Page 1

72

METODOS DE ANALISIS MICROBIOL~GICOSDE ALIMENTOS

PARA EL RECUENTO SIN R E V I V I F I C A C I ~ N DE Enterohacteriaceae. TECNICA POR RECUENTO DE COLONIA S

PNT - AL - 007.2

Basado en la norma ISO 7402 (Diciembre 1993)

1. Definición: Enbercihacteriaceue: Bacterias que fementan la glucosa y dan una reacción oxidasa negativa, cuando el ensayo se realiza según e1 siguiente inétudo.

2. Medios de cultivo: Agrir bilis cristal violeta y glucosa (VRBG). Agar glucosado (AG). Agar nutritivo (AN).

3. Reactivo: Reactivo para la prueba de la oxidasa. 4.

Siembra: Sembrar por duplicado 1 rnL de la muestra líquida o 1 mL de dilución madre en sendas placa$ Peti-I. Vener urios 15 iiiL de VRBG a 45°C I 1°C. Una vez solidificridu,cubrir con 10-15 mL del mismo medio. DCJNsolidificar e incubar a 37°C f 1°C durante 24 h f 2 h. Repetir esta operación con 1 mL de cada una de las siguientes diluciories decimales.

5.

Recuento: En Las placas que contengan menos de 150 colonias, contar aquellas que tengan un di& nirtro ni~iyoro igual que 0,5 mm, de culur rojo-violeta y a veces rodeadas de iiti lialo de precipitacion o mucosas. Consideraremos estas colonias como presuntas Eriterobactzna-

ceae 9. Tomar cinco colonias caracteristicas de cada placa retenida y sembrarlas por separado en placas de AN. Incubara37"Cf l0Cdurante24 h i 2 1 i .

6. Confirmación bioquimica lo: Prueha de tu oxilkrsu: Se realiza con cada una de las colonias aisladas. La prueba es positiva si al cabo de 10 sg aparece una coloracibn violeta. Prueba de fernzenturidn de la glucosu: Sembrar por picadura en tubos de AG a partir de cada una de las colonias aisladas oxidasa @.

Incubar a 37OC f 1°C durante 24 h f 2 h. La prueba es positiva si en la totalidad del tubo ;ilxuece una coloración amarilla.

'

Si la mitad de la superficie & la placa esd invadida, la determinación se coniidrrarj siii valor. Si la zona invadida fuera iiiferior a la m i t d de la superficie de la placa, se efectúa el recuento dc coloiúas sobre la zona clara y se extnpulii este valor a la ~ u p e ~ ctotal. ie "' Estas oruebas nueden realizarse simultáneamente con la siembra en AN. s c g h cnterio del laboratorio.


7.

Expresiíin de resultados ":

Si al niencis el 80% de las colonias características seleccionadas son ccinfirmadas como Enterobactetiaccae (es decir, oxidasa O y glucosa @), el numero & bacterias presentes cera el encontrado 21151 recuento {ver punto 5). Si no es así. calcularemos el número a partir del porcentaje de colonias oxidasa O y glucosa O sobre el nUmero total de colonias selecciriiiadas. La expresión que nos permite cdciilar el núrnem LVde Enterobacteriaceae por mililitro o por gramo de producto es:

"

-

Consultar el PNT - AL 002 & expresi6n de resdtados.


METODO HORIZONTAL PARA EL RECUENTO SIN REVIVIPICACI~N DE Enterobacteriaceac. TÉCNICAPOR RECUENTO DE COLONIAS

PNT - AL - 007.2

Basado en la norma E0 7402 (Diciembre 1993)

Muesm liquida 100 Dilución madre (lP1)

Verter 15 mL de VRBG a 459C f lec

Cabrir cw 10-15 mL & VRBG

Iaeuimra37*Cf l0CdunnteZ4bf 2 h

Contar las wlanips de presuntos Entttohcttriaceae

e

Tomsr 5 wlonims canctdaks de cada plnm Y sembrar en AN

m,

,a,

Incubar e 37'C f 1°C d m t e 24 h i 2 h

Pnt al 007 02  
Read more
Read more
Similar to
Popular now
Just for you