Issuu on Google+

MÉTODO HORIZONTAL PARA EL RECIIENTO SIN REVIVIDE Enterobacteriaceae. TECNICA POR RECLENTO DE COLONIAS en la norma NY V 08-054 (Octubre

1. Definicion: Enterobacteriuceae: Bacterias que fermentan la glucosa y dan una reacción oxidasa negativa cuando el ensayo se realiza segúri el siguiente metodo. 2.

Medios de cuHivo: Agar bilis cristal violeta y glucosa (VRBG). Agar glucuxadii (AG). Agai- iiutritivo (AN).

3. Reactiru: Reactivo para la prueba de la oxidasa. 4.

Siembra: Sembrar en una placa Petri 1 mL de muestra ifquida o 1 mL de dilución madre y vmer unos 15 mL de VRBG ri 45°C - 47°C. Una vez solidificado, cubrir con unos 5 niL del mismo medio. Dejar solidificar en incubar a ?O°C f I°C durante 24 h f 2 h. Repetir la operación con 1 111L de cada una de las sigiiientes diluciories decimales.

5.

Recuento:

En las placas que contengan merios de 150 colonias,contar aquellas con un dihnetro mayor o igual que 0,5 mm,de color rojo violeta y ü veces r r i d ~ ~ d ades una halo de precipitaci6n del misrriri color. Consideraremos estas colonias conlo presuntas Enterobacteria-

ceae. Tomar cincri colonias características de cada placa retenida y sembrarlas por separado en 1.11zcasde AN. Incubar a 30°C f 1°C diirante 24 h I 2 h.

6 . Confirmación bioquimica:

Se realiza cori cada una de les colonias aisladas. La pmeba es positiva si al cabo de 10 sg aparece una culoraci6n violeta.

Pruebu d~f~'rnrentaciún de la glucosa: Sembrar por picadura en tubos de AG a partir de cada una de liii cepa5 oxidasa Ej. incubar a 37°C f 1'C durante 24 h. La pnieba es positiva si en la totalidad del tubo aparece una coloración ain;irilla.


Retener las placas que contengan un móitimo de 130 colonias características y no característicaa al nivel de dos diluciones sucesivas (una placa debe contener un mínimo de 15 colonias características). Calcular el núinero N de Enterobacteriaceae identificadas (oxidasa 8 y glucosa O)mediante la expresiiin:

Calcular el númem N de Enterobacteriaceae identificados presentes en la muesba pre blema, como media ponderada a partir de dos dilucione~sucrsivíis, con I n expi-esión:

l4

Consultar el PNT - AL - 002 de expresioii de resultados.


MÉTODOHORIZONTAL PARA EL RECUENTO SIN REVIVIFICACI~N

DE Enterobaderiaceae. T ~ C N I C APOR RECUENTO DE COLONIAS

Basado en la norma NF V 08-054 (Octubre 1993)

PNT-AL-009

Muestra liquida 1 p

Dilud6n madre (lW1)

-

Verter 15 mL de VRBG m 4FC47"C

Cubrir con iaas 5 mL & VRBG

Incubar a 300C I 1°C durante L4 h I2 h

v

-'

Retener las nlncas con memis dc 150 rolonim

(

(

Contar 1PS rolonips de wmntas E n k r o b a c t e r h

-

-r

y

r

y

r

y

v

7

*

Incubar a 37°C 1-c durante M h i 2 h l

1

nfirmació

l

*

incubar a 3YC 1°C durante 24 h 2 2 h

I


Pnt al 009