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重 庆 医 学 2011年 10月 第 4o卷 第 28期 

论 

著 ・  

对支气 管 哮喘 小 鼠 Eot axi n表达  炎 症 的抑 制作 用  周  雨 , 秦 碧 媛 ,熊  瑛 △  

(四 川省 泸州 医学院 附属 医院呼 吸 内科  646000)   摘  要 :目 的  观 察 STAT6圈套 寡 核 苷 酸 (ODN)对 支 气 管哮 喘 小 鼠 嗜 酸 性 粒 细 胞 趋 化 因子 (Eot axi n)表 达 及 气 道 炎症 的 影  响, 探 讨 STAT6圈 套 ODN 治 疗 支 气 管 哮 喘 的 可 行 性 。 方 法  将 BALB- C 雌 性 小 鼠 随机 分 为 :健 康 对 照 组 (N 组 )、哮 喘 组 (A  组 )、 STAT6圈 套 ODN 哮 喘 组 (ST—ODN 组 )及 无 序 ODN 哮 喘组 (SC-ODN 组 ), ODN 经 鼻 气道 滴 入 ST ODN 组及 SC-ODN 组 小 

鼠肺 部 , 荧光 显 微 镜 观 察 肺 组 织 中异 硫 氰 酸 荧 光 素 标 记 的 寡 核 苷 酸 ( FI TC— ODN)的 分 布 ;测 定 肺 泡 灌 洗 液 (BALF)中 白 细 胞  (WBC)、淋 巴 细 胞 (LYM)及 嗜 酸 性 粒 细 胞 (E0S)数 量 ;观 察 气道 炎症 病 理 变 化 ; 免 疫 组 化 法检 测 肺 组 织 Eot axi n蛋 白 ; RT— PCR 法 

检 测 肺 组 织 Eot axi n mRNA 表 达 。 结果  (1)FI TC ODN 转 染 组 小 鼠 肺 部 发 现 FI TC 着 色 , ODN 肺 组 织 转 染 成 功 。 (2)小 鼠肺 组  织 ST— ODN 组较 哮 喘 组 炎症 病 理 反 应 明 显 减 轻 。(3)BALF 中哮 喘 组 与 空 白 对 照 组 比较 ,WBC、LYM 、EOS均 增 高 ,差 异 有 统 计  学 意 义 (P< O.O1); ST—ODN 组 则 明 显 低 于哮 喘 组 ,差 异 有 统 计 学 意 义 (P< O.01);而 SC—ODN 组 与 哮 喘 组 比较 差 异 无 统 计 学 意 义  (P> 0.05);( 4)Eot axi n蛋 白及 mRSA 表 达 :哮 喘 组 明 显 高 于 空 白 对 照 组 ,差 异 有 统 计 学 意 义 (P< 0.01);ST-ODN 组 低 于 哮 喘  组 ,差 异 有 统 计 学 意 义 (P( 0.01);而 SC— ODN 组 与 哮 喘 组 比 较 , 差 异 无 统计 学 意 义 (P> O.05)。结 论  STAT6圈套 ODN 可 经 鼻 

气道 滴入 方 式 直 接 转 染至 小 鼠肺 组 织 ; STAT6圈套 ODN 可 抑 制 Eo t a xi n的表 达 , 调 控 哮 喘 小 鼠 气道 的 EOS聚 集 ; 抑 制 哮 喘 小 鼠  气道 炎 症 反 应 。  

关键词 : 转 录 激 活 因子 类 ;寡核 苷 酸 类 ;哮 喘 ;趋 化 因子 CCL11; 趋 化 因 子 CCL24  doi:10.3969/j .i ss n.1671  8348.2011.28.001  

文 献 标 识 码 :A 

文章编号 : 1671  8348(2O11)28— 2809— 03  

Inhi bi tory effects of STAT6 decoy ol igonucl eoti des on Eotaxin expressi on and ai rway i nflam m ati on i n m ouse m odel s of asthm a 

Zhou  Yu, Qi n  Bi yuan, Xi ong Wi ng 

(Depart ment   of  Res pi r at ory Medi ci ne, The   Affi li at e d Hos pi t al   of  Luzhou  Medi c al  Col l ege, Luzhou,Si chuan  646000,Chi na)   Abs t ract: Obj ect i ve  To obser ve  t he   i nfl uence  of  STAT6  decoy 0l i gonucI eot i des  on t he  Eot axi n expr essi on  and ai rway i nf l am —   mat i on i n mouse  model s  of  ast hma.M et hods   BALB- C f emal e mi ce  wer e r andoml y  di vi ded  i nt o  f our  gr oups: nor ma1  cont r o1(N),   as t hma  model(A ),ast hma  model  admi ni st er ed by STAT6  de coy  Ol i gonucl eot i des(ST—ODN ),and ast hm a  model  a dmi ni st ere d by  s crambl ed  01 i gonucl e ot i des(SC—ODN).The  STAT6  dec oy ODN and scr ambl ed ODN wer e i nt ranasal l y admi ni st er ed r espect i vel y.   T he  di st ri but i on  of   FI TC— O DN i n l ungs  w er e  di r ect l y  obser ve d  by  f l uor escenc e  mi croscope.The  num bers  of   w hi t e  bl ood c el l s, l ym —   phocyt es  and e osi nophi l s  i n branehoal veol ar  l avage  f l ui d wer e  cl as si fi ed and  m easured  by m i c roscope.The  pat hol ogi cal  changes  of   ai r w ay i nf l am m ati on w e re   obse rved  i n  l ungs   sec ti on.T he   m R NA and prot ei n  of   Eot axi n expr essi on  i n  ai r w ay  epi t hel i um w e re   det ec—  

t ed by  re ver se  t r anscr i pt i on  pol ymerase   chai n r eact i n(RT— PCR)and  i mmunohi st ochemi st ry  r espec t i vel y.Res ul t s   (1)W e  success f ul —   l y  observe  gr een f l uores cence  i n t he  l ung t i ssue  wi t h FI TC— OD N by l oc al  i nt r anasal  adm i ni st r ati on,demons tr at i ng t he  ef f i cacy  of  

gene  t r ansf er  i nt o t he  l ung.(2)Pat hol ogi c al  changes  of   ai rway  i nf l ammat i on  of  ast hma  gr oup  si gni f i cant l y i ncr eased  com pared  wi t h 

t hat   of   t he  ST ODN  gr oup.(3)I n  t he   BALF, the  number s  of   whi t e  bl ood  cel l s/l ymphocyt es/eosi nophi l s   of   as thma  group  si gni f i cant —   l y i ncr eased  com pare d  wi t h t hose   of   nor mal   cont rol   gr oup(P< 0.01).Thos e  of   T— ODN  gr oup  were  s i gni f i cant l y  l ower   t han  t hose  of  

t he  ast hma  gr oup(P< 0.01),whi l e  t her e  were   no s i gni f i c ant  di f f erences(P> 0.05)bet ween t he  SC— ODN group and ast hma  gr oup.   (4)The  pr ot ei n and  t he  m RN A  expr essi on  of   Eot axi n:t hose  of   ast hm a   gr oup  si gni f i cant l y i nc rease d  com par ed wi t h  t hose  of   norm al  

group(P< 0.01), and t hose  of   ST  ODN group  wer e  si gni fi cantl y  l ower   t han  t hose   of   t he   ast hma   gr oup(P< O.O1),whi l e  t he re   wer e 

no si gni f i cant   di f f erences(P> O.05)bet we en  the  SC-ODN  group  and  ast hma  gr oup.Conc l us i on  STAT6  dec oy  ODN  c an  t r ansf er   i n  t o l ung t i ssue s  of   mi c e  by  l oc al  i nt r anasal   admi ni st rat i on.STAT6  dec oy  ODN  can i nhi bi t  t he   expr ess i on  of  Eot axi n  pr ot ei n a nd  mR—   NA i n  l ung t i ssue s,r egul at e  eosi nophi l s  aggr egat i ng i n t he   ai r way  of  mi ce, and r educe  ai r way  i nf l ammat i on.   Key  words: act i vat i ng t r anscr i pt i on  fac t ors;0l i gonbonucl eot i des; ast hm a; chem oki ne  CCI   1   1;c hem oki ne  CCL24  

支 气 管 哮 喘 (简 称 哮 喘 )是 一 种 以 嗜 酸 性 粒 细 胞 (EOs)浸 

EOS特 异 性 趋 化 因 子 ,在 气 道 炎 症 调 控 和 Eos在 肺 中募 集 与 

润 为 主 的气 道 慢 性 炎 症 疾 病 。信 号 转 导 和 转 录 激 活 子 ( s i gna l  

活 化 中 起 重 要 作 用 。而 活 化 的 STAT6亦 可 转 录 激 活 趋 化 因 

t r ansducer   and act i vat or  of  t ranscr i pti on,STATs)是 近 年 来 哮 

子 Eot axi n。若 能够 阻 断 STAT6信 号传 导 通 路 , 则 可 能 在 减 少 

喘 的 研 究 热 点 。STAT6作 为 STATs家 族 的一 员 , 是 变 态 反 应 

EOS募 集 , 减 轻气 道 炎 症 , 缓 解 哮 喘 症 状 等 方 面 探 索 新 的 治 疗 

性 哮 喘 病 理 生 理 过 程 中重 要 的 转 录 因子 。 EOS作 为 气 道 慢 性 

途径 。  

炎 症 最 主 要 的效 应 细 胞 ,是 哮 喘 发 病 的 中 心 环 节 。Eot axi n是  通讯作者 , E  mai l : l y6511 0@ 126.c or n。  

本 研 究 通 过 以气 道 局 部 给 药 的方 式 , 将 STAT6圈套 寡 核 


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重 庆 医学 2011年 10月 第 4O卷 第 28期 

苷 酸 (0DN), 转 染 至 哮 喘 大 鼠肺 部 。观 察 STAT6圈 套 ODN 

GTC CAT GCC ATC AC一 3  ,下 游 5LTCC ACC ACC CTG 

对 支 气 管 哮 喘小 鼠嗜 酸 性 粒 细 胞 趋 化 因 子 (Eot axi n)表 达 及 气 

TTG CTG  TA一3  扩 增 产 物 452  bp。 反 应 条 件 为 : 94℃ 预 变 性 

道 炎 症 的影 响 ,探 讨 哮 喘 基 因 治 疗 的 新 方 法 ,及 STAT6圈 套 

2  mi n, 94℃变 性 30 S、50℃ 退 火 30 S、72℃ 延 伸 2  mi n, 30个 

ODN 治 疗 支 气 管 哮 喘 的 可 行 性 。  

循 环 。产 物 半 定 量 分 析 :取 PCR 产 物 进 行 2  琼 脂 糖 凝 胶 电 

1 材 料 与 方 法 

泳, 紫 外 灯 下 观 察 并 拍 照 。用 Quanti t y  one软 件 分 析 电泳 带 灰 

1.1 主要 试 剂 及仪 器

卵 清 清蛋 白(0VA 美 国 Si gma公 司 ),  

度, 计 算 目的 基 因 扩 增 带 灰 度 与 对 应 的 GAPDH 扩 增 带 灰 度 

Eo t a xi n多 克 隆 抗 体 ( 上 海天 呈 生 物 信 息 科 技 有 限 公 司 ), RNA 

之 比 值 ,即 为 半 定 量 结 果 。  

抽 提 试 剂 盒 (上 海 华 舜 生 物 技 术 有 限 公 司 ),RT—PCR 试 剂 盒 

1.6 肺 组 织 Eot axi n的免 疫 组 织 化 学 染 色  采 用 SABC法 进 

(大 连 宝 生 物 公 司),Eot axi n mRNA 引 物 (上 海 生 工 生 物 工 程 

行 染 色 ,光 学 显 微 镜 下 观 察 ,判 断 阳 性 表 达 ,测 定 Eot axi n 蛋 

技 术 服 务 有 限 公 司 ),圈 套 寡 核 苷 酸 与 无 序 寡 核 苷 酸 (大 连 宝 生 

白 ,标 准 如 下 : 采用 I mage— Pr o Pl us图 像 分 析 仪 对 图像 进 行 分  

物 公 司 ), 凝胶成像仪( 美 国 Ge l   Do c   XR), PCR仪 器 ( 美 国 Ep—  

析 ;每 张 切 片 在 光 学 显 微 镜 下 放 大 2OO倍 ,随 机 选 择 至 少 5个 

pendi of ),荧 光 显 微 镜 及 显 微 摄 影 设 备 (日本 Ol ympus公 司)。  

视野 , 测 定 阳 性 区域 平 均 吸 光 度 ,计 算 其 平 均 值 作 为 该 切 片 的 

1.2 动 物 分 组 及 模 型 建 立  32只 BAL  C小 鼠 ,雌 性 ,6~ 8  

代表值 。  

周, 20 ̄25  g(四川 大 学 动 物 实 验 中 心 提 供 ),清 洁 级 。随 机 分 

1.7 统 计 学 处 理  各 指 标 (计 量 资 料 )均 以 i± s表 示 ,应 用 

为 健 康对 照 组 (N 组 )、 哮 喘组 (A 组 )、STAT6圈 套 ODN 哮 喘 

SPSS13.0统 计 软 件 进 行 单 因素 方 差 分 析 。两 两 组 间 比 较 采 用 

组 (ST一 0DN 组 )、无 序 0DN 哮 喘 组 (SC一0DN 组 )。 每 组 各 8  

q检验 , P< o.05为差 异 统计 学有 意 义 。  

只 。 A组 、ST- ODN 组 、 SC—ODN 组 小 鼠在 第 0、 7、14天 分 别 腹 

2 结 

腔 注 射 0.2  mL含 96/ . t g  OVA及 2  mg氢 氧 化 铝 混 合 液 进 行 致 

2.1   ODN 局 部 给 药 肺 部 荧 光 显 像  取 FI TC— ODN 给 药 小 鼠 

果 

敏, N 组 小 鼠予 以等 剂 量 生 理 盐 水 腹 腔 注 射 。第 21天 时 将 A 

的肺 组 织 冰 冻 切 片 直 接 在 荧 光 显 微 镜 下 观 察 , 发 现 小 鼠肺 组 织 

组、 ST— ODN 组 、 SC一0DN组 小 鼠 置 于 不 完 全 密 封 的 有 机 玻 璃 

呈 现 绿 色 荧 光 ,以 气 道 上 皮 细 胞 及 气 道 下 浸 润 的 炎 性 细 胞 更 为 

罩 中 ,以 1O   卵 蛋 白生 理 盐 水 溶 液 9O mL雾 化 吸 入 进 行 哮 喘 

显 著 ,见 封 2图 1。  

激发 ,每 天 1次 , 每 次 30  mi n,持 续 7 d。 N 组 小 鼠 予 以等 剂 量 

2.2   BALF细 胞 计 数 及 分 类

生理 盐水 雾 化 。  

见 表 1。  

表 1 各 组 小 鼠 BALF 中 WBC、LYM 及 EOS计 数 

1.3  ODN干 预模 型小 鼠

STAT6圈套 ODN 及无 序 ODN 的 

比较 (  一8。 至±5。×10 /L)  

合 成 :全 硫 代 修 饰 的 ODN 由 大 连 宝 生 物 公 司 合 成 ,序 列 如  下E l - z ]:STAT6 圈 套 oDN: 5   r _ GAT CAA GAC CTT TTC  CCA A GA A A T CTA T一 3 。3  一CAT GT T CTG GA A A A G 

GGT  TCT  TTA  GAT  A一5  。其 中部 分 圈套 ODN 的 5  端 用 异 

硫 氰 酸 荧 光 素 (FI TC)标 记 。无 序 ODN:5' - CGA AAA TTC  G TT A A A TCA CTA GCT T A C C-3   3' - G CT TT T A AG 

CAA  TTT  AGT GAT  CGA  ATG C- -5  0DN 稀 释 后 与 脂 质 体  配 制 成 浓 度 为 2 t , g/t lL的 脂 质 体 包 裹 ODN 复 合 物 。ST— ODN 

组、 S C— ODN 组 小 鼠每 天 激 发 前 0 .5   h, 在麻 醉状 态下 分别 鼻 腔  滴 入 脂 质 体包 裹 的 STAT6圈 套 ODN 与 无 序 ODN 20   L。每  天 1次 ,连 续 7  d。最 后 一 次 予 ST一 0DN 组 小 鼠 FI TC标 记 的  STA ̄ T6圈 套 0DN。  

1.4 标 本 获取

小 鼠末 次 激 发 24 h后 , 处 死 小 鼠 ,以 生 理 盐 

水行右肺支气管肺泡灌洗 , 反 复 3次 ,每 次 0.5  mL,回收 率 约  85  , 进 行 白 细胞 、淋 巴 细 胞 及 EOS分 类 计 数 。 取 左 肺 组 织 ,   用 1O   中性 甲醛 固定 ,备 做 石 蜡 切 片 HE染 色 , 及 免 疫 组 化 检 

测 。取 右 肺 组 织 6O~ 1 0 0   mg放 于 备 有 RNA 储 存 液 的 EP管 

#: P< 0.O1,与 ST— ODN 组 比 较 ; △: P> 0.05,   :P< 0.O1,与 A  组比较。  

2.3 肺 组 织 病 理 改 变

N 组 小 鼠气 道 黏膜 正 常 , 管 腔 规 则 ,周 

围无 明显 炎 症 细 胞 浸 润 ;哮 喘 组 小 鼠支 气 管 管 腔 狭 窄 ,支 气 管  和 血 管 周 围 及 其 管 腔 内炎 性 细 胞 浸 润 ,以 嗜 酸 性 粒 细 胞 及 淋 巴  细胞 渗 出 为 主 ; 毛 细血 管 扩 张 、 充血、 周 围 组 织 水 肿 。ST- ODN  组小 鼠 支 气 管 壁 的 损 伤 明 显 减 轻 , 管 壁 周 围 的 炎症 细胞 浸 明 显  减少 , 炎 症 病 理 反 应 减 轻 。 而 SC ODN 组 炎 症 情 况 则 同 A 组  相 近 。见 封 2图 2。   1 

2 

3 

4  GAPI  ̄ I 4  Market "  

内放 入 一 7O℃ 冰 箱 内备 做 RT-PCR。FI TC标 记 ST—ODN 组  小 鼠部 分 左 肺 组 织 立 即 行 冰 冻 切 片 ,直 接 在 荧 光 显 微 镜 下  观察 。  

1.5 反 转 录多 聚酶 链 反 应 (RT—PcR)测 定 Eot axi n mRNA 表  达

运 用 RNA 抽 提 试 剂 盒 提 取 肺 组 织 中 的 总 RNA (参 照 说 

明书 进 行 )。核 酸 定 量 分 析 仪 测 定 所 提 取 组 织 的 RNA 浓 度 ,  

A2 6 0/2 8 0比值 为 1 .8~ 2.05。 反 转 录 ( RT):取 标 本 RNA  1   L, 根 据 RT— PCR 试 剂 盒 说 明 书 按 步 骤 配 制 反 转 录 液 。反 

1: N组 ; 2: ST  0DN 组 ; 3: A组 ; 4: SC- 0DN 组 。  

图 4 

小 鼠肺 组 织 中 Eot axi n  mRNA PCR 产 物 

琼 脂 糖 凝 胶 电泳 图 

应条件 : 48 ℃ 逆 转 录 20  mi n,99 ℃ 5  mi n使 Reverse  Tr an—  

2.4  各 组 小 鼠 肺 组 织 Eot axi n蛋 白 表 达  A 组 气 道 上 皮 

scr i pt ase失 活 ,5℃ 5  mi n,一 个 循 环 。 多 聚 酶 链 反 应 (PCR):  

Eo t a xi n阳 性 表 达 量 明 显 高 于 N 组 (P< 0 .0 1), ST一 0DN 组 

配制 PCR反 应 液 ,Eot axi n引 物 序 列 : 上 游 51 _ ACG GTC  ACT 

Eot axi n阳性 细 胞 表 达 量 明 显 低 于 A 组 (P< 0.O1),SC_ 0DN 

TCC  TTC  AC-3  ,下 游 5  ATC CCA  CAT  CTC  CTT  TC- 3  扩 

组 Eot axi n表 达 高 于 N 组 (P< 0.O1),SC一 0DN 组 与 A 组 之 间 

增 产 物 491  bp;内 参 GAPDH 引 物 序 列 :上 游 5  一ACC ACA 

差 异 无 统 计 学 意 义 (P> O.05)。光 镜 下 见 Eot axi n阳性 信 号 主 


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要位于胞膜上 , 呈 棕 褐 色 颗 粒 。A 组 : 支气 管 、 细 支 气 管 上 皮 细 

在核 因 子一 KB (NF— KB)及 STATs 上 都 有 应 用  “]。 针 对 

胞 呈 强 阳 性 表 达 ;STAT6圈 套 ODN 组 :支 气 管 、细 支 气 管 上 

STAT6作 用 的特 点 , 2000年 Wang等 [ 1  设 计 合 成 了一 段 外 源 

皮 细 胞 呈 弱 阳性 表 达 ,见 封 2图 3。  

性 STAT6顺 式 作 用 元 件 , 称 为 圈套 寡 核 苷 酸 , 将 其转入 细胞 ,   A 组 小 鼠肺 组 织 

竞 争 性 地 抑 制 STAT6与 顺 式 元 件 的结 合 , 致 其 不 能 结 合 到 靶 

Eot axi n mRNA 表 达 明 显 高 于 N 组 (P< 0.01),ST- ODN 组 

基 因 的启 动 子 区域 ,从 而 失 去 其 转 录 活 性 ,后 续 基 因 表 达 及 功 

Eot axi n t uRNA 表 达 与 A 组 比 较 明 显 下 降 (P< 0.01)。SC 

能的发挥 , 这 种 新 的 基 因 治 疗 方 法 立 即 受 到 广 泛 的关 注 ,已 陆 

0DN组 Eot axi n  mRNA 表 达 较 A 组 差 异 无 统 计 学 意 义 (P> 

续 开 展 关 于 皮 肤 过 敏 性 疾 病 、哮 喘 细 胞 学 的 基 础 研 究 , 特 别 是 

0.05),见 图 4。  

在治疗特应性皮炎 方面 , 已经 在 进 入 到 了临 床 实 验 _ 】  , 但 它 在 

3 讨 

哮 喘 活 体 组 织 中 的 实验 国 内 外 尚 无 文 献 报 道 。  

2.5 各 组 小 鼠肺 组 织 Eot axi n mRNA 表 达

论 

支 气 管 哮 喘是 一 种 由多 种 细 胞 、因 子 和 炎 症 介 质 引 起 、以 

本 研 究 通 过建 立 活 体 小 鼠哮 喘 模 型 ,首 次 将 STAT6圈 套 

EOS浸 润 为 主 ,以气 道 高 反 应 性 (AHR)为 特 征 的 慢 性 气 道 炎 

ODN 用 于 活 体 小 鼠 上 ,以 气 道 局 部 给 药 方 式 将 硫 代 修 饰 的 

症 性 疾 病 ,其 中 细 胞 因子 及 趋 化 因子 在 哮 喘 炎症 形 成 中起 重 要 

ODN 转 染 至 肺 组 织 。 荧 光 显 微 镜 下 见 FI TC 标 记 的 ODN 在 

作 用 。 目前 认 为 许 多 细 胞 因 子 及 趋 化 因 子 通 过 JAK/sTAT 

肺 组 织 特 别是 气 道 上 皮 显 色 明 显 , 说 明此 种 给药 的方 式 能 有 效 

信 号 传 导 途 径 在 哮 喘气 道慢 性 炎 症 中发 挥 作 用 。STAT6作 为 

地到达肺组织 , 其 原 因可 能 是 小 鼠在 麻 醉 状 态 下 易将 鼻 咽 部 异 

sTATs家族 成 员 之 一 ,通 过 JAK/sTAT 途 径 调 节 Th2优 势 

物 吸入 支 气 管 。同 时本 研 究 发 现 STAT6圈 套 0DN 组 BALF  

分 化 ,介 导 细 胞 因 子 白细 胞 介 素 一4(I L一 4)、白 细 胞 介 素 一 13(I L 

中 EOS等 炎 性 细 胞 计 数 降 低 ,哮 喘 气 道 炎 症 减 轻 ,气 道 上 皮 

13)等 的 基 因 表 达 ,促 进 B 细 胞 增 殖 和 分 化 ,参 与 I gE 类 型 转 

Eotaxi n蛋 白及 其 肺 组 织 中 mRNA 表 达 呈 显 著 抑 制 ,提 示 

换 ,促 进 Eot axi n基 因 转 录 ,从 而 介 导 哮 喘 气 道 炎 症 和 气 道 高 

STAT6圈套 ODN 可 抑 制 哮 喘 小 鼠 气 道 炎 症 反 应 ,可 能 与 其 

反 应 性 。 因此 , STAT6作 为 变 态 反 应 性 哮 喘 病 理 生 理 过 程 中 

阻断 STAT6激 活所 致 的 Th2优 势 应 答 , 影 响 了 下 游 信 号 转 导 

关 键 的转 录 因 子 , 在 哮 喘 气 道 炎 症 形 成 的 分 子 学 机 制 中起 至 关 

]o 口     调  效 应 有 关 ,同时 STAT6圈 套 ODN 可 调 控 E t axi n的 表 达] ,

重 要 的作 用 ,目前 已成 为 哮 喘 治 疗 新 的 靶 点 。Chi ba等  应 用 

控 哮 喘小 鼠气 道 的 E0s聚集 。 而 无 序 ODN 对 哮 喘 小 鼠 的 影 

AS1517499抑 制 STAT6信 号 传 导 ,抑 制 抗 原 诱 导 的 II   一13的 

响不 具 有 差 异 性 ,说 明 STAT6圈 套 ODN 对 哮 喘 的影 响 具 有 

表达 , 进 而 抑 制 哮 喘 的 炎 性 反 应 及 气 道 高 反 应 性 。利 用 RNA 

特 异 性 而不 是 核 酸 本 身 所 导 致 。 以 上 提 示 STAT6圈 套 ODN 

干扰技术 , 通 过 阻 断 STAT6信 号传 导 通 路 从 而 达 到 治 疗 哮 喘 

治 疗 哮 喘 有 效 ,且 哮 喘 小 鼠局 部 给 药 的方 式 具 有 用 量 少 、全 身 

的 目 的  。  

不 良反 应 小 的优 点 ¨ 】   。糖 皮 质 激 素 作 为 当前 控 制 哮 喘 发 作 最 

嗜 酸 性 粒 细 胞 浸 润 是 支 气 管 哮 喘 气 道 病 理 改 变 的 主 要 特 

有 效 的 药 物 ,其 不 良反 应 大 、依 从 性 差  ,限 制 了在 临 床 上 的 

征 ,被认 为是 哮 喘 发 展 恶 化 中 的重 要 因素 。 它是 哮 喘 炎症 反 应 

广 泛 使 用 。STAT6圈套 ODN 的 研 究 , 从 细 胞 分 子水 平 为 哮 喘 

中造 成 组 织 损 伤 和 肺 功 能 紊 乱 的 主 要 效 应 细 胞 。 哮 喘 的 严 重 

提 供 了新 的治 疗 靶 点 和 方 法 。 但 此 方 法 能 否 应 用 到 临 床 还 需 

性 与 嗜 酸 性 粒 细胞 性 气 道 炎 症 的程 度 有 关 。嗜 酸 性 粒 细 胞 募 

要 进 一 步 的研 究 。  

集 和 随 后 的激 活 ,在 支 气 管 哮 喘 发 病 机 制 中起 着 重 要 作 用 ¨ 5 ]。   而 Eotaxi n在 嗜 酸 性 粒 细 胞 的趋 化 、黏 附 、募 集 、活 化 和 脱 颗 粒 

参 考 文献 

过 程 中发 挥 着 重要 作 用 ]。Eot axi n作 为 CC趋 化 因 子 家 族 成 

W ang LH , Yang  XY,Rober t  A,et  a1 .Target ed di sr upti on 

员 之 一 ,是 EOS选 择 性 的趋 化 剂 和 强 有 力 的激 活 剂 , 特 异 性 地 

of   St at 6 DNA bi ndi ng act i vi t y by an ol i gonuc 1 eot i de  cel l  

对 EOS具 有 强 大 趋 化 作 用 。 本 研 究 中 ,哮 喘 小 鼠 气 道 上 皮 

r e s po ns e   de c oy   bl o c ks   I L- 4 一 d r i ve n   TH2  c e l l   r e s p on s e [ J ].  

Eot axi n蛋 白及 其 mRNA 的 表 达 明显 高 于 空 白对 照 组 , 证 实 了 

Bl ood,2000, 95( 4):1249—1257.  

Eot axi n在 哮 喘气 道 炎 症 中 起 调 控 作 用 。  

Yokoz eki  H ,W u M H ,Sumi  K,et  a1 .I n vi vo  ir ans fec t i on 

Eot axi n基 因 的 表 达 和 调 控 很 大 程 度 依 赖 于 通 过 JAK/  

of   a ci s  el e me nt “decoy” agai nst  si gnal  t ransducers  and 

STAT6信 号 传 导 的 I L一 4及 I I   一 13等 Th2型 细 胞 因 子 的 协 同 

act i vat ors   of   tr ans cri pt i on  6(STAT6)一 bi ndi ng s i t e   amel i o—  

作 用 。Th2 型 细 胞 因 子 可 与 促 炎 症 因 子 肿 瘤 坏 死 因 子 a  

r at es  I gE— 。 me di ate d l at ephas e  rea ct i on  i n  an a topi cderm at i — —  

(TNF— a)协 同 刺 激 支 气 管 上 皮 细 胞 增 强 表 达 Eot axi n,从 而 吸 

t i s  mi ce  model [J].Gene  Ther, 2004,11(24): 1753—1762.  

引嗜酸粒细胞 浸 润至 气道 参与 哮 喘炎症 过 程_ 7 ]。 研 究 发 现 ,  

Chi ba  Y ,Todor oki  M ,N i shi da Y ,et  a1 .A  novel  STA T6  

I L一13通 过 STAT6信 号 通 路 调 节 Eot axi n基 因 的 转 录_ 8 ]。 而 

i nhi bi t or   A S1517499  a me l i or at es   ant i gen-i nduced  bronchi  

Odaka等  也 发 现 STAT6在 I L- 4诱 导 的 Eot axi n活 化 中起 了 

al  hyper cont r act| 1 i t y  i n  mi c e[ J].Am  J  Respi r   Cel l  Mol   Bi —  

非 常 关键 的 作 用 。Chi u等 。。 报 道 通 过 抑 制 sTAT6使 得 I L一 4  

ol, 2009,41(5): 5l6 -524.  

诱 导 的 Eot axi n在 BEAS-2B细 胞 上 的 表 达 明 显 下 降 。以 上 提 

W a1 ker  W ,Heal ey GD,H opki n JM 。et  a1 .RNA i nt er fe r—  

示 Eot axi n可 能 是 STAT6转 录 激 活 后 在 气 道 炎 症 调 控 中起 作 

ence  of   ST AT 6  rapi dl y  at t enuat es  ongoi ng  i nt erl euki n-1   3一  

用 的 效应 因 子 之 ~ , STAT6的 活 化 与 Eo t ax i n表 达 关 系 密 切 。  

medi at ed  eve nt s  i n l ung epi t he l i al  cel l s[J].I mmunol ogy,  

近 年 来 ,利 用 寡 核 苷 酸 进 行 哮 喘 干 预 的 研 究 逐 渐 成 为 热  点 。寡 核 苷 酸 免 疫 刺 激 序列 (CpG ODN)作 为 一 种 新 型 免 疫 调 

2009,127(2): 256- 266.  

曹乃清 , 张 宏 誉 .嗜 酸 性 粒 细 胞 募 集 在 支 气 管 哮 喘 发 病 中 

节 剂 ,已被 许 多研 究 证 实 其 在 调 控 Thl /Th2亚 群 比 例 方 面 的 

的作 用 [J].基 础 医 学 与 临 床 ,2006, 26(12): 1389— 1392.  

作用l 1   。针 对 信 号 传 导 通 路 对 哮 喘 干 预 的 寡 核 苷 酸 治 疗 , 已 

Sam uel  M P,N i ves  Z ,K ei t h F ,et  a1 .The  e ot axi n chem o—  

有 相 关 报 道 ,但 以 反 义 寡 核 苷 酸 策 略 研 究 多 见 。 而作 者 采 用 了 

ki nes  and  CCR3  are   f undament al   re gul at ors  of   al l e rge n— - i n— -  

圈套寡核苷酸策略 , 是 目前 新 型 的 基 因 治 疗 手 段 之 一 ,比反 义 

duc e d  p ul mo na r y  e o s i nop hi l i a[ J].J  I mmu no l ,2 0 05,1 7 5  

寡核苷酸更具 有稳 定性 高 、 效 特性 强 的优点1 1   。此 策 略 目前 

(下 转 第 2814页 )  


2814 

 ̄33 Pettersson H M

重 庆 医学 2011年 10月 第 4O卷 第 28期  ,Pi et ras  A , M unksgaar d  Per sson M , et  a1 .  

of  hum an e pi der m oi d  car ci nom a  A 43  1  cel l s   by  m odul at i ng 

Ar seni c  t r i oxi de   i s   hi ghl y c yt ot oxi c   t o s mal l   cel l  l ung  car —  

MEK1   a nd   AP  1   s i gn a l l i n g   pa t hwa ys   I - J] .Exp  De r ma t ol ,  

ci noma  ce l l s[J].Mol  Cancer   Ther, 2009,8(1): 160—170.  

2006,15(7): 538- 546.  

[4]   Dalzell  JR,Samuel  LM .The spect r um of  5-f luorour aci l   car di 0toxi ci t y[J].Ant i cancer  Drugs, 2009, 20(1):79—8o.   ngh B ,M e eker  T ,e t  a1 .The  m et al — bi ndi ng do—   [5]   H uq A ,Si

[1   22  Cao Y,Wang F,Li u HY.Res ver at r oi  i nduce s apopt os i s   and di f f er ent i at i on  i n ac ut e  promyel ocyt i c  l eukemi a(NB4)  

ce l l s[J].Asi an Nat  Pr od  Res,2005, 7(4): 633—641.  

m ai n of  I G FBP一3  sel ect i vel y del i vers  t he rapeut i c  m ol e—  

[13]Sun C,Hu Y,Li u  X.Res ver at rol  downre gul at es  t he c on—  

cul es  i nt o  canc er  ce l l s[J].Ant i cancer   Dr ugs, 2009,20(1):  

st i t ut i onal  ac ti vat i on of   nucl ear  f ac t or - kappaB i n  m ul t i pl e  

21—31.  

m yel oma  cei l s,l eadi ng  t o suppr essi on of  pr ol i f er at i on and 

[6]  程翼飞 , 张乐萍 , 陆爱 东 , 等. 砷 剂 可 以改 善 儿 童 急 性 早 幼 

粒 细胞 白血 病 长期 预后 吗 ?— — 单 中心 的 经 验 r J ] .中华  血液学 杂志 , 2008, 29( 7):454— 458.   an M [7]   Sengottuvel

,V i s w anat han P ,N al i ni  N .Chem opre—  

i nvasi on,arr est  of  ce l l  cycl e,and  i nduc ti on of  apopt osi s  

VJ].Cancer  Ge net  Cyt ogenet, 2006,165(1):9- 19.   [14]Lanzi l l i  G,Fugget t a  MP,Tri car i c o M.Resverat r ol  down—   r egul at es  t he  gr owt h and t el om er ase  act i vi t y of  br east  

vent i ve  ef f ect  of  t rans— 。 res ver at r ol — 。 a phyt oal exi n agai nst  

ca ncer   cel l s  i n vi t r o[J].I nt  J  Onc ol,2006,28(3):641—  

col oni c  aber r ant  cr ypt  f oci  and cel l  pr ol i f er at i on i n 1。2一  

648.  

di met hyl hydr az i ne i nduce d c ol on c ar ci nogenesi s『J].Car —   ci noge nesi s, 2006,7(5):1038—1046.  

[8] W ang  Y, Lee   KW , Chan FL.The   red  wi ne   pol yphenol   re s—   ver at r ol  di spl ays  bi l e vel   I nhi bi t i on  on ar om at ase  i n br east  

c a n c e r   c e l l s [ J ]. Tox i c ol   Sc i , 2 0 06, 9 2(1 ): 71 — 7 7.  

[152  Mai nardi   T,Kapoor   S,Bi el or y L.Compl ement ar y and al —   t er nat i ve  m edi ci ne:herbs,phyt oc hem i cal s and  vi t am i ns  

a nd   t he i r   i mmun ol o gi c   e f f e c t s [ J ]. Al l e r g y   Cl i n   I mmu no l ,   2009,123(2): 283—294.  

] - 1   6]Ber nhaus  A,Fr i t zer - Szekeres  M ,Grusch M ,e t  a1 .Di gal —  

[92   Mi l l er  ME,Hol l oway AC,Fost er  w G.Be nz o一 [a]一pyr ene  

l oyl res ver at r0l ,a  ne w phenol i c  aci d  der i vat i ve  i nduces  ap~  

i ncre as es  i nvasi on i n M DA—M B- 231  br east   cancer   c el l s  vi a  

optosi s  and cel l   cycl e   arr est  i n  hum an  H T一2   9  col on c ancer  

i ncre as ed  C0X一1 I   expr ess i on  a nd  prost agl andi n  E2  

(PGE2)out put[J].Cl i n Exp Met ast asi s,2005,22(2):   149—156.  

[1O]Ki m  YA, Li m  sY, Rhee   SH.Res ver at r ol  i nhi bi t s   i nduci bl e   ni t ri c  oxi de  synt hase  and cycI ooxygenase 一2  expres si on i n 

c e i l s [ J ]. Ca nc e r   Le t t , 2 0 09, 2 74( 2): 29 9  3 04 .   [17]Chan JY,Phoo MS,Cl ement  MV,et  a1 .Resver at r ol  di s —   pl ays  c onver se  dose — — r el ated  e f f ect s  on 5- f l uor ouraci l — - e— —   voked  col on cancer  cel l  apopt osi s:the r ol e s  of  cas pase  6  

and p53[J].Cancer   Bi oI  Ther, 2008, 7(8):1305—1312.  

be t a — a my l oi d - t r e a t e d   C6   g l i oma   c e l l s[ J ].I nt   J  Mol   Me d,   ( 收 稿 日期 : 2011- 04— 30 修 回 日期 : 2011 - 06— 14)  

2006,17(6): 1069 —1075.  

[11]Ki m AL,Zhu  Y, Zhu H.Resver at r o1  i nhi bi t s  pr ol i f erat i on  (上 接 第 2811页 )  

di s e a s e   i n t e r v e nt i on[ J ].Ann   N  Y  Ac a d   Sc i , 2 005, 1 058:  

[ 7 ] 汤葳 , Cha n   A, Chi k   S, 等. 细 胞 因子 诱 导 支 气 管 上 皮 细 胞 

128一l39.  

表 达 嗜 酸 粒 细 胞 趋 化 因子 EJ].现 代 免 疫 学 ,2005,25(1):   61-65,81.  

[8] Mat sukur a S,St el l at o  C,Ge or as  SN,et  a1 .I nt er l euki n  1   3   upr egul at es  eot axi n expr essi on i n ai rway epi t hel i al  cel l s  

[132索 立 俊 , 施 毅 ,张 方 , 等 .核 因 子一  B圈 套 寡 核 苷 酸 转 染 对 

小 鼠成 熟 树 突 状 细 胞 生 物 学 特 性 的影 响 [ J ].中 国 呼 吸 与  危重监护杂志 , 2009,8(3): 271— 274.  

[14]Luhrmann A, Ts cher ni g  T, von der  Leyen H,e t  a1 .Decoy 

by  a  STAT6一dependent   me chani sm[J].Am J  Res pi r  Cel l  

ol i godeoxynucl eoti de agai nst  ST A T transcription factors 

M ol  Bi oi ,200l, 24(6): 755- 761.  

decr eases   al l e rgi c   i nf l ammat i on i n  a  rat   ast hma  model [J].  

[9] Oda ka  M, Mat sukurs  A, Kuga H,et  a1 .Di f f ere nt i al  re gu—   l at i on  of   chem oki ne  expr essi on by  Thl  and  Th2  cyt oki nes  

Exp Lung  Re s,2010, 36(2):85-93.  

r152  I gawa  K,Sat oh T,Yokozeki  H.A t her apeut i c  ef f ect  of  

and mechani sms  of  eot axi n/CCL-1   1  expres si on i n human 

ST AT 6  dec oy ol i godeoxynuc1 eot i de oi nt m ent  i n at opi c 

a i r wa y   s mo ot h   mus c l e  c e l l s[ J] .I nt  Ar c h   Al l e r gy   I mmu—  

der mat i t i s:a  pi l ot  st udy i n adul t s[J].Br  J  Dermat ol,  

nol, 2007,143(1): 84  88.  

2009,160(5): 1124—1126.  

[ 10 2  Chi u   PR, Lee   WT, Chu   YT, e t   a 1 .Ef f e c t   of  t h e   Chi ne s e  

r16] Templ i n MV,Levi n AA,Gr aham MJ,et  a1 .Phar macoki —  

her b ext ract  ost hol  on I L一4一 i nduced e ot axi n expr essi on i n 

net i c  and  t oxi c i t y pr of i l e  of  a phosphor ot hi oat e  ol i gonu—  

BEAS - 2 B  c e l l s[ J].Pe di a t r  Ne o na t o l , 20 08,4 9( 4):1 35 —  

c l e ot i de   f o l l owi ng   i nh a l a t i on   de l i ve r y   t o   l u n g  i n   mi c e [ J] .  

14O.  

A nt i s ense  N ucl ei c  A ci d Dr ug  De v, 2000,10(5): 359—368.  

[11]Ashi no S,W aki t a  D,Zhang Y,et  a1 .CpG—ODN i nhi bi t s   ai rway i nf l ammati on at  ef f ec t or   phas e  t hr ough down— — reg— —  

[1 7 ] 陈贵 华 , 李代先 , 周 丽 华 .哮 喘 患 者 使 用 吸 人 激 素 的 依 从  性 调 查 及 对 策 rJ].重 庆 医学 ,2009, 38(17): 2213— 2214.  

ul at i on of  ant i gen-speci f i c  T h2  cel l  m i gr at i on i nt o  l ung 

[ J ] .I n t   I mmu no l , 20 08, 2 0( 2): 25 9 — 2 66 .   [12] Mann MJ.Tr anscr i pt i on f act or  decoys:a  new model  f or  

(收 稿 日期 : 2 O11 一 O4— 28 修 回 日期 : 201卜O6   04)  


STAT6圈套寡核苷酸对支气管哮喘小鼠Eotaxin表达及气道炎症的抑制作用  
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