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中国实验诊断学

2011年 11月

第 1 5卷

第 1 1期 

于血脂作为股骨头缺血性坏死的影响因素研究相对  较 多[ 8-9 ], 而血 脂 作 为股 骨 颈 骨 折术 后 缺 血 性 坏 死  的影响因素相关研究并不多见 , 本研究 中发现坏死  组 患者 TC、 LDL显 著 高 于 对 照组 ,两 组 对 比差 异 有  统计 学 意义 , 因此 , 本研 究认 为 TC、LDL可 以 考虑 作  为术 后 股骨 头缺 血性坏 死 的独立 因素 而用 于股 骨颈 

1953 一  

t e ch ni q ue s, a nd   pe a r l s l JJ. Or t ho p  Cl i n   No r t h   Am, 2 OO 7, 38: 1 2.   1 4jTe i x ei r a  RL, yo n  de r  We i d  I,S e l d i n  L,e t  a 1.Di fe r en t i a l  e x pr e s s i o n  o f   ni f H and a nf H genes  i n  Paeni baei l l us  durus  mml ys ed  by r ever s e  t rans cri p-  

t a s e- PCR  nd a   d en at ur i n g  g r a di e nt   g e l   e l e ct r o ph o r e s i s [ J]. Le t t   Appl   Mi c r o—   b i d. 2 008; 4 6( 3): 3 44.  

[ 5] 王亦锡 , 孟继愈 , 郭子恒 . 骨与关 节损伤 [ _ M]. 第 1版.北京 : 人 民  卫生出版社 , 1 99 0. 573.  

[ 6] 胥少汀 , 葛宝 丰, 徐印坎 , 主编 . 实用骨科学 [M]. 第 2版 . 北京 : 人 

术后 股 骨头缺 血性 坏死 的诊 断指标 。   作者简介 : 何澄, 男 , 大 学本科 , 副 主任 医师。研 究方 向 : 骨 

民军 医 出 版社 , 1 9 99. 65 8—6 76.   [ 7] S mr ke   D, Bi s c e v i ?M, S mr ke   BU, et  a 1. Bi o me e ha ni e l  a a nd   cl i n i c a l  a lt e r —  

科 关 节 方 向。  

a t i o ns   o f   he t   h i p  j o i nt   f o l l o wi ng   f e mo r l  a ne c k   f r a c t ur e   nd  a i mp l nt a a t i on   o f  

参考文献 :  

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[ 8]胡锦来 . 非创伤性股骨头缺血性坏死 患者血脂和血液流变性变化  及意义[ J]. 安徽 中医学院学报 , 20 04: 2 3( 4): 53.  

[ 9]陆继收 , 陈增 刚, 孙成铭 . 阿托伐他 汀对股骨头缺血性坏死 患者血  清 SOD、 MDA和 O X . LDL的影 响 【 J]. 实用 医学杂 志, 200 8, 24( 5):  

E 2]Al dr i dg e   J M,Ur ba n i a k  J R.Ava s c u l ar   ne cr o s i s   o f   f e mo r a l  he d :Ro a l e  o f  

733.  

v a s c ul a r i z e d  bo n e   gr a f t sE J]. Or t ho p  Cl i n  No r t h   Am, 20 07, 3 8:1 3.  

( 收稿 日期 : 2 0 1 0一o 8—3 0)  

[ 3]Wo o d M B.Fr e e  v a s e t da r i z e d  ibt f da r  g r a f t i n g- 2 5 y e a r s  e x pe r i e n c e:t i ps,  

文章编号 : 1 0 0 7—4 2 8 7( 2 0l 1 ) 1 1—1 9 5 3—0 2  

ABO血 型测 序 法 对 B( A) 血 型 等位 基 因的检 测 分析  张心 怡 , 田 晓丰 , 刘铁梅 。   ( 1. 长春 市中心医院 输血科 , 吉林 长 春 1 3 0 05 1;2. 吉林大学 第二临床学 院;3. 吉林大学 中 日联谊医院)  

自ABO血型系统被发现以来 , 输血作为一种常  规治 疗手 段在 现 代 医学 中发 挥 着 越 来 越 重 的作 用 。  

水浴箱 。应 用 吸 收 放 散 技 术 证 实 弱 的 A 或 B抗 

ABO血型的标准血清学正反定型方法, 因其操作简  单 和实 用等特 点得 到 了广泛 地推 广 。但在 疑难 血型 

量。  

的判 定 中存 在 局 限性 , 应 用 基 因 的方 法 在 一定 程 度 

用盐 析法 提取 DNA。  

上弥 补 了血 清 学 方 法 的 不 足 _ 1 ' 2 j,为 临 床 安 全 输 血 

1. 4  ABO 血型基 因测序 方 法 的建 立

提供了更有力的保 障, 也为个体识别和人类血 型遗 

别 扩 增 ABO血 型 基 因第 6和 第 7外 显 子 片段 。 引 

传背 景研 究提 供 了另外 一种 手段 。  

物 序 列如下 : 5’ . CGGAATr CACTCGCCACTGCC1 u  l r r _  

1 材 料 与方法 

CTC. 3’.5’. CGGGATCCATGTGGGTGGCACCCTGCC一 3’  

原_ 3 j 。单 克 隆抗 一H试 剂 检 测 红 细 胞 上 H抗 原 含  1. 3 所有 标 本 用 血 清学 方 法 检 测 ABO血 型后 ,采  每份 标本 分 

收集 201 0年 在 吉林 大 学 中 日联 谊 

用于 扩增 ABO血型 基 因的第 6外 显子 , 扩增 产 物 为 

医院输血科 3 0例健康献血者 EDT A抗凝 全血 ( 建立  AB O基 因测 序法 的可靠性 ) 。2例健康体检正反定 

278 bp。 引 物 5’ . GGGCCTAGGCTFCAGTY ACTC一 3’,  

型不符标本( 长春市中心血站提供 ), 系母子关系。  

ABO血型基 因的第 7外显子 , 扩增产物 为 31 0   b p。  

1. 2 血型血清学检测  正定型试验采用长春博德  生物 技术 有 限责任 公 司生 产 抗 A、 抗 B血 型定 型试 

内对照为人类 生长 激素 ( HGH) 基 因特异 性引物 ,   HGH- . A 链 引 物 序 列 为 :5’ 一 TGCCTFCCCAAC—  

剂( 单克隆抗体 ); 反定型试验用上海血液生物 医药 

CATF CCCTrA- 3’,HGH. B链 引 物 序 列 为 :5’ . CCACT.  

有限责任公司生产 A、 B、 O红细胞 , 生理盐水及 3 7℃ 

CACGGATI TCTGTYGTGTI TG一 3’, 扩 增产物 为 43 4  bp。  

1. 1 样本 来源

5’ . CGGGATCCCCGTCCGCCTI ' GCAG. 3’,用 于 扩 增 

1. 5  PCR扩 增体 系为 50   *通讯作 者 

DNA  Ta q酶 0. 5  U,1 0 

×P CR  b u f f e r : 5   , d N TP:1  mM, 每条 引物终浓度 1  


Chi n J Lab Diagn,November,201l,V 

l954 一  

,  ‘ !  

M和 DNA  2 g; 循 环参 数 为 94q C, 5  mi n; 94 ̄ C, 3 0  s;  

常含量 的 B抗 原 和少量 的 A抗 原 , 其 血清 中含有 抗 

60c I =, 3 0  S: 72℃ , 50  S; 30个 循 环 后 72℃ , 5  mi n结 束 

A。A型 和 B型 血 的 c DNA有 7处 核 苷 酸不 同。迄 

扩 增 。将扩 增产 物送 至上海 生工 直接 双 向通 测 。  

今发 现 的 A基 因 796位 为 C, 8 03位 为 G; B基 因 796  

2 结果 

位 为 A, 803位 为 C[  。2例母 子 血 型 基 因测 序 结 果 

2. 1 血清学检测结果  3 0 例健康献血者 ABO血型 

796位 为 A, 803位 为 G, 很好 得 解 释 了标本 与抗 一A 

正反 检测结 果均 一致 , 此结 果 用 于建 立 ABO基 因测 

也有 弱凝 集 , 是 因为这 样 的人 群 在表 达 B糖基 转 移 

序 的基础 。2例母 子关 系标本 的红 细 胞 与抗 一B发 

酶时少 量 得 合 成 了 A血 型物 质 l  。血 清 学 检 测 方 

生较 强凝 集 ( 4+); 与 抗 一A发 生 弱凝 集 (1+)反定 

法容易 在 特 殊 血 型 的 诊 断 中出 现 误 判 或 结 果 不 明 

型血清 中含有 抗 一A。红 细胞 上 H抗 原 含量 接 近 O 

确¨ 6, 6 _或表 现 为 ABO亚型 [  。我们 利用 分 子生 物 学 

型细 胞 , 明 显超 过 正 常 B型 细胞 上 H抗 原 的 含量 ;  

的方法 直接 对标 本 测 序 就可 以揭 示其 基 因背 景 , 也 

吸收放 散 试 验 可 检 出 红 细 胞 上 的 A抗 原 , 结 果 见 

有 可能 发现新 的基 因多态 性 。对 B(A)这样 血 型 的 

表1  

准确 、 及 时定 型非 常重要 ,只有 准确诊 断才 能 为临床  安全输 血提供 保 证 , 避 免 发 生 医疗 纠 纷等 。另外 对  表 1 血 清 学检 测 结 果 

红细胞反应 

血型 中亚型 的资 料 积 累 , 能 够 更 好 地解 析 血 型 遗传  血清反应 

抗 一A  抗 一Al 抗 B 抗 一H  Ac  

Oc  

母 亲  1+  

一  

4+  4+  

l+  

一 

一  

JL子  1+ 

4+

1+ 

一 

一 

4+ 

2. 2  ABO血 型 基 因测序 结 果 一

Bc  

30例 正 反定 型结 果 

规律 , 为人 类学研 究做 出更 多贡献 。   参考文献 :   [1 ]S c he nk el — Br un ne rH. ABO  s ys t e m. Hu ma n  b l o od   g r o ups   c h emi c a l   a nd  bi o—   c he mi c l  a b a s i s   o f   a nt i g e n  s pe c i f i c i t y[ M]. 2e d. Ne w Yor k: Sp in r ge r   wi e n,   2000.1 45—147.  

[ 2]Re i d  ME.Adv an c es  i n  b l o od  g r o upi n g  t he   mo l e c ul a r  b i ol o g y  a pp r oa c h.  

致 的标本 测序 结 果 也 同 血清 学 检 测 结果 , 说 明测 

Smi t  Si bi ga C Th,Kl ei n H G,eds.Mol ec ul ar  biol ogy i n bl ood t r ans fusi on 

序方 法确 立 。2例母 子关 系标本 的测 序结 果 均 含有 

正常的 0。等位基 因, 而他们 的 B等位基 因均在正常 

E M  J. Kl u we rAc  ̄e ge   Publ i s he r s, 2 00 0. 1 3—35.   [3]Ven g el e n — Ty l er   V. ABO, H  nd a   l e wi s   b l oo d  g r ou ps   a n d  s t r u ct u r a l l y ̄l a t e d  a n t i g e ns .Tec h ni c a l  Ma nua l[M].Ne d.USA:Ame r i c n As a s o ci at i o n  o f  

B*1 01基 因序 列 的 基础 上存 在 单 碱 基 突变 803C—  G, 如测序 图 1所 示 。  

Bl ood Banks, 2002.282—285.  

[ 4]Ya ma mo t o   F, Mc Ne i l l   PD, Ya mamo t o   M, e t   a 1. Mol e c ul r  a g en et i c  a na l y s i s   o ft heABO  bl o d  o g r o u p  s y s t e m  3. A(x)a nd   B(A)a l l e l e s [ J]. Vo x  Sa ng,   1993,64:171.   《 

\  

[ 5] 徐先国 , 洪小珍 , 朱发 明, 等. Ci s AB血 型第 6、 7外显子及侧翼 内含 

\ l / \   V  

图1   B血 型 基 因测 序 结 果 图 

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[6] 喻

琼 ,吴国光 , 等. 一 个中国汉族 ABO血型 B亚型家系中发现 

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3 讨 论 

B( A)型是罕见的 ABO亚型 , 1 9 8 5年发现其表  型[  , 红细胞 遗传 学上认 为是 B型 , 红 细胞上 有正 

(收 稿 日期 : 2011—11—21)  

ABO血型测序法对B(A)血型等位基因的检测分析  
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