en presencia como en ausencia de oxígeno libre. Aerotolerantes: Son bacterias que pueden tolerar o soportar el oxígeno y crecer en su presencia aún cuando no lo utilizan. Microaerófilas: Bacterias que crecen en presencia de pequeñas cantidades de oxígeno libre.


MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo

Suministro de luz Los organismos fotosintéticos deberán ser expuestos a una fuente de iluminación ya que la luz es su fuente de energía.


Condiciones de cultivo: Temperatura Cada bacteria tiene una temperatura óptima de crecimiento clasificándose en los siguientes grupos: Psicrófilas: Desarrollan a 0° C o menos. Su temperatura óptima es alrededor de los 15° C. Mesófilas: Crecen mejor entre 25 y 40° C. Termófilas: Crecen mejor entre 50 y 75° C dentro de este grupo las Hipertermófilas: Crecen próximas a 100 ° C.


MEDIOS DE CULTIVO: AGAR


MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS EN PLACA DE PETRI


AGAR SANGRE EN PLACA DE PETRI


MEDIOS DE CULTIVO: AGAR: NUTRITIVO

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El medio agar nutritivo se utiliza para analizar, diferenciar, seleccionar e identificar microorganismos que se encuentran en el agua, leche y sus derivados, alimentos y moo que no requieren condiciones estrictas y especiales.


MEDIOS DE CULTIVO: AGAR: NUTRITIVO

En este medio el extracto de carne y la peptona aportan la fuente de nitr贸geno, vitaminas y carbono. El agar es adicionado como agente solidificante Formula: Peptona de Gelatina 5.0 gr Extracto de Carne 3.0 gr Agar Bacteriol贸gico 15.0 gr pH 6.8 卤 0.2


MEDIOS DE CULTIVO: AGAR: NUTRITIVO Modo de preparación: 1.-Suspender en un matraz 23 g del medio agar nutritivo en un litro de agua purificada. 2.-Calentar en mechero con agitación suave hasta su completa disolución 3.- Hervir durante un minuto. 4.- Esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos. 5.- Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50°C 6.- Vaciar en placas de Petri estériles.


MEDIOS DE CULTIVO: AGAR: NUTRITIVO

Procedimiento: 1.- Inocular las placas con una asada y sembrar por el método de estría. 2.- Incubar las placas a 35° C durante 18 a 24 horas.


DISTINTOS TIPOS DE SIEMBRA


TIPOS DE SIEMBRA: ESTRIADO


ESTRIADO


PICADURA


VERTIDO EN PLACA


EXTENSION EN PLACA


CONTADOR DE BACTERIAS


A TRABAJAR EN EQUIPO.

IBQ. CLAUDIA CASILLAS

Medios cultivo  

ESTA PRESENTACIÓN TE AYUDARA A RECORDAR LO VISTO EN CLASE.

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